九蒸九制对不同龄节多花黄精品质的影响

潘克琴，李丹丹，王华磊，陈松树，罗春丽，李金玲

（贵州大学农学院贵州省药用植物繁育与种植重点实验室，贵州 贵阳 550025）

多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）是中药材黄精（Polygonati Rhizoma）的基源植物之一。其性平，味甘，入脾、肾、肺经，具有补肾益精、滋阴润燥等功效[1]。多花黄精中含有多糖、低聚糖、甾体皂苷、蒽醌类及木脂素等成分，其中多糖是黄精中最重要的且含量最多的活性成分[2]。有研究表明，多花黄精多糖具有抗衰老、降血糖和降血脂等功效[3-6]。多花黄精的根茎一般每年向前伸长1节，当年新生的1节为1节龄，把龄节为1的节称1年节龄，到第2年又新长了一节与其相连接的上一节的节龄为2，把节龄为2的节称2年龄节，依此类推[7]。在多花黄精的生长过程中由于物质之间的运输和重新分布，多花黄精的每一龄节物质的分布不均衡[8]。

多花黄精的鲜品对咽喉有一定的刺激作用，需炮制去除麻味后方可入药。目前本草大多记载九蒸九晒的炮制法[9-12]。黄精在蒸晒的过程中不仅外观和口感发生很大的变化，其物质基础和药效也有明显改变[13,14]。目前研究主要集中于黄精九蒸九制的炮制机理方面，不同蒸制次数对不同龄节多花黄精的品质影响尚未见研究报道。本研究探讨了蒸制次数对不同龄节多花黄精主要品质指标变化，为今后多花黄精炮制工艺规范化、多花黄精的采收及初加工的研究提供理论参考和指导。

1 仪器与材料

1.1 仪器

电子分析天平（AR224CN），纯水机（30Liter PE Tank），101-4型电热鼓风干燥箱（Heratherm OMS 180），数显恒温水浴锅（HH-6），紫外可见分光光度计（1510），高能万能粉碎机（2909）。

1.2 试剂

葡萄糖对照品（大连美仑生物技术有限公司，D0806AS）、人参皂苷Rb1对照品（索莱宝生物科技有限公司，批号：20220904），芦丁（索莱宝生物科技有限公司，批号:MUST-17111601），水为蒸馏水，试剂均为分析纯。

1.3 药材

多花黄精购自贵州省六盘水市六枝特区，经贵州大学农学院王华磊教授鉴定为多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua.）。

1.4 样品制备

取生长1年1龄节、生长2年2龄节及生长3年3龄节和1年、2年及3年混合龄节新鲜多花黄精根茎，进行九蒸九制（每次蒸制时间在上一次的基础上增加0.5 h，烘的时间定为每次2 h）：如第1次蒸1 h，烘2 h（一蒸一制）；第2次蒸1.5 h，烘2 h（二蒸二制）；第3次蒸2 h，烘2 h（三蒸三制）；第4次蒸2.5 h，烘2 h（四蒸四制）；第五次蒸3 h，烘2 h（五蒸五制）；第6次蒸3.5 h，烘2 h（六蒸六制）；第7次蒸4 h，烘2 h（七蒸七制）；第8次蒸4.5 h，烘2 h（八蒸八制）；第9次蒸5 h，烘2 h（九蒸九制）。总共取样9次，于60℃制干并打粉备用。

2 方法

2.1 多花黄精多糖的测定

多花黄精多糖的测定[1]参照2020版《中华人民共和国药典》一部。实验结果表明，葡萄糖标准品溶液浓度在0.033～0.362 mg/mL范围内线性关系良好。测定多花黄精多糖含量的标准曲线为y=1.0135x+0.1841，R2=0.9992。

2.2 浸出物测定

浸出物的测定参照2020版《中华人民共和国药典》通则和一部[1]。

2.3 黄酮测定

黄酮的测定参照[15]的方法。实验结果表明，芦丁标准品溶液浓度在0.1～0.5 mg/mL范围内线性关系良好。测定黄精黄酮含量的标准曲线为y=1.4552x-0.0611，R2=0.9815。

2.4 总皂苷的测定

总皂苷的测定参照[16]的方法。标准曲线制备：称取人参皂苷Rbl标准品10.0 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为标准液。吸取该标准液60、120、180、240、300、360、420L置于具塞刻度试管中，挥干溶剂，显色，经UV-1102紫外可见分光光度计在200～800 nm范围内扫描，结果显示在550 nm处吸收峰最大，并于550 nm处测定吸光度值（Y），以皂苷含量对X值作标准曲线，以吸光值A为纵坐标，含量C为横坐标，得回归方程y=0.8187x+0.0077（R2=0.9958），线性范围0.06～0.42 mg/g。

供试液制备：称取干燥至恒重的黄精粉末1.00 g，加入15倍量80%的乙醇，60℃超声提取30 min，提取2次，合并滤液至50 mL容量瓶中，加80%的无水乙醇溶解并稀释到刻度，摇匀。

