早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表达及其临床意义

操龙洋，王志荣，张俊杰，刘文芳，梅丽红

近年来胃癌已成为发病率最高的消化道恶性肿瘤，随着消化内镜等检查手段的应用，越来越多的胃癌患者能够在早期得到确诊和治疗。内镜黏膜下剥离术（ESD）是早期胃癌的标准治疗方法[1]，但部分患者术后复发，影响患者预后。Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9（SOX9）与胃癌转移和浸润密切相关[2]；尾型同源盒转录因子2（CDX2）对消化道上皮黏膜发育起到重要调控作用，可诱导胃黏膜肠化生导致其分化异常，最终产生癌变[3]；膜联蛋白A2（ANXA2）在胃癌、肝癌、食管癌等多种恶性肿瘤中存在异常高表达的情况[4]。本研究旨在探究早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表达水平，并分析其与早期胃癌患者临床病理特征及术后复发的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集杭州市临安区第一人民医院2015年1月至2018年12月收治的150例早期胃癌患者。纳入标准：（1）符合早期胃癌的诊断标准[5]，并经临床检查确诊；（2）行ESD，自愿参与本研究并签署知情同意书。排除标准：（1）术前接受放化疗；（2）既往存在恶性肿瘤史；（3）肝、肾、心、肺等脏器功能异常；（4）中途失访；（5）合并影响本研究结果的其他因素。其中男82例，女68例；年龄35～75岁，平均（62.3±3.8）岁；肿瘤直径＜1.5 cm 89例，≥1.5 cm 61例；TNM分期T1a期46例，T1b期104例；肿瘤位置：胃体57例，贲门胃底部49例，幽门部44例；分化程度：低未分化69例、中高分化81例；浸润深度：黏膜内95例，黏膜下55例。本研究获得本院医学伦理委员会批准通过。

1.2 方法 术前行常规腹部超声、内镜超声或CT检查。行全身麻醉，取平卧位。明确病灶范围后以0.4%靛胭脂染色，并对病灶边缘0.5～1.0 cm行氩气刀电凝标记，于病灶边缘行靛胭脂、肾上腺素和0.9%氯化钠注射液多点注射。Dual刀切开病灶边缘，内镜直视下完整剥离黏膜下层并切除，剥离过程中持续注射混合液促进病灶剥离，剥离病灶黏膜以负压吸入内镜前段透明膜。观察创面是否平整，有无穿孔、出血、病灶残留等，可对创面血管性氩离子固化、热活检钳和喷洒止血药物等凝固治疗，必要时可应用止血夹夹闭血管。将取出的组织采用10%甲醛溶液固定，常规包埋、切片，行病理组织学检查。所有患者ESD术后随访1～2年，形式包括胃镜、血常规及血生化等，每3～6个月检查1次。

1.3 观察指标 免疫组织化学法（ABC）染色检测胃癌组织、癌旁组织中SOX9、CDX2及ANXA2的表达水平，染色结果判定由2位病理科主治医师进行双盲法阅片，并采用半定量计分法进行判定。对每张切片阳性细胞数比例染色细胞百分比进行评分，显微镜视野内阳性细胞百分数：0～5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，75%为4分。染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。通过2项评分乘积进行综合判断：0分为阴性，1～4分为弱阳性（+），5～8分为中度阳性（2+），9～12分为强阳性（3+）。

1.4 统计方法 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计数资料以百分比表示，采用2检验；COX模型分析早期胃癌患者ESD术后复发的危险因素；受试者工作特征曲线（ROC）及曲线下面积（AUC）分析SOX9、CDX2及ANXA2对于ESD术后复发的预测价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2的表达 胃癌组织SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性率均高于癌旁组织（2≥63.949，均P＜0.05）。见表1、封三彩图4。

表1 胃癌组织、癌旁组织SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性率分析 例（%）

图4 胃癌组织及癌旁组织SOX9、CDX2及ANXA2表达免疫组织化学染色结果

2.2 SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性率与临床病理特征的关系 SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性率与性别、年龄、肿瘤位置及肿瘤直径无相关性（2≤2.912，均P＞0.05）；SOX9、CDX2表达阳性率与TNM分期相关（2=13.036、12.409，均P＜0.05），ANXA2表达阳性率与TNM分期无相关性（2=3.066，P＞0.05）；SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性率与分化程度、浸润深度及复发情况相关（2≥3.865，均P＜0.05）。见表2。

表2 SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性率与临床病理特征的关系 例（%）

2.3 ESD术后复发影响因素的分析至末次随访，150例生存率为95.3%（143/150），复发率为8.7%（13/150）。单因素COX回归分析显示，TNM分期、低未分化、浸润黏膜下及SOX9、CDX2、ANXA2表达阳性与术后复发相关（均P＜0.05）。见表3。

表3 ESD术后复发影响因素分析

2.4 多因素分析 多因素COX回归分析显示低未分化、浸润黏膜下及SOX9、CDX2、ANXA2表达阳性为早期胃癌患者ESD术后复发的危险因素（＜0.05）。见表4。

表4 早期胃癌患者ESD术后复发影响因素的多因素Cox回归分析

2.5 SOX9、CDX2及ANXA2对ESD术后复发的预测价值分析 ROC曲线显示SOX9、CDX2、ANXA2及联合检测对于ESD术后复发的预测的AUC分别为0.792（95%CI 0.731～0.854）、0.836（95%CI 0.772～0.899）、0.891（95%CI 0.848～0.933）、0.922（95%CI 0.889～0.954）。见封三彩图5。

图5 SOX9、CDX2及ANXA2对于ESD术后复发预测价值的ROC曲线

3 讨论

近年来，对于胃癌发病机制的研究越来越多，多种基因、蛋白等分子标志物在早期胃癌的发生中存在重要作用。本研究探讨SOX9、CDX2及ANXA2在胃癌患者中的表达水平，结果显示上述指标均在胃癌组织中呈高表达，其阳性率明显高于癌旁正常组织。

胃癌等恶性肿瘤的病理特征恶化与肿瘤复发、疾病预后及总生存期有关[6-7]。本研究结果显示，SOX9、CDX2表达阳性率与早期胃癌患者TNM分期、分化程度、浸润深度及复发情况相关；ANXA2表达阳性率与早期胃癌患者分化程度、浸润深度及复发情况相关。COX回归模型显示，SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性为早期胃癌患者ESD术后复发的危险因素；ROC曲线结果显示，SOX9、CDX2、ANX A2及联合检测对于ESD术后复发的预测的AUC分别为0.792（95%CI 0.731～0.854）、0.836（95%CI 0.772～0.899）、0.891（95%CI 0.848～0.933）、0.922（95%CI 0.889～0.954）。COX回归分析及ROC曲线结果均提示，SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性对于早期胃癌患者ESD术后预后复发具有预测价值。

综上所述，早期胃癌患者SOX9、CDX2及ANXA2表达阳性率明显增加，并对患者ESD术后复发具有预测价值。