体外核酸扩增技术检测沙眼衣原体和淋球菌采用不同标本的比较分析

吴英

（上饶市妇幼保健院检验科，江西 上饶 334000）

沙眼衣原体（CT）和淋球菌（NG）被认为是全球引起性传播疾病（STD）的首位和第二位的病原体，男女均可感染[1-2]。CT、NG具有无症状感染的特点，若未经治疗，女性感染后会通过母婴垂直传播，感染率＞50%，还可能诱发不孕、异位妊娠、慢性疼痛等并发症[3-4]。早期准确筛查CT/NG并尽早治疗，可治愈CT/NG感染。培养法、如胶体金法等传统的检测方法存在操作较繁琐、敏感性较低、易被杂菌污染、耗时长等缺点。体外核酸扩增技术（NAATs）-实时定量聚合酶链式反应（PCR）法检测CT/NG感染内质控、双区域扩增、优运算能准确解读检测结果，以准确筛查和临床确诊有症状或无症状的CT/NG感染患者。本研究旨在分析NAATs检测不同标本中CT和NG效能，为临床干预提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019年1月至2020年6月于本院就诊的3 926例疑似STD女性患者为研究对象，年龄15～79岁，平均年龄（34.26±3.21）岁。纳入标准：存在异味、阴道分泌物增多等症状，且少数患者伴有下腹痛、尿频等；患者或家属知情同意，并签署知情同意书。排除标准：入组前接受抗生素治疗者；处于月经期、妊娠期或无性行为者。本研究经医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 无菌操作采集标本。采集入组患者清晨首次尿液1.5 mL，将其与CobasPCR尿液样本收集于盒中贮存，液体混合，在2～30℃环境下保存待测。窥器暴露宫颈后，拭去宫颈表面黏液，在宫颈内插入无菌棉拭子，深度约为2 cm，捻动拭子，旋转1周，约停留30 s，采集宫颈分泌物。将获取的标本迅速置入CobasPCR尿液样本收集盒中，在2～30℃环境下保存待测。

1.2.2 标本处理 在含有无菌0.9%氯化钠溶液1 mL的一次性试管中加入棉拭子，充分洗脱后贴管壁挤出水分。全部液体吸取至1.5 mL的EP管中，12 000 rmp离心5 min，去除上清液，将DNA提取液50μL加入沉淀，充分振荡混匀，行10 min左右100℃恒温处理，12 000 rmp离心5 min，备用。取2μL上清液加入PCR反应液中，设置空白对照和阴阳性对照。以NAATs测定CT、NG，严格按照试剂说明书操作。仪器为美国ABI公司7500荧光定量PCR仪，试剂盒为罗氏诊断Cobas4800CT/NG检测试剂盒。

1.3 观察指标 ①分析尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染率差异。②分析尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染率一致性。③分析CT、NG感染年龄分布情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，尿液和宫颈拭子标本中CT感染率一致性使用Kappa检验，Kappa值≥0.75表示一致性良好，0.4～0.74表示一致性尚可，＜0.4表示一致性不佳，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染率比较 尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染率比较差异无统计学意义，见表1。

表1 尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染率比较[n（%）]

2.2 尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染率一致性分析Kappa检验显示，尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染的一致性良好（Kappa=0.814、0.856，P=0.000、0.000），见表2～3。

表2 尿液和宫颈拭子标本中CT感染情况

表3 尿液和宫颈拭子标本中NG感染情况

2.3 CT、NG感染年龄分布情况 CT感染多见于31～40岁人群，其次为41～50岁人群；NG感染多见于＞50岁人群，其次41～50岁人群，见表4。

表4 CT、NG感染年龄分布情况分析[n（%）]

3 讨论

STD是一组以性行为为主要传播途径的疾病，包括非淋菌性尿道炎、艾滋病、梅毒、淋病等20多种疾病[5]。随着不洁性行为所致的泌尿生殖道疾病快速蔓延，加上人们自我保护意识薄弱，STD感染率逐渐升高。CT、NG是诱发STD的常见病原体，主要通过性接触传播，在人体泌尿生殖道寄生，可诱发盆腔炎、尿道炎、输卵管炎等，病情严重时可导致患者出现不孕、自然流产等[6-7]。故早期准确筛查CT、NG，实施相应的防治措施至关重要。

NAATs-实时定量PCR法是一种实时荧光检测技术与核酸恒温扩增技术相结合的新型检测方式，具有低污染、高特异性、高敏感性、反应稳定、操作方便、可定量、检测周期短等优点，能很大程度上克服培养法、涂片法、免疫法等传染检测方式的可靠性低、敏感性差、检测周期长等不足，便于临床及时判断病情[8-10]。本研究中，尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染率比较差异无统计学意义；Kappa检验显示，尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染的一致性良好（Kappa=0.814、0.856，P=0.000、0.000），提示NAATs-实时定量PCR法能准确、客观的检测CT、NG感染情况，不同标本中CT、NG感染率基本一致，可将尿液替代宫颈拭子实施CT、NG检查。尿液标本取材方便、快捷、简单，获取方式为非侵入性，能有避免宫颈拭子标本采集所致的泌尿生殖道损伤，减轻患者取样时的痛苦，患者更易于接受。本研究结果表明，CT感染多发生于31～40岁人群，其次为41～50岁人群；NG感染多发生于＞50岁人群，其次为41～50岁人群，分析原因为，可能与该年龄段受检人群平均受教育程度相对不足、自我保护意识淡薄、缺乏性卫生知识等因素有关。NAATs-实时定量PCR法检测时，1份标本能同时检测多种病原体，无需采集多份标本，以免因标本间差异影响诊断结果，诊断更为客观准确。社区应加强、重视性卫生健康教育工作，定期实施相关知识健康宣教，提高认知度；临床鉴别泌尿生殖系统疾病时，需加强筛查CT、NG病原体无症状携带者，早发现、早治疗，提高CT、NG感染治愈率。

综上所述，NAATs-实时定量PCR法能准确、客观的检测CT、NG感染情况，指导临床制定防治措施，避免STD传播。