3 结果分析

3.1 九蒸九制对不同龄节多花黄精多糖的影响

从表1中可以看出多花黄精多糖含量随着蒸制次数的增加呈现不断下降的趋势。1龄节多花黄精的多糖含量由一蒸一制后的21.98%降为九蒸九制后的9.59%；2龄节多花黄精的多糖含量由一蒸一制后的23.71%降为九蒸九制后的8.01%；3龄节多花黄精的多糖含量由一蒸一制后的20.87%降为九蒸九制后的5.49%，且第九蒸九制后多花黄精的多糖含量不符合药典规定[1]；混合龄节多花黄精的多糖含量由一蒸一制后的19.87%降为九蒸九制后的11.60%。从变异系数混合龄节＜1龄节＜2龄节＜3龄节可以看出，九蒸九制对混合龄节多花黄精的多糖影响最小，1龄节次之。从表1中还可以得出1龄节多花黄精炮制方式最好的方法为一蒸一制，多花黄精多糖含量最高为21.98%；2龄节多花黄精炮制最好的方法也为一蒸一制，多花黄精的多糖含量最高为23.71%；3龄节和混合龄节最好的蒸制次数为三蒸三制，多花黄精多糖的含量分别为22.07%和22.84%。

表1 不同龄节多花黄精不同蒸制次数黄精多糖的比较Table 1 The comparison of Polygonatum sibiricum polysaccharides different ages （%）

3.2 九蒸九制对不同龄节黄精总皂苷的影响

从表2可以看出，不同龄节多花黄精总皂苷含量随着蒸制次数的增加呈不断上升的趋势。

表2 不同龄节多花黄精不同蒸制次数黄精总皂苷的比较Table 2 The comparison of Polygonatum sibiricum totalsaponins in different ages （%）

在一蒸一制后2龄节多花黄精的总皂苷含量最高，为0.62%；混合龄节的最低，为0.54%；1龄节、2龄节和混合龄节多花黄精经过第八蒸八制后总皂苷的含量趋于稳定。从变异系数1龄节＜2龄节＜混合龄节＜3龄节可以看出，九蒸九制的次数对1龄节黄精的总皂苷含量影响最小，2龄节次之。

3.3 九蒸九制对不同龄节多花黄精浸出物的影响

从表3中可以看出，不同龄节多花黄精浸出物含量随着蒸制次数增加呈现不断下降的趋势。在不同龄节的多花黄精中，1龄节多花黄精浸出物含量变异系数为3.81%，说明蒸制次数对于1龄节多花黄精浸出物的含量影响最小；3龄节多花黄精的变异系数最大为6.42%，说明蒸制次数对3年龄节多花黄精浸出物的含量影响最大，一蒸一制后浸出物含量由81.75%下降到九蒸九制后的68.65%。

表3 不同龄节多花黄精不同蒸制次数浸出物的比较Table 3 The comparison of Polygonatum sibiricum Extracts in Different Ages （%）

3.4 九蒸九制对不同龄节多花黄精总黄酮的影响

从表4中可以看出，不同龄节多花黄精总黄酮含量随着蒸制次数增加而不断上升。1龄节多花黄精总黄酮含量从一蒸一制的0.08%上升到九蒸九制的0.47%；蒸制次数对2龄节和3龄节多花黄精总黄酮含量的影响差异不大；还可以得出蒸制次数对混合龄节多花黄精的总黄酮的影响最小。不同龄节多花黄精的总黄酮含量均在第九蒸九制后含量达到了最高。

表4 不同龄节多花黄精不同蒸制次数总黄酮的比较Table 4 The comparison of Polygonatum sibiricum tota lflavonoids of sibiricum in different ages （%）

4 讨论

多花黄精多糖含量随着蒸制次数的增加，其整体上含量有明显的下降，这是因为在炮制过程中大量黄精多糖在高湿度和高温环境下水解成低聚糖、单糖[17,18]。从黄精多糖的含量得出1龄节和2龄节多花黄精炮制的最好方法为一蒸一制，黄精多糖含量最高，分别为21.98%和23.71%；3年龄节和混合龄节多花黄精最好的蒸制次数为三蒸三制，黄精多糖的含量分别为22.07%和22.84%。皂苷含量随着多花黄精炮制次数的增多皂苷含量逐步增加，其所有龄节在八蒸八制后皂苷含量基本稳定，这与杨正贤等[19]对于黄精九蒸九制过程中皂苷含量在四蒸四制趋于稳定的结果不一样，可能是由于规定蒸制的时间不同导致的。浸出物含量随蒸制次数的增加而下降，这与张洪坤等[20]得出的结论是一致的。黄酮含量在一蒸一制后，2龄节最高，为0.16%，这与陈怡等[7]研究多花黄精不同龄节得出2年龄节的黄酮最高结论吻合。本研究中多花黄精黄酮含量随着炮制时间和炮制次数的增加也在增加，均在九蒸九制的时候达到最高。因此，在实际生产中，不同龄节多花黄精及不同指标应选择不同的蒸制方式，这样才能更好地发挥药材本身的作用。