大型集约化种猪场猪瘟控制与净化的探讨

伍少钦 ， 秦荣香 ， 陆 江 ， 卢 剑 ， 肖有恩 ， 蒋志疆 ， 谢露露 ， 吴志君

(广西农垦永新畜牧集团有限公司 ， 广西 南宁 530022)

猪瘟是危害养猪业的重大猪病之一，每年给世界养猪业带来巨大的经济损失。猪瘟不仅影响种猪场本身猪群健康，同时影响母猪繁殖性能和对外销售种猪的健康度。良圻原种猪场作为种猪生产企业，十分重视猪瘟的控制和净化工作，由专人负责制订猪瘟控制与净化实施方案，2005年10月在核心种猪场(第二原种猪场，基础母猪规模1 200头)开展猪瘟逐步控制与净化方案的试点工作。方案中以检测猪瘟病毒，淘汰免疫缺陷和免疫耐受的种猪； 必要时用免疫荧光抗体或RT-PCR等方法检测猪瘟病毒。为做到核心群(场)的猪瘟净化，公司全体技术人员在猪场生物安全体系建设、猪瘟疫苗筛选、免疫程序制定和完善、核心种猪群的多次全群检测、所有后备猪抗体的合格准入、兽医实验室基础建设(增加设备设施、筛选和比较检测试剂和方法)等方面开展大量工作。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 猪瘟抗原、抗体ELISA 检测试剂盒(抗体试验盒判定标准:阻断值<30 为阴性;31～40为可疑;阻断值>40为阳性)，购自美国IDEXX公司；猪瘟疫苗，购自国内多家公司。

1.2 主要仪器 检测仪器包括不同规格的微量移液器 (瑞士SOCOREX、美国EPPENDORF 等)、美国 Biotek ELX 800 酶标仪、英国UVI凝胶成像系统、日本TaKaRa TP600 梯度PCR仪、美国Baker生物安全柜、微量振荡器(IKA)、高速离心机、离心管、一次性采血器等。

1.3 实验动物 断奶仔猪、保育猪、育肥猪、后备猪和生产母猪等，良圻原种猪场自繁自养。

1.4 猪瘟净化主要原理和方案 如果一个猪群体里持续多年保持没有猪瘟易感个体，就清除了猪瘟。首先，基础猪群的猪瘟抗体阳性率要在85%以上；第二，猪瘟抗体不合格个体补免疫苗6周后要达标，否则做淘汰处理；第三，补充后备猪的猪瘟抗体要100%合格。2005年，第二原种猪场季度抗体监测发现，该场符合猪瘟净化标准，决定以第二原种猪场为示范，开展猪瘟净化工作，以抗体检测为主，淘汰免疫耐受或免疫缺陷猪只，必要时辅以病原检测方法；期望通过2～3年完成核心场的猪瘟清除/净化。净化技术方案见图1。

图1 抗体为主的猪瘟净化技术方案

1.5 试验方法

1.5.1 猪瘟疫苗的筛选(2006年) 为评估各厂家猪瘟疫苗是否存在质量差异，特设此试验。选取第一种猪场断奶健康保育猪100头，随机分成试验组与对照组，试验前未免疫猪瘟疫苗。对照组50 d免疫ZM猪瘟脾淋苗，试验组50 d免疫YS猪瘟脾淋苗，免疫剂量均为2头份。分别于免疫后1个月和3个月，每组随机采血18～30头，评估猪瘟抗体。

1.5.2 母猪猪瘟抗体持续期试验(2006年) 为验证猪瘟疫苗能否维持一个繁殖周期，特在杨彭猪场和第一种猪场各固定一批母猪。在断奶前3天，免疫4头份的猪瘟疫苗(兔源组织苗)，分别在妊娠40～50 d、80～90 d和产后7～14 d(第一种猪场为断奶前3天)采血，检测猪瘟抗体。

