肾结核患者血清和尿液人软骨糖蛋白-39 表达水平及其诊断和预后评估的价值

安海霞 李秀君 杨家鑫 陈怀安

河北北方学院附属第一医院泌尿外科，河北张家口 075000

肾结核的临床症状比较复杂，如脓尿、腰痛、膀胱刺激症状以及血尿等，如合并其他器官结核时，也会出现发热、消瘦等临床特征。当肾结核发病比较严重时，若同时伴有对侧[1-2]。肾盂积水，也会对患者的肾功能带来较大影响，甚至引发尿毒症。临床诊断肾结核的传统方法则是根据患者的临床体征及表现，并进行静脉尿路造影或者尿实验室抗酸杆菌检查等[3-4]。人软骨糖蛋白-39 可存在于多种组织和肝脏组织内，参与了多种疾病的进展，临床有研究显示，与多种恶性肿瘤生存率相关，属于组织纤维化标志物[5-6]。目前，临床主要在慢性肝炎、肿瘤疾病中研究人软骨糖蛋白-39水平情况，在肾脏疾病中研究较少，本研究采用酶联免疫吸附试验检测肾结核患者血清和尿液人软骨糖蛋白-39 浓度，探讨其在肾结核诊断和预后评估的价值，报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择河北北方学院附属第一医院（以下简称“我院”）泌尿外科2019 年5 月—2020 年5 月收治的80 例肾结核患者作为观察组，另选取同期我院体检的50 名健康人群作为对照组，均经过患者知情同意。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。见表1。纳入标准：①基础信息完整，参与整个实验步骤；②尿常规检查结果中血沉指标出现变化，尿蛋白、白细胞及红细胞异常，临床症状主要表现为尿频、尿痛和尿急；③经过手术病理、尿常规等确诊。排除标准：①精神异常、妊娠期女性及严重心脏病变；②合并尿路感染；③中途因各种原因退出。本研究经我院医学伦理委员会批准。

表1 两组一般资料比较

1.2 研究方法

采集研究对象清晨首次中段尿标本以及血液标本，指导其在采集标本前需空腹至少10 h。采集病患静脉血3 mL，将其离心分离处理（3000 r/min，半径为10 cm），时间15 min，收集上层血清放于-80℃的冰箱中保存。采集晨起首次中段尿液10 mL，同样将其放置在3000 r/min 的离心机中进行持续15 min的离心处理，离心半径为10 cm，随后收集上层清液5 mL，并将其置入无菌试管中，并放置在-80℃冰箱中进行保存。使用时需先将标本从冰箱中取出，采用酶联免疫吸附测定法检测每组患者血清标本以及尿液标本中人软骨糖蛋白-39 水平，人软骨糖蛋白-39 试剂盒采购至上海一基生物试剂有限公司（货号：YJ11081），全部操作均严格依据试剂盒使用说明进行。采集肾结核手术后病理组织和病变部位4 周正常组织标本，利用免疫组化法SP 法分别检测每组患者标本组织中人软骨糖蛋白-39 表达情况，人软骨糖蛋白-39 多克隆抗体采购至北京百奥莱博科技有限公司（货号：K11424-VHX），SP 检测试剂盒采购至北京索莱宝科技有限公司（货号：SP0041）。

1.3 观察指标

①观察两组血清以及尿液中人软骨糖蛋白-39水平。②观察肾结核病患病变组织、四周正常组织中人软骨糖蛋白-39 表达情况。选择我院2 名临床经验丰富的检验科医师进行阅片，其中阳性细胞染色观察指标是：0 分代表未染色；1 分代表呈现淡黄色，2 分代表呈现棕黄色，3 分代表呈现棕褐色[7]。每张切片分别挑选5 份典型高倍镜视野，计算阳性细胞百分比（所有组织细胞中阳性细胞所占比例）。其记分标准：1 分代表阳性细胞百分比1%～10%；2 分代表阳性细胞百分比＞10%～50%；3 分代表阳性细胞百分比＞50%～80%；4 分代表阳性细胞百分比＞80%～100%[8]。将染色评分与阳性细胞百分比评分相加来实施半定量分析，分析标准：0 分代表-；1～2 分代表+；3～5 分代表++；6～7 分代表+++[9]。③比较聚合酶链反应（PCR）检测方法，探讨人软骨糖蛋白-39 的诊断效能。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0 统计软件进行数据分析。计量资料用均数±标准差（）表示，采用t 检验。计数资料用百分比表示，采用χ2检验。应用ROC 曲线分析人软骨糖蛋白-39、qRT-PCR 对肾结核的诊断效能。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组尿液以及血清标本中人软骨糖蛋白-39 水平比较

观察组尿液以及血清标本中人软骨糖蛋白-39水平高于对照组，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）。见表2。

表2 两组尿液及血清标本中人软骨糖蛋白-39 水平比较（pg/mL，）

表2 两组尿液及血清标本中人软骨糖蛋白-39 水平比较（pg/mL，）

2.2 不同组织肾结核病变组织、四周正常组织中人软骨糖蛋白-39 表达比较

肾结核病变组织中人软骨糖蛋白-39 表达水平明显高于四周正常组织，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表3。

