参芪血脉通丸ICR小鼠经口给药急性毒性试验研究

王晓娟，孟 菲，王爱青

（1.洛阳市中医院药学部，河南 洛阳 471003；2.河南中医药大学药学部临床药学室，河南 郑州 450012；3.洛阳市药检所，河南 洛阳 471003）

参芪血脉通丸具有行气活血，化瘀通脉的功效，是洛阳市中医院（涧西院区）自发研制、使用了20年的口服丸剂，临床多用于治疗气滞血瘀、风寒湿痹。临床多用于治疗手足麻木，中风，脉管炎，颈肩腰腿疼痛。考虑到配方中有草乌（制）、川乌（制）、斑蝥（炒）等含毒性成分的中药，有必要开展有关毒理研究。我院前期对制剂的化学成分、制剂工艺、质量标准和药理药效等进行了研究，基本明确了参芪血脉通丸的作用机理［4］。但是，有关参芪血脉通丸毒副作用的研究工作尚未展开。本研究用灌胃给药的方式考察了参芪血脉通丸单次给药的急性毒性反应，报道如下。

1 材料与方法

1.1 试验药物

参芪血脉通丸制剂（洛阳市中医院自制，批号20200302），医疗机构制剂注册标准。按参芪血脉通丸复方比例称取黄芪、银花藤、党参、制草乌、甘草、制川乌等，加水煎煮2次，第1次2h，第2次1.5h，过滤，收集滤液并浓缩。将斑蝥布包，与黑豆共煎煮，弃去斑蝥，黑豆与其余药材共干燥粉碎成细粉，过筛，混匀，以浓缩液为黏合剂，泛丸，打光，制成1000g水丸。

预试验分别以参芪血脉通丸16g/kg（最大给药量）、8g/kg、4g/kg、2g/kg剂量单次灌胃给予ICR小鼠参芪血脉通丸。给予受试物后，动物出现活动减少、俯卧不动、呼吸加快急促、步履不稳、翻正反射消失、抽搐等毒性反应症状。参芪血脉通丸16g/kg剂量组、8g/kg剂量组8/8例动物死亡，4g/kg剂量组3/8例动物死亡，2g/kg剂量组给药后未见动物死亡。据此，实验设计参芪血脉通丸各组给药剂量分别为8g/kg、6g/kg、4.5g/kg、3.4g/kg、2.6g/kg、2.0g/kg，组间比为0.75。试验用药配制方法为：将参芪血脉通丸分别配置成含原药材0.4g/mL、0.3g/mL、0.225g/mL、0.17g/mL、0.13g/mL、0.1g/mL的药液，供动物试验用。

1.2 动物

SPF级ICR小鼠60只，体质量15～20g，雌雄各30只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2016-0011。

1.3 方法

将ICR小鼠按体质量和性别随机均衡分为6组，分别为参芪血脉通丸8g/kg剂量组、6g/kg剂量组、4.5g/kg剂量组、3.4g/kg剂量组、2.6g/kg剂量组、2.0g/kg剂量组，每组10只，雌雄各5只。各组均以20mL/kg灌胃给药，给药前禁食14～16 h，给药后观察6 h，以后每天观察1次，持续观察14天。

一般状况观察：包括饮食、外观、行为、分泌物、排泄物等。记录所有动物的死亡情况、中毒症状及中毒反应的起始时间、严重程度、持续时间、是否可逆等。

体质量测量：分别于给药前及给药后第2、3、5、7、11、14天测定动物体质量。濒死或死亡动物也进行称重。

脏器检查：中毒死亡或濒死动物及时进行大体解剖，其它动物在观察期结束后颈椎脱臼处死进行大体解剖。大体解剖发现器官出现体积、颜色、质地等改变时，用10%中性福尔马林固定异常脏器并进行组织病理学检查。大体解剖检查脏器包括气管、食道、胸腺、肾上腺、胰腺、胃、肠（十二指肠、空肠、回肠、结肠、直肠）、心、肺、肝脏、脾、肾、脑、淋巴结、膀胱、前列腺、睾丸（连附睾）、子宫、卵巢。

统计学方法：根据动物死亡数量计算LD50。计算动物体质量的平均值和标准差，以（±s）表示。

2 结 果

2.1 一般状况观察

8g/kg剂量组：给药20min后8/10例动物（5♂，3♀）先后出现活动减少、呼吸加快或急促、步履不稳、低伏、俯卧不动、翻正反射消失、呼吸减慢或加深、抽搐、尿失禁中的多种状态，并于给药后4h内死亡。2/10例动物（♀）出现活动减少或俯卧不动的状态，但在3h内恢复，且在后续一般状态观察中未见异常。