1.5.3 产房仔猪超免试验(2006年) 产房仔猪是否超免，一直存在争议，为此选择4个独立生长育肥场开展超免与不超免的试验(A、B、C场和D场，前3个场常规免疫，D场超免)，免疫后分不同阶段评估猪瘟抗体。D场出生当天(0 d)接种2头份疫苗，其后4个场均在30 d和60 d各免疫4头份。A、B、C场和D场，每个猪场分别在一免前(4周)、二免前(7～8周)、 出保育(10周)、育肥12周、16～18周和20～22周随机抽取健康猪只10头，共240头，采血评估猪瘟抗体。

1.5.4 生长育肥猪免疫程序的制定(2006年) 生长育肥猪一般免疫2次，为定制个性化的保育免疫方案，特开展相应试验，即在常规30 d一免后，分别在50 d(对照组)和60 d(试验组)进行二免；以试验组二免6周后，同时采血18～20头健康猪只检测猪瘟抗体，评估免疫效果。

1.5.5 核心母猪场的3次全群检测(2005—2007年) 先对基础猪场按比例采血检测猪瘟抗体，若群体抗体符合净化标准，则进入3次全检检测阶段。对于首次检测不合格的猪只，再次免疫疫苗6周后检测，若还不合格，则进行淘汰处理。期间所有后备猪必须检测猪瘟抗体，执行合格准入原则。

1.5.6 保育猪猪瘟免疫1次或2次的对比试验(2010年) 因核心场完成猪瘟净化，为降低劳动强度，特开展保育猪免疫1次(60 d，2头份/次)和免疫2次(30 d和60 d，每次1头份)的大群对比试验；分别于免疫后1个月和3个月随机采血30头猪检测，比较二者的免疫效果。

1.5.7 保育猪只免1次猪瘟苗，定期监测出栏育肥猪抗体(2010—2019年) 每个月10号定期抽检各猪场快出栏育肥猪每栏2～3头，共18～20头，评估保育场猪瘟疫苗免疫效果，同时监控每批猪瘟疫苗质量。

1.5.8 异常猪只猪瘟的病原学检测(2007—2019年) 对临床上观察到的异常表现，比如母猪流产，公猪精液异常，保育猪发病或死亡等，采集对应样品(血清、病料或精液等)，送去兽医实验室检测猪瘟病毒。

2 结果

2.1 疫苗的筛选 免疫后1个月和3个月的抗体检测结果如表1。从表1可知，ZM苗优于YS苗。

表1 保育猪不同猪瘟疫苗的对比试验

2.2 母猪猪瘟抗体持续期 见表2。由表2分析，随着时间推移(从妊娠40～50 d到产后7～14 d)，抗体阳性率整体上有所降低，但降幅缓慢；抗体阻断率平均值和离散度随时间的推移整体变化不大，母猪在整个妊娠阶段猪瘟抗体衰减得很慢；产后7～14 d 猪瘟抗体阻断率平均值有所下降，离散度比其他阶段要大。按胎次分析，1～3胎母猪的猪瘟抗体比较理想，抗体阳性率比其他胎次要高，接近100%，同时1～3胎的离散度相对较小，说明群体抗体水平的一致性好。说明断奶前3天免疫一针，能够保护母猪整个妊娠阶段和分娩阶段。

表2 杨彭猪场妊娠母猪各阶段猪瘟抗体检测结果

由表3可知，第一种猪场从妊娠40～50 d到妊娠80～90 d，猪瘟抗体的阳性率有所降低，但降幅比较缓慢；到断奶前3天时，猪瘟抗体的阳性率出现相对明显的下降。抗体阻断率的平均值和离散度在整个妊娠阶段差异不明显，猪瘟抗体在妊娠阶段衰减得比较慢；但断奶前3天母猪群的抗体平均值出现较明显下降，离散度也开始增大，表明母猪群在断奶前表现出猪瘟抗体的衰减。按胎次分析，发现1～3胎妊娠母猪的猪瘟抗体比较理想，抗体阳性率比其他胎次高，都在95%以上，同时离散度相对比较小，表明群体的抗体水平一致性好。

