肝素结合蛋白在革兰阴性菌肺部感染中的诊断价值

喻莹，王庆领，陈建伟

肺部细菌感染是临床上发病率较高的呼吸系统疾病，细菌感染又可分为革兰阳性菌（G＋）和革兰阴性菌（G－）感染，G－感染引起重症肺炎的概率较高，二者的区分对指导临床用药意义重大。临床常根据白细胞计数、血清淀粉样蛋白（SAA）、降钙素原（PCT）及C-反应蛋白（CRP）等急性时相反应蛋白对肺部感染作出早期诊断[1]，但这些指标开始升高时间较晚，且对G＋和G－的鉴别作用较小。寻找一种更加快速、有效的指标在G－肺部感染的诊断中具有十分重要的意义。肝素结合蛋白（HBP）是一种嗜中性粒细胞衍生蛋白，在机体急性细菌感染的早期可升高，主要作用是对抗G－，相比其他急性时相反应蛋白具有高敏感性及特异性等优点[2]。本文通过对比HBP及SAA、PCT、CRP水平，评估HBP在G－肺部感染中的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2019年12月至2020年10月在宁波大学医学院附属医院呼吸科就诊的肺部感染患者120例，男52例，女68例；平均年龄（42.1±13.3）岁。纳入标准：（1）本次发病时间≤7 d，年龄≥18岁；（2）经血培养培养出细菌生长，且经质谱鉴定可以确定细菌类型；（3）符合《呼吸疾病诊疗指南》（2013年版）[3]中的肺部感染诊断标准；（4）本次发病至住院抽血、留痰标本前未使用抗生素及免疫抑制剂治疗。排除标准：（1）合并脓毒症、泌尿系统等其他系统感染；（2）合并心肌梗死、严重肝肾功能不全及恶性肿瘤等重大疾病。根据痰培养后质谱结果分为G＋组和G－组，并收集同期健康体检者60例作为对照组，男28例，女32例；平均年龄（33.7±5.0）岁。

1.2 方法 患者在入院24 h内留取血液标本检测HBP、SAA、PCT及CRP值，全部按照标准操作规程进行检测。HBP采用免疫荧光干式定量法测定，仪器为干式荧光免疫分析仪FIC-S100（苏州和迈精密仪器有限公司），试剂盒为肝素结合蛋白测定试剂盒（中翰盛泰生物技术股份有限公司）；SAA采用乳胶增强免疫比浊法测定，仪器为BeckmanDXI800全自动化学发光仪（美国贝克曼库尔特公司），试剂盒为SSA测定试剂盒（宁波普瑞柏生物技术股份有限公司）；PCT采用免疫荧光法测定，仪器为TZ-310型干式荧光免疫分析仪（瑞莱生物科技江苏有限公司），试剂盒为仪器配套试剂盒；CRP采用乳胶增强免疫比浊法测定，仪器为迈瑞CRP-M100特定蛋白免疫分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司），试剂盒为配套试剂盒。细菌培养：留取患者的痰液，使用Thermo BB15型CO2培养箱（美国Thermo公司）进行一般细菌培养（35℃、5%浓度的CO2条件培养24 h），筛选出单个生长的菌落进行细菌鉴定，采用VITEK MS IVD 2.0质谱鉴定仪（梅里埃诊断产品有限公司）将细菌区分为G＋及G－，并做好记录。

1.3 统计方法 采用SPSS 19.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析，计算ROC曲线下面积及其相关的敏感性及特异性。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 细菌鉴定结果 根据质谱结果，G－组65例，男28例，女37例；平均年龄（48.2±14.6）岁；以金黄色葡萄球菌、链球菌为主。G＋组55例，男24例，女31例；平均年龄（34.9±6.4岁）；以克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌为主。

2.2 各组HBP、SAA、PCT及CRP水平比较 3组HBP、SAA、PCT及CRP水平差异均有统计学意义（P＜0.05），且各指标G－组与G＋组、对照组差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 各组HBP、SAA、PCT及CRP水平比较

2.3 ROC曲线分析 将G－组与G＋组合并为感染组，将感染组与对照组比较，绘制ROC曲线，HBP、SAA、PCT、CRP曲线下面积（AUC）均＞0.7，且差异均有统计学意义（均P＜0.05）。其中HBP、SAA、PCT的AUC＞0.9，CRP的AUC值为0.7～0.9。见表2及图1。

表2 各指标在感染组与对照组间的诊断效能

图1 感染组与对照组的ROC曲线分析

将G－组与G＋组比较，HBP、SAA、PCT、CRP的AUC分别为0.816、0.603、0.420、0.383。HBP的AUC最大，处于0.7～0.9，同时差异有统计学意义（P＜0.05），且敏感性及特异性较好，分别为92.3%、69.1%；SAA的AUC为0.5～0.7，诊断准确性较低；PCT、CRP的AUC均＜0.5。见表3及图2。

表3 各指标在G－与G＋组间的诊断效能

图2 G－与G＋组的ROC曲线分析

3 讨论

目前肺部感染是ICU及呼吸科最主要的感染类型，病死率高达11.3%～15.1%[3]。其中G－菌可释放内毒素致病，通常引起高热等严重症状，G－菌肺部感染的早期诊断尤为重要。痰培养是目前肺部感染病原学诊断的金标准，但痰培养需耗时1～3 d，且漏诊率高，临床常根据临床症状、白细胞计数、SAA、PCT及CRP等指标进行早期临床诊断。但以上指标升高时间较HBP慢，且特异性不高，对G＋与G－菌肺部感染鉴别效果不理想。

HBP又称为天青杀素或CAP37，是一种多功能颗粒相关蛋白，可从迁移的多形核白细胞中迅速动员，当机体受到炎症等刺激的早期（2 h内），HBP可由中性粒细胞释放。释放途径主要包括：M蛋白-纤维蛋白原-2整合素复合物机制、p38-MAPK信号通路及白三烯受体途径等[4]。近年来HBP在感染性疾病中的诊断价值的研究不断涌现，《中国严重脓毒症/脓毒性休克治疗指南》（2014）指出HBP是早期诊断脓毒血症最优指标[5]。现已发现HBP对肺部感染同样具有诊断意义，唐小娟等[6]研究表明，当HBP的cut-off值为20.5 ng/ml时，对细菌性肺炎中的诊断价值优于血清SAA、PCT及WBC，与本文结果相符。

本研究结果显示感染组与对照组HBP、SAA、PCT及CRP的AUC相差不大，且均对细菌性感染具有预测价值；而G－与G＋组HBP的AUC明显高于SAA、PCT及CRP，且敏感性与特异性均较高，这提示HBP可以作为G－菌肺部感染的早期诊断指标。其机制可能包括：（1）HBP对G－菌的对抗作用，Gabay等[7]分离出天青杀素后认为它是中性粒细胞对抗G－菌时产生的。HBP可作为化学引诱物（单核/巨噬细胞的激活剂），由中性粒细胞2整合素连接触发，诱导血管渗漏和水肿的形成。（2）趋化作用，HBP可作为一种趋化因子，激活单核/巨噬细胞，可差异性调节内毒素诱导的TNF-及IL-6等炎性介质产生。Heinzelmann等[8]发现HBP具有多功能特性，包括单核细胞趋化作用和LPS诱导的分离单核细胞产生TNF-、IL-1及IL-6等促炎细胞因子的增强作用。

综上所述，HBP、SAA、PCT及CRP均可作为肺部细菌性感染的鉴别指标，其中HBP可以作为G－菌肺部感染的早期诊断指标。