喉癌组织中Survivin的表达及与凋亡相关因子水平的相关性研究

文 娟

湖南省湘潭市中心医院病理科 411100

喉癌是头颈家族中比较常见的一种恶性肿瘤，主要的临床表现为声音嘶哑、咳嗽、异物感等，严重者会出现转移，危及患者生命安全[1]。并且该病病因复杂，形成过程也比较复杂，涉及基因、外界环境等因素。随着基因医学的快速发展，喉癌基因研究成为新的研究热点。同时有研究报道[2]，喉癌的发生、发展与基因的表达密切相关。凋亡相关因子能够通过抑制Caspase活性，参与调解核因子NF-κB，起到抑制细胞凋亡的作用[3]。另外，Survivin也是凋亡抑制蛋白家族成员，与其他凋亡抑制蛋白家族成员比较，结构简单，特异性强[4]。本文选取2019年1月—2020年1月诊治的94例喉癌患者与94例声带息肉患者作为观察对象，旨在分析喉癌组织中Survivin的表达及凋亡相关因子水平的相关性。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年1月—2020年1月诊治的94例喉癌患者(观察组)与94例声带息肉患者(对照组)作为观察对象。观察组男65例，女29例；年龄38～64岁，平均年龄(51.24±10.27)岁；病变部位：声门上型41例、声门型32例、声门下型21例；分化程度：中低分化52例、高分化42例；TNM分期：Ⅰ ～Ⅱ期51例、Ⅲ ～Ⅳ期43例；淋巴结转移：无转移71例、有转移23例。对照组男64例，女30例；年龄38～65岁，平均年龄为(51.23±10.30)岁；病变部位：声门上型40例、声门型33例、声门下型21例。两组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 选择标准 (1)纳入标准：①观察组经术前活检确诊为喉癌者，对照组经频闪喉镜确诊为声带息肉者；②首次接受治疗者；③知情本次研究者。(2)排除标准：①精神障碍者；②接受过专业发声或歌唱学习者；③不配合本次研究者。本次研究获得我院伦理委员会的认证。

1.3 试剂及药品 从上海研卉生物科技有限公司购买单克隆鼠Survivin、p53、bcl-2、caspase-3抗体。武汉华美生物工程有限公司购买从免疫组染色(SP)试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒。

1.4 检测方法 先用10%甲醛固定喉癌组织标本和声带息肉组织标本，然后用石蜡包埋进行切片，切片厚度为4μm，并用免疫组织化学SP染色处理(先脱蜡水化，用10%H2O2封闭10min，在pH=6.0的柠檬酸盐缓冲液中行高温高压抗原修复并加血清封闭；然后加一抗孵育，用DAB染色，苏木素复染，脱水，透明封片)。选取自制磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗设定为阴性对照，以阳性组织切片设定为阳性对照，按照购买试剂盒的操作说明进行操作。涉及仪器包括石蜡切片机、显微镜、电热恒温干燥箱等。

采用免疫组织化学法测试Survivin及凋亡相关因子(p53、bcl-2、caspase-3)的表达。在400倍镜下随机发现500个细胞中Survivin、p53、bcl-2、caspase-3阳性细胞>5%判定为阳性，≤5%判定为阴性。其中细胞质或/和细胞核出现淡黄至棕黄色颗粒判定为Survivin阳性细胞；细胞核出现棕黄至褐色颗粒判定为p53阳性细胞；细胞质/和细胞膜中出现棕黄至褐色颗粒判定为bcl-2阳性细胞；细胞质出现淡黄至棕黄色颗粒判定为caspase-3阳性细胞。

2 结果

2.1 喉癌组织中Survivin的表达与病理特征的关系 检测结果显示，观察组中Survivin阳性67例，阴性27例。观察组中高分化、TNM分期Ⅲ ～Ⅳ期、有淋巴结转移的Survivin阳性表达患者比例显著高于Survivin阴性表达患者比例，差异具有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 喉癌组织中Survivin的表达与病理特征的关系[ n(%)]

2.2 两组组织中Survivin及p53、bcl-2、caspase-3的表达 观察组的Survivin、p53、bcl-2阳性率显著高于对照组，caspase-3阳性率显著低于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 两组组织中Survivin及p53、bcl-2、caspase-3的表达[ n(%)]

2.3 喉癌组织中Survivin及p53、bcl-2、caspase-3的阳性表达率的相关性分析 经Spearspon相关性分析，喉癌组织中Survivin的阳性表达与p53、bcl-2阳性表达呈正相关性；与caspase-3阳性呈负相关性。详见表3。

表3 喉癌组织中Survivin及p53、bcl-2、caspase-3的阳性表达率的相关性研究[ n(%)]

3 讨论

喉癌是发生在喉部的恶性肿瘤，发病率占全身癌症的1%～5%。该病早期诊断，治疗方式较多，且治疗效果较佳。但是喉癌早期临床症状往往不明显，影像诊断时常为晚期。目前临床上多用基因因子进行早期诊断，其中Survivin具有肿瘤特异性，只表达于肿瘤和胚胎组织，且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移密切相关，被广泛应用于肿瘤的早期诊断中[5]。本文结果显示，喉癌组织中高分化、TNM分期Ⅲ ～Ⅳ期、有淋巴结转移的Survivin阳性表达患者比例显著高于Survivin阴性表达患者比例。

随着医学研究的深入发展，有研究报道[6]，细胞凋亡失衡与肿瘤的发生、发展密切相关。而p53、bcl-2、caspase-3是常见的凋亡相关因子，其中p53的生物活性较高，与DNA的复制和修复有密切的关系，对促进细胞分裂增生具有重要的作用；bcl-2是细胞凋亡的拮抗基因，能够延长细胞寿命；caspase-3是细胞凋亡过程中的一种重要效应因子，能够促使细胞失活[7]。说明p53、bcl-2对喉癌肿瘤细胞的增长和存活具有促进作用，而caspase-3促进喉癌肿瘤细胞失活。并且相关研究报道[8]，喉癌组织中Survivin、p53、bcl-2的阳性表达明显高于正常组织，caspase-3阳性表达明显低于正常组织。与本次研究的喉癌组织中的Survivin、p53、bcl-2阳性率显著高于声带息肉组织，caspase-3阳性率显著低于声带息肉组织相似。并且经Spearspon相关性分析，喉癌组织中Survivin的阳性表达与p53、bcl-2阳性表达呈正相关性；与caspase-3阳性表达呈负相关性。

综上所述，Survivin参与喉癌的发生、发展和转移，Survivin的阳性表达与p53、bcl-2阳性表达呈正相关性；与caspase-3阳性表达呈负相关性。