外敷透骨血竭散对类风湿性关节炎活动期anti-CCP、DKK-1影响的研究

肖智 胡筱薇 卿照前

摘要 目的：研究外敷透骨血竭散对类风湿性关节炎活动期抗环瓜氨酸多肽抗体（anti-CCP）、糖蛋白（DKK-1）的影响。方法：选取2017年3月至2018年3月长沙市第三医院收治的类风湿性关节炎患者100例作为研究对象，按照随机数字表法随机分为对照组和观察组，每组50例。对照组使用来氟米特片治疗，观察组患者使用来氟米特片联合外敷透骨血竭散治疗。比较2组患者临床指标，评价治疗前后中医证候情况，检测患者治疗前后肠球菌表面蛋白（ESP）、类风湿因子（RF）、DKK-1、Anti-CCP、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、超敏C反應蛋白（Hs-CRP）水平。结果：治疗后2组患者临床指标、中医证候评分、ESP、RF、DKK-1、Anti-CCP、IL-1、IL-6、TNF-α、Hs-CRP水平均低于治疗前（P<0.05）;且治疗后观察组临床指标、HAQ评分、中医证候评分、ESP、RF、DKK-1、Anti-CCP、IL-1、IL-6、TNF-α、Hs-CRP水平均低于对照组（P<0.05）。结论：运用外敷透骨血竭散对类风湿性关节炎患者治疗可直接用于病灶处，能迅速缓解关节疼痛，减轻患者痛苦，改善症状。

关键词 类风湿性关节炎;抗环瓜氨酸多肽抗体;糖蛋白;透骨血竭散;抗环瓜氨酸多肽抗体

Effect of External Application of Tougu Xuejie Powder on Anti-CCP and DKK-1 in Active Rheumatoid Arthritis

XIAO Zhi1，HU Xiaowei1，QING Zhaoqian2

（1 Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，the Third Hospital of Changsha，Changsha 410000，China; 2 Department of Internal Medicine，Changsha Hospital of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410000，China）

Abstract Objective：To study the effect of external application of Tougu Xuejie Powder on anti-cyclic citrullinated polypeptide antibody （anti-CCP） and glycoprotein （DKK-1） in active rheumatoid arthritis.Methods：A total of 100 patients with rheumatoid arthritis admitted to the Third Hospital of Changsha from March 2017 to March 2018 were selected as the research objects and were randomly divided into an observation group and a control group，with 50 cases in each group.The control group used Leflunomide tablets and the observation group used leflunomide tablets combined with Tougu Xuejie Powder for external application.The clinical indicators of the 2 groups of patients were compared.The clinical indicators of the two groups of patients were compared.The TCM syndromes before and after treatment were evaluated.The levels of Enterococcus surface protein （ESP），rheumatoid factor （RF），DKK-1，anti CCP，interleukin-1 （IL-1），interleukin-6 （IL-6），tumor necrosis factor （TNF-α），and high-sensitivity C-reactive protein （hs CRP） were detected before and after treatment.Results：After treatment，the clinical indicators，TCM syndrome score，ESP，RF，DKK-1，Anti-CCP，IL-1，IL-6，TNF-α，Hs-CRP levels in the 2 groups were lower than those before treatment （P<0.05）; and after treatment，the clinical indicators，HAQ score，TCM syndrome score，ESP，RF，DKK-1，Anti-CCP，IL-1，IL-6，TNF-α，Hs-CRP levels in the observation group were lower than those in the control medication group （P<0.05）.Conclusion：External application of Tougu Xuejie Powder combined with leflunomide tablets in the treatment of patients with rheumatoid arthritis can be directly applied to the lesion，and can quickly relieve joint pain，relieve the patient′s pain and improve symptoms.