6g/kg剂量组：给药57min后5/10例动物（2♂，3♀）先后出现活动减少、排稀便、步履不稳、低伏、俯卧不动、翻正反射消失、抽搐、尿失禁中的多种状态，并于给药后6h内死亡。3/10例动物（♂）给药后1h内先后出现活动减少，但于2h内恢复，且在后续一般状态观察中未见异常。2/10例动物（♂）状况无明显变化。

4.5g/kg剂量组：给药70min后2/10例动物（1♂，1♀）先后出现活动减少、排稀便、步履不稳、俯卧不动、低伏、呼吸减慢或加深、翻正反射消失、尿失禁中的多种状态，并于给药后6h内死亡。1/10例动物（♂）给药35 min后出现活动减少，并于5h内恢复。3/10例动物（1♂，2♀）在给药3 h后先后出现排稀便，但在给药后第2～14天一般状态观察未见异常。4/10例动物（3♂，1♀）状况无明显变化。

3.4g/kg剂量组：给药后1h内5/10例动物（2♂，3♀）先后出现活动减少的状态，但均于2h恢复，且在后续一般状态观察中未见异常。5/10例动物（2♂，3♀）状况无明显变化。

2.6g/kg剂量组：给药当天及给药后第2～14天动物一般状态观察未见异常。

2.0g/kg剂量组：给药当天及给药后第2～14天动物一般状态观察未见异常。

表1 ICR小鼠死亡情况结果 （n=10）

由上可知，参芪血脉通丸8.0g/kg可引起8/10例动物死亡，6.0g/kg剂量可引起5/10例动物死亡，4.5g/kg剂量可引起2/10例动物死亡，3.4g/kg、2.6g/kg和2.0g/kg剂量未引起动物死亡。据此，经计算参芪血脉通丸的LD50为6.2g/kg。

2.2 体质量测量

8.0g/kg剂量组：给药当天雄性动物全部死亡，未进行后续称重。雌性动物（2只）在观察期14天内体质量保持增长。

6.0g/kg剂量组：雄性动物（3只）及雌性动物（2只）在观察期14天内体质量均保持增长。

4.5g/kg剂量组：雄性动物（4只）及雌性动物（4只）在观察期14天内体质量均保持增长。

3.4g/kg剂量组：雌雄动物在观察期14天内体质量均保持增长。

2.6g/kg剂量组：雌雄动物在观察期14天内体质量均保持增长。

2.0g/kg剂量组：雌雄动物在观察期14天内体质量均保持增长。

表2 ICR雄性小鼠平均体质量情况 （g，±s）

表2 ICR雄性小鼠平均体质量情况 （g，±s）

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表3 ICR雌性小鼠平均体质量情况 （g，±s ）

表3 ICR雌性小鼠平均体质量情况 （g，±s ）

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2.3 脏器检查

各组动物大体解剖肉眼观察均未见异常变化。

3 讨 论

参芪血脉通丸为口服制剂，在临床使用中未发现有不良反应。但是，考虑到该药配方中含有川乌、草乌、斑蝥等毒性中药饮片，虽经过炮制使用，安全性有一定保障，但仍应进行口服给药的毒理学研究，充分暴露潜在的毒副作用，保证临床安全用药。ICR小鼠是急性毒性试验常用的啮齿类动物之一，根据我国《药物单次给药毒性研究技术指导原则》（2014年5月），结合本试验特点选择使用该种动物。该动物背景资料丰富，通过试验所得的结果易于和同类药物比较。本试验动物使用的动物数量根据《药物单次给药毒性研究技术指导原则》要求确定，能满足统计学检验的要求。

文献报道，参芪血脉通丸所含的川乌、草乌水煎液灌胃小鼠后，会出现流涎、恶心、呕吐、腹泻、呼吸困难、手足抽搐、大小便失禁的情况，甚至出现呼吸衰竭、死亡的情况，主要的靶器官为心、肝、脾、肺、肾［1-2］。所含的斑蝥毒性成分主要为斑蝥素、斑蝥酸钠，中毒症状主要表现为消化系统、泌尿系统及中枢神经系统症状，无论灌胃或腹腔注射给药，均可引起小鼠吞咽困难、气喘、恶心、呕吐甚至休克死亡［2-4］。含有金银花灯苦寒类中药，容易引起引起稀便甚至腹泻［5-6］。研究结果与文献报道基本一致，参芪血脉通丸口服可以造成ICR小鼠活动减少、呼吸加快或急促、步履不稳、低伏、俯卧不动、翻正反射消失、呼吸减慢或加深、抽搐、尿失禁中的一种或多种状态，易引起胃肠道反应，且与给药剂量成正相关。