表3 第一种猪场妊娠母猪各阶段猪瘟抗体检测结果

通过上述2个猪场试验，表明母猪在断奶前3 d免疫4头份的猪瘟组织苗，会产生有效的猪瘟抗体并能维持5个月，断奶前免疫猪瘟疫苗是一种比较合理的免疫方法。

2.3 产房仔猪超免与否 通过4个猪场免疫试验，证实猪瘟疫苗常规免疫 (30 d～60 d) 整体效果优于乳前免疫(0～60 d)[1]。

2.4 生长育肥猪免疫程序优化 2个保育猪场共6个批次猪瘟疫苗试验结果一致：30日龄首免猪瘟后，60日龄进行二免的猪瘟抗体各项指标均优于50日龄[2]。

2.5 核心母猪场的3次全群检测 2005—2007年的3次全群检测结果如表4。每次全群检测的数量约为1 500头(含后备猪)。由表4可知，随着猪瘟抗体不合格母猪的淘汰，以及持续不断补充抗体合格后备猪，基础猪群抗体阳性率得到明显提升，抗体平均值逐步上升，CV值变得越来越小，群体差异度越来越小，整个种猪群猪瘟抗体分布越来越理想。

表4 核心杨3次猪瘟全群检测结果

2.6 保育猪猪瘟免疫1次或2次的对比 从2批猪的试验数据(表5)分析，保育猪群免疫1次(试验组)的各项猪瘟抗体指标均优于2次免疫(对照组)。1次免疫不仅降低劳动强度，同时提高免疫效果。从2011年2月开始，保育猪的猪瘟免疫更改为60日龄免疫1次，每次2头份。

表5 试验组和对照组60日龄免疫猪瘟疫苗后1个月/3个月的猪瘟抗体结果

2.7 保育猪只免1次猪瘟疫苗后，快出栏育肥猪抗体的定期监测 出栏前育肥猪监测结果如表6。由表6分析，2011—2013年出栏前育肥猪的猪瘟抗体水平呈下降趋势，2014—2015年猪瘟抗体有所上升，均在80%以上，相对比较理想。2013年猪瘟抗体平均阳性率最低，仅82.8%，通过对疫苗追溯，发现抗体较差集中在2012年12月使用批号为130001-1的疫苗，2013年7月份调整疫苗，从11月份开始，猪瘟抗体明显改善。近几年育肥出栏前抗体阳性率在91%以上。由此，猪瘟疫苗的常规评估可及时发现疫苗问题。2019年因为周边非洲猪瘟疫情比较严峻，特殊时期为减少交叉污染，没有开展每个月的采血监督监测。

表6 出栏前育肥猪猪瘟抗体阳性率结果 (2011—2019年)

2.8 异常猪只猪瘟病原学检测 良圻原种猪场2007—2019年异常猪只的猪瘟病原学检测如表7。12年间共监测猪瘟病毒1 337份(POSE)，检测结果均为阴性，表明猪场从2007年以来没有检到猪瘟野毒。

表7 异常猪只猪瘟病毒的RT-PCR检测结果 (2007—2019年)

3 讨论

3.1 猪瘟净化方案的选择 猪瘟净化，传统方法必须要逐头采集扁桃体进行病原学监测，没有检测到猪瘟野毒才算是净化。在猪场一线的执业兽医师们以及与猪场接触多的专家们认为，扁桃体采样对种猪应激大，经常存在采样不准的弊端。良圻原种猪场的猪瘟净化方案(以抗体监测为主，对全部基础猪群连续多次监测抗体，淘汰免疫缺陷或免疫耐受种猪，对产仔异常的母猪监测猪瘟病原等)，在临床上显得方便实用，结果可靠，并有过净化成功的案例[3-5]。2010年良圻原种猪场建立了大型规模化猪场通过检测淘汰长期持续保持无猪瘟易感个体的清除猪瘟技术。