Keywords Rheumatoid arthritis; Anti-CCP; DKK-1; Tougu Xuejie Powder; Anti-cyclic citrulline peptide antibody

中图分类号：R593.22文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.03.022

类风湿性关节炎是一种对称性、多关节的全身性自身免疫疾病。此病症，出现在各个年龄段，会对身体造成不同程度的损伤，如关节破坏、畸形、残疾等，最终丧失劳动能力，严重威胁着患者的生命健康和日常生活[1]。目前临床治疗此病症主要是通过免疫抑制剂等抗炎药来进行治疗，这些西药普遍价格高，不良反应大，患者依赖性高，长期服用还会诱发耐药等不良反应。中医治疗历史悠久，中药膏对缓解病症具有起效快、费用低、使用便捷、患者易于接纳等优势，是良好的治疗途径。但目前临床上无特效治疗类风湿关节炎的方案，常采用抗炎药治疗以减轻症状，但效果不佳[2]。因此在本文研究中，使用来氟米特联合外敷透骨血竭散对患者进行治疗，探究二者联合对活动期类风湿性关节炎的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年3月至2018年3月湖南省长沙市中医医院收治的类风湿性关节炎患者100例作为研究对象，按照随机数字表法将所有患者随机分为对照组和观察组，每组50例。对照组中男27例，女23例，年龄20～70岁，平均年龄（43.5±2.2）岁。观察组中男25例，女25例，年龄19～59岁，平均年龄（42.3±2.3）岁。2组患者在性别、平均年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会审批通过，本次研究所有患者及其家属均知情，均签署了家属知情同意书。

1.2 诊断标准 西医诊断标准：患者临床症状符合2010年欧洲和美国风湿学会及机构共同制定RA诊断标准;患者伴有关节肿胀及疼痛症状;入院前未服用其他药物。中医诊断标准：参照《实用中医风湿病学》和中医病症诊断疗效标准。

1.3 纳入标准 2组患者均符合上述诊断标准患者，并且近期未服用其他药物和其他方法进行治疗。

1.4 排除标准 非类风湿性关节炎患者;近期使用其他药物进行治疗的患者;所有对本文研究药物过敏的患者;哺乳期或妊娠期妇女;存在精神障碍、沟通障碍的患者。

1.5 脱落与剔除标准 1）不符合纳入标准而被纳入者;2）未按规定用药，无法判断疗效，或资料不全影响疗效或安全性判断者。3）虽符合纳入标准已纳入，但未做任何与本试验相关的任何治疗。4）患者依从性差，中途停止治疗者;5）发生严重并发症，研究无法继续者;6）病情严重恶化，必须采取其他治疗方法干预;7受试者因个人原因不能坚持治疗而自动放弃。

1.6 治疗方法 对照组使用来氟米特片，口服，10 mg/次，1次/d。观察组患者在对照组的基础上使用透骨血竭散进行治疗，方药组成：青风藤（西安青芷生物技术有限公司）18 g，白芥子（陈善堂药业集团）12 g，透骨草（广东元德中药饮片有限公司）、桂枝（临沂拓达工艺品有限公司）、补骨脂（武汉卡诺斯科技有限公司）、当归（神农中药材种植开发中心），艾叶（南阳仙草药业有限公司），血竭（河南居郡实业有限公司），松节、红花、白芍各12 g、川椒（泰安盛果源农业科技有限公司）6 g，土鳖虫6 g（亳州市亿弘堂药业有限公司），用温水把研磨后的透骨血竭散调和，纱布包裹外敷患处，敷药边缘超过红肿范围3～5 cm，无菌敷料覆盖包扎固定，2次/d。一个月为一个疗程，2组患者均治疗3个疗程。

1.7 观察指标

1.7.1 对2组患者治疗前后类风湿关节炎相关指标检测 对2组患者进行治疗随访，对2组患者关节压痛数、关节肿胀数、晨僵时间进行统计，并作组间比较。

1.7.2 中医证候评分 对2组患者中医证候进行评分。面色萎黄、畏寒肢冷、局部关节红肿灼热、烦躁便秘4项症状为主证，按无、轻、中、重度分别计为0、2、4、6分，其余此证按照无、轻、中、重度分别计为0、1、2、3分，中医症候总分=主证得分+次证得分。对2组患者主证得分及中医症候总分进行比较。

