牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA试验和牛结核菌素PPD试验检测奶牛结核病的探讨

朱建华/内蒙古突泉县动物疫病预防控制中心 137500

王冰/内蒙古阿尔山市动物疫病预防控制中心 137805

李然/内蒙古兴安盟农牧业信息中心 137400

韩平 曾繁钢/内蒙古兴安盟动物疫病预防控制中心 137400

律伟/内蒙古兴安盟突泉县学田乡综合保障和技术推广中心 137400

结核病是由结核分枝杆菌引起的人畜共患的一种慢性传染病。其病理特点是在多种组织器官形成肉芽肿和干酪样坏死、钙化结核病变。牛结核病主要由牛型、人型和禽型结核分枝杆菌引起，特别是奶牛最易感染本病。奶牛养殖做为经济价值高，直接关系到我县农牧民的切身利益，虽然2003 年全县范围内奶牛存栏100%检测过结核病，但随着奶牛业不断发展扩大，引进奶牛的同时，此病也被带入，已威胁到奶牛业和从业相关人员的健康。

结核病是古老的疾病，在人畜间流行已有千年的历史，对人畜的危害极大。因此，长期以来人类为了搞清它的病因，发生和发展规律，以至控制和消灭它都进行了不懈的努力。然而真正获得重大突破还仅是近百年的事。1882 年kcons 确定了结核病是由结核杆菌引起的，并分离出结核杆菌，到目前人结核病的检菌率为75～80%，说明还有很大一部分病人没有被检查出来。兽医工作落后于人医工作，这是公认的事实。动物的结核病（特别是奶牛）诊断一直沿用结核菌素变态反应试验，最初是OT 后改进为PPD。美国W、T 休伯特等70 位专家教授1930 年主编《人兽共患病》1982 年已第六版，是美国权威性著作，书中提出“...各种血清学试验对动物结核病的诊断价值不大”。1976 年，NassauLLs 等，首先把ELISA 应用于人结核病的诊断，随后NichaLLs 等研究证实，活动性结核病人体内出现一定量的特异性抗体属于IgG类，Lenzini 还发现，结核病人的细胞免疫与体液免疫存在分离现象，即细胞免疫病变加重而减弱，体液免疫随病变加重而增强，从而为应用血清学于活动性结核病的诊断提供了理论依据。1982 年的全国结核病防治学术会提出对结核免疫学进行研究，寻找灵敏特异的血清学检查方法，以便提高诊断水平，值时，国内专家们亦开展以PPD 或聚合OT 结核病菌Ags 为抗原的酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验检测血清抗体IgG 类水平的研究。

1 试验动物

同一奶牛养殖小区内的3 个奶牛养殖户，经牛结核菌素检测阳性牛及同群牛结核菌素检测阴性牛，共计29 头奶牛。

2 试验结果

对29 头结核阳性牛同时进行牛结核菌素PPD 试验和牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA 试验进行检测，检测结果完全符合25 头，总体符合率82.6%.其中有2 头牛牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA 试验进行检测呈阳性反应，牛结核菌素PPD 试验呈阴性反应；有2 头牛牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA 试验进行检测呈阴性反应，牛结核菌素PPD 试验呈阳性反应。结果详见表1：

3 讨论与小结

3.1 通过试验发现，有2 头牛在临床PPD 试验阴性，而牛结核γ-干扰素应答阳性反应，说明这2 头牛已经感染牛结核，但体内牛结核抗体未能达到PPD 试验量的要求，致使PPD检测阴性，造成临床误诊；另外有2 头牛在临床PPD 试验阳性，而牛结核γ-干扰素应答阴性反应，这是由于临床检测者操作不当引起，造成临床误诊。以上两种误诊情况占检测29头牛中的13.8%。

3.2 试验结果表明，牛结核菌素PPD 试验有假阳性和假阴性的现象，在实际操作过程中，存在游标卡尺进行测量皮厚、结核菌素注射剂量及牛本身对应激的反应等不确定因素，导致在诊断过程中存在误差，但其价格低廉、操作简便等优点适合大规模监测使用。ELISA 试验是世界公认的特异性强、敏感度高的检测方法，就本试验采用的牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA 试验来说，也存在一定的缺陷，如循环的γ-干扰素水平过高，使用药物等因素引起的免疫抑制降低γ-干扰素对结核菌抗原的免疫应答等因素会影响试验结果，但均属于个例。总体来说，牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA 试验相对价格比较高、操作要求比严格，试用于试验诊断。

3.3 我县虽然于2003 年进行过奶牛结核病检测，但近年来随着奶牛业的发展，引进了大量的奶牛，引进奶牛的同时也把结核病传入，带病的奶牛持续排毒，污染环境，感染健康奶牛，造成循环感染，针对这种情况，我们做了《牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA 试验和牛结核菌素PPD 试验两种试验方法检测奶牛结核病的探讨》，通过试验，我们认为牛结合菌素试验更适合农村牧区大规模检测奶牛结核病。□