3.2 猪场猪瘟苗免疫程序的修正 猪瘟疫苗的免疫程序不是一成不变的，有时要根据实际情况和疫苗特点通过科学合理的试验进行适当调整。由于实践中很难保证每头刚出生的仔猪在吃初乳前接种猪瘟疫苗，同时仔猪的免疫器官也不完善，一般乳前免疫的抗体评估效果较差。有文献报导[1]，A、B、C三个不进行超免的猪场，其保育猪在7～8周二免后，猪瘟抗体整体上很快升高，在22周时猪瘟抗体阳性率分别为90%、100%和100%，而超免场(D场)二免后猪瘟抗体不升反降；22周时，D场猪瘟抗体才有缓慢上升趋势，抗体阳性率仅有60%，远低于其他3个常规免疫场。保育猪30 d首免，60 d进行第2次免疫优于50 d进行第2次免疫[2]。随着种猪群猪瘟净化工作的完成，由于群体内没有猪瘟野毒的存在，保育猪首次免疫可以推迟到母猪抗体基本消失之后，由此保育猪群的免疫次数由原来的2次减少至1次。

3.3 稳定可靠的猪瘟疫苗是实现猪瘟净化的前提 通过近15年的猪瘟疫苗使用经验，不同厂家和同一厂家不同批次的疫苗都会存在质量差异，甚至某些厂家的细胞苗中还会检出牛病毒性腹泻病毒(BVDV)[6]，因此对疫苗的筛选显得十分重要。良圻原种猪场15年来，母猪场始终使用一个集团公司的疫苗，期间出现过个别批次的疫苗质量问题，只要有一个批次的猪瘟疫苗不稳定，就会影响整个猪群的免疫抗体水平，猪瘟净化成果就有前功尽弃的风险，因此需要与厂家深度沟通，定制高品质疫苗；同时实验室要做好每批疫苗在正式使用前的质量监测和临床试验，通过质量标准后才能正式使用。

3.4 猪瘟E2疫苗的使用效果和应用前景 猪瘟E2基因工程亚单位疫苗于2018年正式在国内上市。王遵宝等用E2疫苗免疫猪瘟抗体阴性仔猪2次，二免2周后用石门毒系血毒攻毒(含106MLD)，免疫猪只全部存活，均无病变，均无排毒[7]。Tran等发现，越南科学家研发的E2亚单位疫苗(来自1.1基因型)可对3个不同基因型的流行毒株(1.1、2.1和2.2)提供全面的同源或者异源交叉保护[8]。Madera等发现E2亚单位疫苗一针免疫后2周提供全面保护，持续期4个月以上[9]。E2基因工程疫苗的推出为国内猪瘟净化提供了新思路，基因缺失疫苗配合鉴别诊断试剂，理论上规模化猪场净化猪瘟将会更加便捷，这有待于国内大型规模化种猪场进一步验证。

3.5 猪瘟净化后对猪场生产经营的影响 (2005—2015年) 猪场生猪死亡率明显降低：良圻原种猪场哺乳仔猪死亡率比集团公司5.38%低0.55百分点，保育猪死亡率比集团公司7.81%低1.32百分点，育肥猪死亡率比集团公司6.15%低1.58百分点；猪场兽药费单位重量开支明显减少：良圻原种猪场基本猪群药费开支比集团公司低0.66元/ kg。猪瘟净化后也有利于猪繁殖与呼吸综合征的防控：由于猪群内没有猪瘟和猪伪狂犬病等野毒，当猪繁殖与呼吸综合征不稳定时，可以方便开展后备猪或发病母猪群的血清驯化，近10年来良圻原种猪场曾多次对母猪场开展血清驯化工作[10-12]，并取得了比较好的成绩。

4 小结

从2005年开始，良圻原种猪场在核心种猪场系统地开展猪瘟逐步控制与净化工作，以检测猪瘟抗体为主，淘汰猪瘟免疫缺陷或耐受的种猪，后备猪猪瘟抗体保证100%合格准入；2005—2007年在国内首家连续3次在核心种猪场进行全群检测，且每次种猪群检测数不低于1 400头，综合生物安全防疫措施，2007年完成核心场免疫状态下的猪瘟净化，为国内规模种猪场开展猪瘟控制与净化提供思路与借鉴。其净化模式被国家生猪产业技术体系疫病控制研究室认可，作为猪瘟控制与净化的备选方案，面向全国41家综合试验站推广应用。

志谢：曾容愚博士提供E2疫苗的试验数据和相关文献。