无创产前DNA 检测在筛查胎儿染色体非整倍体中的应用价值

黄淑瑜，眭建忠，严金梅，欧水英

（佛山市第一人民医院，广东 佛山 528000）

0 引言

出生缺陷指的是新生儿在出生的时候，身体伴有某种结构缺陷或是功能缺陷，这种缺陷可以发生在全身任何部位；出生缺陷可导致新生儿的肢体、智力、发育等出现不同程度障碍，进而对新生儿的健康成长、生存质量造成严重影响，严重可直接导致新生儿在出生后短期内死亡[1]。其中引起新生儿出生缺陷最为常见的因素之一就是染色体异常[2]，由于临床目前无治愈染色体异常的方法，所以孕妇产前筛查、产前诊断对降低出生缺陷的发病率、提高出生质量等具有极其重要的意义。因此，本文主要将进行无创产前DNA 检测筛查染色体非整倍体的11472例孕妇作为研究对象，并对其应用价值进行探析，为临床提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究一共纳入11472例研究对象，其中高风险因素者有123例（包含氏筛查高风险、高龄孕妇、既往不良孕产史、超声软指标者），所有高风险因素者均2017年02月至2020年12月在佛山市第一人民医院进行胎儿无创产前DNA 检测的孕妇。年龄为21～47岁，平均（29.35±1.87）岁；孕周为12～24周，平均（16.82±1.24）周。纳入标准：①均对本研究知情，并签订同意书；②均为单胎妊娠者；③本次研究经我院伦理委员会批准同意。排除标准：①近期内接受过异体输血、细胞治疗与移植手术等者；②伴有血液疾病者③存在沟通障碍者；④存在认知障碍者；⑤伴有精神疾病者；⑥临床资料不完整者；⑦中途退出本次研究者。

1.2 方法

孕妇外周血胎儿游离DNA 无创检测：

（1）抽取孕妇12～24妊娠时的外周血液（10mL）作为标本，进行离心处理后，分离血浆，然后将血浆中游离的DNA 提取出来，PCR 扩增。

（2）应用第2代高通量大规模平行测序，且通过生物信息分析，可计算出胎儿患染色体非整倍体的发生率，包含唐氏综合征（①21-三体综合征；②18-三体综合征、③13-三体综合征）与性染色体异常。

检测结果正常判断标准：-3.0～+3.0者为正常；待胎儿出生之后，对其进行电话随访；对于检测结果异常者，需再次进行羊水穿刺诊断。

羊水染色体核型分析：①对无创产前DNA 检测结果异常者，需在产妇妊娠18～22周时行超声引导下羊膜腔穿刺术，抽取羊水（20mL）；②将抽取的羊水送至实验室进行培养，选择合适的时间收获细胞，经过滴片后G 显代分析，每例分析20个分裂相。

1.3 观察指标

统计无创DNA 产前检测异常情况，并对检测结果异常者进行羊水染色体核型分析。

1.4 统计学分析

研究所得到的数据均录入至Excel 2010中予以校对，采用SPSS 23.0软件进行处理。百分比（%）表示计数资料，计数资料用卡方（χ2）检验。P评定检验结果，P ＞0.05提示差异无统计学意义，P ＜0.05提示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 无创产前DNA检测异常结果

表1结果显示，123例高危因素孕妇经无创产前DNA 检测后，染色体非整倍体疾病高风险者有43例（34.96%）。

表1 无创产前DNA检测异常结果[n（%）]

2.2 无创DNA检测结果与羊水染色体核型结果比较

表2结果显示，43例染色体非整倍体疾病孕妇，经无创产前DNA 检测中，21-三体综合征18例、18-三体综合征11例、13-三体综合征9例、性染色体异常5例，与羊水产前诊断确诊率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。由此表明，无创产前DNA 检测在诊断染色体整倍体中具有较高的准确性。

表2 无产前DNA检测与羊水体核型结果比较[n（%）]

3 讨论

出生缺陷在我国具有较高的发病率，指的是新生儿在出生之前身体结构与功能、代谢就已经出现异常；包含：①先天性疾病；②遗传性代谢性疾病；③染色体异常等[3]。有资料显示[4]，我国每年大约有1600万左右的新生儿出生，其中因染色体异常导致的出生缺陷大约占比0.6%左右。目前，我国暂时还未有治愈染色体非整倍体疾病的方法，主要以控制出生缺陷与预防出生缺陷为主，以此来提高人口素质，降低出生缺陷率。现阶段，孕妇在进行产前筛查的时候，主要采用血清学生化筛查法，孕中期阶段进行血清学三联筛查法检出唐氏综合征、部分其他非整倍体染色体异常的几率大约在60%～70%左右；由于该检测方法的灵敏性以及准确性不高，所以容易出现假阳性率。介入性产前诊断技术作为临床以往诊断染色体非整倍体疾病的“金标准”；它属于一种有创方式，不仅会对孕妇造成一定的创伤，同时还可能会增大孕妇发生宫内感染、早产、流产等风险，从而增大孕妇的心理压力，导致其应用受到限制。因此，临床还需积极探寻一种准确率高、安全性高的方法进行产前胎儿染色体非整倍体检测。

本次研究中，11472例孕妇中有123例为高危险因素孕妇，经无创产前DNA 筛查染色体非整倍体后，结果显示：有43例（占比34.96%）确诊为染色体非整倍体疾病，经羊水产前诊断确诊43例，染色体异常见检出率为100.00%；且无创产前DNA筛查中21-三体综合征18例、18-三体综合征11例、13-三体综合征9例、性染色体异常5例，与羊水产前诊断确诊率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。无创产前DNA 检测技术是从母体外周血中胎儿游离DNA 片段发现而来的。当胎儿染色体出现异常后，其母体中的DNA 含量也会出现微量的变化，从而通过深度测序与生物信息分析便可以检测到该变化，进而为项目提供可靠的理论依据[5]。对于孕妇来讲，无创产前DNA 检测只是一项简单的血清学检测，只需要抽取孕妇的静脉血5mL 便可进行胎儿染色体非整倍体筛查，它除了能避免能有创检查为孕妇造成的伤害，还能降低孕妇发生宫内感染、流产等风险。目前，无创产前DNA 检测适用于以下几种情况：①孕妇的年龄不超过35岁；②经超声检查，结果显示胎儿非整倍体发生风险增加；③孕妇以往妊娠中曾出现过三体综合征胎儿的情况；④经早期超声、血清学或是联合筛查后，结果显示为高危因素孕妇；⑤家族中有13号、21号染色体平衡携带者。无创产前DNA检测作为一种产前筛查方式，应在充分进行产前咨询与风险评估后，再进行检查；最佳检测时间建议在妊娠12～24周时无创产前DNA 检测，因此需要在孕早期阶段确定妊娠周数，并排除多胎妊娠者。值得注意的是，无创产前DNA 检测方式，主要集中于高危因素且单胎的妊娠孕妇中；目前还缺乏与低危因素、多胎妊娠孕妇的相关研究。

综上所述，采用无创产前DNA 检测方式筛查胎儿染色体非整倍体疾病，准确率比较高，可提高新生儿的出生质量，同时该方式还具有检测方法便捷、安全、快速等优点，可将其作为产前筛查染色体非整倍体疾病的首选方式。