金钱草茎、叶中槲皮素、山柰素及其重金属含量测定对比研究

韩丽丽，孙俊英，李 飞

(1 潍坊市检验检测中心，潍坊 261100；2 东营市食品药品检验中心，东营 207091；3 山东畜牧兽医职业学院，潍坊 261061)

金钱草为报春花科植物过路黄LysimachiachristinaeHance的干燥全草，别名大金钱草、对座草、路边黄、遍地黄[1]；味甘、咸，微寒；归肝、胆、肾、膀胱经；具有利湿退黄、利尿通淋、解毒消肿之效；用于湿热黄疸、胆胀胁痛、石淋、热淋、小便涩痛等[2]。金钱草主要含有酚酸类、黄酮类、苷类、挥发油、鞣质及氨基酸等化学成分，其中酚酸类和黄酮类是其主要活性成分[3-5]，《中国药典》2020年版一部对槲皮素和山柰素含量进行了控制。笔者在检验工作过程中发现，同一批次金钱草含量测定结果不一致，究其原因是所抽样品中茎叶比例不一致。另外，目前对金钱草重金属含量测定尚无报道。本研究将金钱草茎、叶分开，分别测定茎、叶中槲皮素、山柰素以及铅、镉、铜、汞、砷5种重金属的含量，为金钱草质量控制以及安全评价提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器

LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；MARS 6 CLASSIC微波消解仪(美国培安公司)；Agilent Technology 7900 ICP-MS(美国安捷伦公司)；XSE-204电子天平(瑞士梅特勒公司)；HH-4数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)；102电热恒温干燥箱(潍坊精鹰医疗器械有限公司)。

1.2 试药

山柰素对照品(批号110861-201611，含量93.8%)、槲皮素对照品(批号100081-201610，含量99.1%)，均购自中国食品药品检定研究院；铅标准溶液(批号177011-1，含量1000 μg/ml)、砷标准溶液(批号163080-3，含量1000 μg/ml)、镉标准溶液(批号165017-1，含量1000 μg/ml)、汞标准溶液(批号16C043-1，含量1000 μg/ml)、铜标准溶液(批号16C060-1，含量1000 μg/ml)、金标准溶液(批号171042-2，含量1000 μg/ml)，均购自国家有色金属及电子材料分析测试中心；内标(混合)标准溶液(批号5190-8593-1，含量100 μg/ml)，购自安捷伦科技有限公司。实验用水为超纯水；甲醇、硝酸为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

1.3 样品

经鉴定均为金钱草(即报春花科植物过路黄LysimachiachristinaeHance的干燥全草)，信息见表1。

2 方法与结果

2.1 槲皮素、山柰素含量测定[2]

2.1.1色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45)为流动相，检测波长360 nm，流速1.0 ml/min，柱温25 ℃，进样量10 μl，理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。

2.1.2对照品溶液的制备

取槲皮素对照品、山柰素对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1 ml各含槲皮素4 μg、山柰素20 μg的溶液，即得。

2.1.3供试品溶液的制备

取各样品全草、茎、叶粉碎，过三号筛，分别取约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 ml，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，精密加入盐酸5 ml，置90 ℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移至50 ml量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 测定方法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，按照“2.1.1”项下色谱条件进行测定，即得。色谱图见图1、测定结果见表2。

图1 金钱草HPLC色谱图

表2 金钱草全草、茎、叶中槲皮素、山柰素含量测定结果

2.2 重金属含量测定

2.2.1标准品贮备溶液、标准品溶液、内标溶液、空白溶液的制备

参考《中国药典》2020年版四部通则2321。

2.2.2供试品溶液的制备

取槲皮素、山柰素含量测定项下的金钱草全草、茎、叶粉末，于60 ℃干燥2 h，取约0.25 g，精密称定；置微波消解罐中，加硝酸10 ml，过氧化氢3 ml，密闭、消解；按表3消解程序消解2次，消解液冷却至60 ℃以下，取出消解罐，放冷；将消解液转入50 ml量瓶中，用少量水洗涤消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金单元素标准溶液(1 μg/ml)200 μl，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。

表3 消解程序

2.2.3测定方法[2]

测定时选取的同位素为63Cu、75As、114Cd、202Hg和208Pb，其中63Cu、75As以72Ge作为内标，114Cd以115In 作为内标，202Hg、208Pb以209Bi作为内标；以测量值(3次读数的平均值)为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定供试品溶液，取3次读数的平均值。从标准曲线上计算得相应的浓度。在同样的分析条件下进行空白试验。ICP-MS工作参数见表4、标准曲线见图2、测定结果见表5。

表4 ICP-MS工作参数

表5 金钱草重金属含量测定结果

图2 标准曲线

3 讨论

笔者在检验工作中发现，不同使用单位同一来源(同一生产厂家同一批次)的金钱草，槲皮素、山柰素含量测定结果差异较大，出现了合格与不合格两种结论。经过对比样品发现，二者茎叶比例不同，其中叶子少者含量低，导致不合格。本研究将金钱草茎、叶分开，分别进行测定。结果显示，茎、叶中槲皮素、山柰素含量差别较大，叶的含量较高，为茎的3～8倍。提示在饮片生产过程中，应充分混合均匀，否则会导致同一生产厂家同一批次样品，在不同使用单位，按照同一标准检验，出现不同结论；在抽样和检测过程中，取样亦应严格按照四分法取样，保证取样的均一性，才能保证实验结果的重现性。

《中国药典》2020年版一部收载的金钱草没有重金属测定项目，为考察其重金属含量情况，本研究随机对4批金钱草的全草、茎、叶进行了测定。结果显示，叶中5种重金属元素铅、镉、铜、汞、砷的含量均高于茎。说明叶的重金属富集较多，如果样品中茎叶比例不一致，亦会出现不同测定结果，为金钱草安全评价提供了科学依据。

金钱草同名异物现象严重，伪品较多，掺伪率高达68.6%，而且多已破碎，真假难辨[6-10]。鉴于金钱草茎、叶中槲皮素、山柰素以及铅、镉、铜、汞、砷的含量差别较大，可以考虑将茎叶比例订入质量标准，以提高金钱草的质量控制，确保用药安全。