表3 不同组织肾结核病变组织、四周正常组织中人软骨糖蛋白-39 表达比较[例（%）]

2.3 人软骨糖蛋白-39、qRT-PCR 对肾结核的诊断效能

人软骨糖蛋白-39 ROC 曲线下面积为0.928（95%CI：0.902，0.971），截取值为0.5631，阳性预测值为51.25%（41/80），灵敏度为76.25%（61/80），阴性预测值为96.25%（77/80），特异度为93.75%（75/80）。qRT-PCR ROC 曲线下面积为0.793（95%CI：0.741，0.854），截取值为0.5075，灵敏度为83.75%（67/80），特异度为65.00%（52/80），阳性预测值为21.25%（17/80），阴性预测值为97.50%（78/80）。人软骨糖蛋白-39 ROC 曲线下面积大于PCR，差异有统计学意义（Z=7.591，P ＜0.001）。见图1。

图1 人软骨糖蛋白-39、PCR 的ROC 曲线

3 讨论

随着结核病发病率的增加，肾结核的发病率也呈现出大幅度上升的趋势，但是由于该病在发病初期没有较为典型的临床症状，并且声像图表现也存在较大的差异，并且很多患者在发病初期缺乏超声影像学的特异性变化[10-11]。

人软骨糖蛋白-39 由单核细胞向巨噬细胞分化产生，可由多种细胞分泌，是一种急、慢性炎症和组织重塑的标志物，活化的巨噬细胞具有分泌人软骨糖蛋白-39 的功能，人软骨糖蛋白-39 通过干预血管平滑肌细胞移和重组来调整节血管内皮细胞的形态[12-13]。人们最早在牛的乳汁分泌物中发现，有研究报道人软骨糖蛋白-39 在各个正常组织中表达，包括脂肪、肾上腺、骨髓、骨骼、肝、肾、胃肠道、淋巴、神经组织、卵巢等[14-15]。在人不同炎症组织、巨噬细胞亚群、血管平滑肌细胞、细胞外基质重塑的血管平滑肌细胞中都可发现人软骨糖蛋白-39 的存在[16-17]；人软骨糖蛋白-39 生理机制较为复杂，目前研究尚未完全阐明其作用机制[18]。研究显示，健康人群血浆中人软骨糖蛋白-39 虽然存在，但浓度较为固定，不受生理活动影响[19]。也有研究显示[20]，人软骨糖蛋白-39 其生理作用类似于胰岛素样生长因子1（IGF-1），以一种剂量依赖方式刺激组织细胞如成纤维细胞、滑膜细胞及软骨细胞等人体的连接组织细胞，可与IGF-1 发生协同作用。此外，人软骨糖蛋白-39 还在细胞外基质形成和基质重构中发挥着至关重要的作用。可以抑制成纤维细胞及软骨细胞中肿瘤坏死因子α 及白细胞介素（IL）-1 诱发的p38 和SAPK/JNK MAPKS 通路，从而减少IL-8 及基质金属蛋白酶，这一过程由PI3K 调节[21-22]。本研究结果显示，观察组血清以及尿液标本中人软骨糖蛋白-39水平高于对照组（P ＜0.05），肾结核病变组织中人软骨糖蛋白-39 表达水平明显高于四周正常组织（P ＜0.05），人软骨糖蛋白-39 ROC 曲线下面积大于PCR（P ＜0.001）。分析原因：肾结核涉及包括炎症、氧化应激、多种细胞因子的作用及信号级联、细胞凋亡、成纤维细胞增殖和活化等多种因素，使间质细胞增殖，胶原等细胞外基质合成增多，降解减少[23-24]。与其他脏器结核具有相同特征，人软骨糖蛋白-39 是否在肾结核中发挥一定作用，尚鲜见报道。因此，在肾结核患者尿液和血清中人软骨糖蛋白-39 水平显著高于普通人群。本研究中，肾结核患者病变组织中人软骨糖蛋白-39水平显著高于四周正常组织（P ＜0.05）。这可能与人软骨糖蛋白-39 参与肾结核的发生、发展有关。人软骨糖蛋白-39 其生理作用类似于IGF-1，故提示人软骨糖蛋白-39 可能参与了肾结核的发生发展，为促纤维化因子，其可能的作用机制如下：以一种剂量依赖方式刺激组织细胞如成纤维细胞、滑膜细胞及软骨细胞等人体的连接组织细胞。可与IGF-1 发生协同作用[25]。人软骨糖蛋白-39 还能调节成纤维细胞及滑膜细胞的有丝分裂，这一过程主要是通过磷酸化细胞外调节蛋白激酶（ERK）1、ERK2 和蛋白激酶B，激活MAPK 信号通路和磷脂酰肌醇3-激酶信号通路。

综上所述，肾结核患者人软骨糖蛋白-39 水平成显著升高趋势，通过了解患者机体内人软骨糖蛋白-39水平可对肾结合进行初步诊断。