1.7.3 样本采集 抽取2组患者清晨空腹静脉血3 mL，将抽取的静脉血在抗凝管中保存，之后进行离心处理，离心机使用3 000 r/min的轉速离心机离心，离心处理时间大约为20 min左右，离心半径13.5 cm，之后离心后的静脉血放入洁净的EP试管中，将上层血清分离出，在温度为-80 ℃环境中保存，待用。

1.7.4 SP、RF、DKK-1、Anti-CCP水平检测 采用酶联免疫吸附试验，将采集到的标本，取包被液（pH值9.5 0.05 mol/L CB）适当稀释的抗RF、DKK-1、Anti-CCP、1 mL，添加至聚苯乙烯反应板孔中，加盖后温度4 ℃ 24 h，次日使用洗涤剂洗涤3次后，甩干。在各孔中加入稀释液（pH值7.4 0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液）稀释的待测标本0.1 mL，同时加入阳性和阴性的对照标本，在43 ℃置60 min，将液体移除洗涤3次后，甩干。在各孔中加入RF、Anti-CCP的酶标抗体0.1 mL，43 ℃置60 min。液体移去后洗涤3次，甩干。在各个空中加入底物液（0.1 mol/L Na2HPO4（Na2HPO4·12H2O 35.8 g/L）5.14 mL，0.05 mol/L枸橼酸（10.5 g/L）4.86 mL混匀，加入邻苯二胺（OPD）4 mg，置棕色小瓶中，临用时加30% H2O2 4.0 μL，混匀）0.1 mL，置黑20 min，在各孔中加入2 mol/L H2SO4 0.05 mL，终止反应。在酶标仪上读取A405吸收值，分析RF、DKK-1、Anti-CCP、水平。ESP采用PCR方法检测。

IL-1属于促炎细胞因子，正常情况下仅存在与关节软骨细胞和化膜细胞中。当类风湿关节炎发作时，关节软骨细胞和滑膜细胞可大量产生IL-1，并扩散到血清和关节液中，当其升高时，可作为类风湿关节炎发作的指标[16]。IL-6是由糖蛋白链组成的多肽，具有多生物活性，属于多效应细胞因子，可维持机体的免疫稳态，并在机体炎性反应中起着重要作用[17]。研究所示，当类风湿关节炎发作时，可在血清中测到IL-6较高水平，因此作为类风湿关节炎活动期严重程度的指标。TNF-α在关节病变中能刺激滑骨膜细胞和软骨细胞合成蛋白酶，还会过度分泌TNF-α刺激白细胞浸润，激活内皮细胞生成血管，导致骨膜纤维细胞增生，免疫细胞产生的TNF-α具有调节细胞的免疫性功能，刺激破骨细胞的成熟[18]。Hs-CRP是急性时反应蛋白，对机体炎性反应起促进作用，对类风湿关节炎也有重要影响[19-20]。对2组患者治疗前后IL-1、IL-6、TNF-α、Hs-CRP水平进行检测，结果显示，2组患者治疗前后IL-1、IL-6、TNF-α、Hs-CRP水平均低于治疗前，且外敷观察组患者IL-1、IL-6、TNF-α、Hs-CRP水平均低于对照组。此结果说明，两药联合在有效改善患者IL-1、IL-6、TNF-α、Hs-CRP水平，进而改善患者症状，起到治疗的效果。

综上所述，外敷透骨血竭散联合来氟米特片对活动期类风湿关节炎患者进行治疗，能对血清anti-CCP、DKK-1水平进行调控，治疗效果显著，具有一定的临床应用价值。

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（2019-07-18收稿 责任编辑：芮莉莉）