非典型犬钩端螺旋体病例分析

娄银莹 ， 张颖欣 ， 郑文潇 ， 孙艳争 ， 于咏兰

(1.北京中农大动物医院有限公司 ， 北京 海淀 100193 ； 2. 中国农业大学动物医学院 ， 北京 海淀 100193)

钩端螺旋体病(Leptospirosis，简称：钩体病)是由致病性钩端螺旋体引起的全球性人兽共患传染病，是我国法定的乙类传染病。犬感染钩体后的典型症状为发热、黄疸、呕吐、腹泻、出血等。患犬可在其临床症状消失数月至数年后，仍间歇性地向环境中排菌[1]，增加了人感染钩体的风险。当患犬表现非典型症状时，很容易被误诊、漏诊。所以，及时、准确地诊断犬钩体病尤为重要。本文分析了非典型犬钩体感染案例，旨在为人兽钩体病的诊断、治疗和防控提供资料。

1 病例情况

萨摩耶犬，6岁，体重24 kg，雌性，每年定期免疫狂犬病疫苗。主诉：患犬被带去海边游玩5 d回家后，每日饮水量增加至平时的2倍，尿量也明显增加，精神沉郁。多饮多尿10 d后出现呕吐而就诊。

2 临床检查

体温38.6 ℃，可视黏膜粉色。听诊心音正常，心率130 次/min；呼吸音及频率正常。触诊患犬腹

部紧张，毛细血管再充盈时间<2 s，脱水6%～8%。血压正常。

3 实验室检查结果

3.1 血常规检查 各项检查结果均在参考范围内。

3.2 血清生化检查 首诊结果显示：仅肌酐轻度升高，尿素氮未升高；总蛋白和球蛋白升高，其他指标未见明显异常(表1)。

表1 首诊时血清生化检测结果

3.3 尿常规检查 尿比重为1.005(<1.008)，提示为低渗尿，pH呈碱性；其他尿检结果未见异常。

3.4 超声检查 腹部超声检查发现，双肾皮质回声增强，提示双肾急性损伤(图1)；卵巢形态与活动期相关；肝脏、胰腺右叶、膀胱、双侧子宫形态未见明显异常。

图1 肾脏异常B超征象A：左肾； B：右肾

3.5 分子生物学诊断

3.5.1 快速实时荧光聚合酶链式反应(Rapid real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测 使用qPCR法(北京世纪元亨动物防疫技术有限公司)对血液及尿液样本进行检测，结果显示，尿液样本为钩体阳性。

3.5.2 PCR扩增及序列鉴定 采用文献[2]报道的secY基因引物对样本进行钩体菌属PCR的鉴定。95 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循环35次；72 ℃延伸7 min，4 ℃保存。扩增产物采用2%的琼脂糖凝胶电泳鉴定，送检测序并进行序列比对。

电泳结果显示，尿液样本在549 bp处出现特异性扩增条带(图2)。扩增产物测序后经GenBank序列比对鉴定为问号钩端螺旋体(L.interrogans)。

图2 钩端螺旋体secY基因扩增结果M：700 bp marker； P：阳性对照； 1：尿液样本； 2：血液样本

3.6 血清学诊断

3.6.1 钩体抗体ELISA检测 被检血清采用SNAP®

Lepto(IDEXX，美国爱德士公司)和WITNESS®Lepto(Zoetis，美国硕腾公司)试剂盒进行检测。结果均为阳性，提示血清中存在抗钩体IgM和IgG抗体。

3.6.2 显微凝集试验(Microscopic agglutination test,MAT) 将被检血清送吉林大学动物医学院人兽共患病重点实验室进行MAT检测，并对其进行血清群分型鉴定。结果显示，被检血清存在澳洲型和拜伦型血清型抗体，最高血清抗体滴度为1∶800。

4 诊断

综合临床检查、实验室诊断、影像学、分子生物学及血清学检查结果，确诊该犬发病原因为钩体感染。

5 治疗及转归

确诊后立即进行抗生素治疗。皮下注射阿莫西林克拉维酸钾(Synulox，美国硕腾公司)15 mg/(kg·bw)，1次/d，口服多西环素(咳喘宁，北京中科拜克生物技术有限公司)5 mg/(kg·bw)，2次/d。同时采用支持疗法纠正脱水、护肝保肾排毒。此方案治疗1周后，患犬精神状态恢复，不再有呕吐表现，饮水排尿行为恢复正常。用药2周后停用多西环素。就诊后第3周生化复查，结果恢复正常(表2)。其他临床检查一切正常，后续要求注意犬表现，定期体检。

表2 全病程中血清生化检测结果

6 讨论

钩体病是多器官损伤性疾病，典型症状包括发热、黄疸、呕吐、腹泻、出血等。我国犬主要感染的血清型为黄疸出血型、波摩那型和犬型[3]，且患犬症状表现与感染的钩体血清型相关[4]。当患犬感染宿主适应性血清群时，可能无典型黄疸、尿毒症症状，此时容易被误诊或漏诊。

本病例中患犬未出现典型肝功损伤相关的黄疸，而多饮多尿这一临床症状又不仅仅出现在钩体感染后，所以动物主人在疾病初期并未足够重视。由于钩体具有损害多系统，且可逃避机体特异性免疫机制，并在肾脏中定植排泄病原等特点[5]，因此，需要同时使用多种方法才能确诊钩体病。常用诊断方法包括PCR、ELISA、MAT、细菌培养等。本病例中患犬首诊即发现球蛋白升高、肌酐升高，结合低渗尿(SG=1.005)以及影像学结果，提示急性肾损伤可能与感染相关。为深究发病原因，患犬接受了分子生物学、血清学等检查；为明确非典型发病的可能血清型，送检血清进行MAT检测，结果表明，患犬可能感染澳洲型或拜伦型血清型钩体。结合就诊犬未注射过任何钩体疫苗的免疫史，最终确诊为钩体病。

钩体病是重要的人兽共患病，及时诊断并及早介入治疗可有效阻断该病的传播。本例中患犬的诊治经验说明，从细微症状入手、合理结合多种诊断方法，能及时、明确诊断未出现典型症状的钩体病。在第一时间给予抗生素(如多西环素)及对症治疗，能获得很好的治疗效果[6]。