不同产地酒女贞子红景天苷、特女贞苷含量测定及聚类分析

2021-06-24张柏生李斌李茜于浩楠李伟

世界中医药 2021年3期

张柏生李斌李茜于浩楠李伟

摘要目的：研究不同产地酒女贞子红景天苷和特女贞苷含量，為女贞子饮片质量标准提供依据。方法：采用HPLC测定不同产地酒女贞子红景天苷和特女贞苷含量，运用聚类分析法，结合SPSS统计软件对测定结果进行综合分析。比较不同产地女贞子炮制前后含量变化。结果：通过高效液相色谱测定得到红景天苷在0.1～0.5 mg范围内呈良好的线性关系，红景天苷的回归方程为y=23 961 113.000 0x-219 608.500 0，R2=0.999 2，平均加样回收率为100.98%，RSD=3.46%（n=6）;通过高效液相色谱测定得到特女贞苷在50～250 μg范围内呈良好的线性关系，特女贞苷的回归方程为y=214 086.652 00x-5 991 365.000 0，R2=0.999 7，平均加样回收率为100.87%，RSD=2.42%（n=6），采用聚类分析可分为三类，其中第三类的成分含量综合评分排名较前，说明该类地区酒制女贞子质量较好。女贞子炮制后，红景天苷和特女贞苷均有明显的提高。结论：聚类分析具有方法简便，精密度高，可预测性较好的优点，可用于中药饮片质量分析。

关键词女贞子;HPLC;聚类分析;含量测定;红景天苷;特女贞苷;炮制;质量评价

Determination of Salidroside and Nuezhenide in Different Producing Areas and Cluster Analysis

ZHANG Bosheng1，LI Bin1，LI Qian1，YU Haonan2，LI Wei1

（1 Affiliated Chinese Medicine Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830000，China; 2 Xinjiang Medical University College of Traditional Chinese Medicine，Urumqi 830011，China）

Abstract Objective：To study the content of salidroside and nuezhenide in Ligustrum lucidum from different habitats，and to provide evidence for the standard of Ligustrum lucidum.Methods：The contents of salidroside and nuezhenide were determined by HPLC.The results of cluster analysis were combined with SPSS software to analyze the results.The changes of the content of Ligustrum lucidum from different producing areas before and after processing were compared.Results：The linearity of salidroside in the range of 0.1～0.5 mg was determined by high performance liquid chromatography.The regression equation of salidroside was y=23 961 113.000 0x-219 608.500 0，r2=0.999 2，and the average recovery rate was 100.98%，RSD=3.46% （n=6）; the high-performance liquid chromatographic determination of nuezhenide showed a good linear relationship in the range of 50～250 μg.The regression equation of nuezhenide was y=214 086.652 00x-5 991 365.000 0，r2=0.9997，the average recovery rate was 100.87%，RSD=2.42% （n=6），which can be divided into 3 categories by cluster analysis.The third category had higher comprehensive scores，indicating that the quality of the wine cellars in the region was good.After the preparation of Ligustrum lucidum，salidroside and nuezhenide had been significantly improved.Conclusion：Cluster analysis has the advantages of simple method，high precision and good predictability and it can be used for Chinese medicine decoction pieces.

Keywords Ligustrum lucidum; HPLC; Cluster analysis; Content determination; Salidroside; Lutein; Processing; Quality evaluation

中图分类号：R284.2;R917文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.03.011

女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。冬季果实成熟时采收，除去枝叶，稍蒸或置沸水中略烫后，干燥;或直接干燥。其性味甘、苦，凉。归肝、肾经，功效滋补肝肾，明目乌发。用于肝肾阴虚，眩晕耳鸣，腰膝酸软，须发早白，目暗不明，内热消渴，骨蒸潮热[1-3]。2015年版《中华人民共和国药典》一部收录其饮片包括女贞子、酒女贞子[4].临床常用酒女贞子补肝肾作用增强，多用于治疗头晕耳鸣、视物不清、须发早白。

目前酒女贞子质量标准尚存在诸多不足，临床常用缺少酒女贞子的指标成分[5]。本课题运用高效液相色谱研究全国十个不同地区所产酒女贞子的红景天苷和特女贞苷的含量[6-9]，并进行聚类分析，旨在为酒女贞子饮片的使用及质量标准提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器高效液相色谱仪（美国安捷伦公司，型号：1220）;旋转蒸发仪（上海亚荣机械有限公司，型号：RE-52）;电子天平（北京赛多利斯天平有限公司，型号：AL204）;电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司，型号：DHG-9240A）;超声波清洗器（上海之信仪器有限公司，型号：DL-360A）。

1.2 试剂红景天苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111926-201605），特女贞干对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110818-201708），其余试剂均为分析纯。

1.3 分析样品酒女贞子购自全国十个地区，具体见表1，经新疆医科大学附属中医医院田红林主任药师鉴定为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实的酒制品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件红景天苷色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水（20-80）为流动相;检测波长为275 nm。理论板数按红景天苷峰计算应不低于2 000。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，测定，既得[10-12]。

特女贞苷色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水（38-62）为流动相;检测波长为224 nm。理论板数按特女贞苷峰计算应不低于4 000。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，测定，既得。

2.2 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的红景天苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得红景天苷对照品溶液。

精密称取干燥至恒重的特女贞苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.25 mg的溶液，即得特女真苷对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备红景天苷供试品溶液：取本品粉末（过三号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，既得[13]。

特女真苷供试品溶液：取本品粉末（过三号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，既得。

2.4 线性关系的考察精确吸取红景天苷对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，特女贞苷对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，按“1.3.2”项下方法测定[14-15]。以峰面积（y）为纵坐标，对照品溶液的浓度（x）（mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，得到红景天苷回归方程为：y=23 961 113.000 0 x-219 608.500 0，R2=0.999 2。特女贞苷回归方程为：y=214 086.652 00x-5 991 365.000 0，R2=0.999 7。HPLC图谱见图1、2。

2.5 精密度实验准确吸取红景天苷对照品和特女贞苷对照品溶液2 mL，置于10 mL容量瓶中，共6份，按“1.3.2”项下操作测定，结果表明红景天苷RSD值0.39%，特女贞苷RSD值1.39%，符合精密試验中RSD在3%以内，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验精密吸取同一样品溶液，按“1.3.2”项下操作测定，每隔2 h测定1次。结果8 h内红景天苷RSD值1.98%，特女贞苷RSD值0.61%，表明样品溶液在8 h内基本稳定。

2.7 重复性试验按照样品溶液制备方法操作，分别制备样品溶液6份，按“1.3.2”项下操作测定，结果表明红景天苷RSD值1.51%，特女贞苷RSD值1.87%，重复性良好。

2.8 回收率试验精密量取已知红景天苷含量的样品溶液6份，加入红景天苷对照品和特女贞苷对照品溶液1 mL，按“1.3.2”项下的方法测定，计算回收率。结果表明红景天苷平均回收率为100.98%，RSD值3.46%，结果见表2。特女贞苷平均回收率为100.87%，RSD值2.42%，结果见表3。该方法准确可靠。

2.9 不同产地酒女贞子中红景天苷和特女贞子的含量测定按上述仪器条件对不同产地女贞子红景天苷和特女贞子苷样品进行测定，结果见表4。从表中可以看出10个产地酒女贞子中，四川成都产地的红景天苷和特女贞苷含量最高。结果显示，不同产地女贞子红景天苷和特女贞苷之间也存在着差异。究其原因，可能与气候、地域、品种等因素有关。考虑到上述存在的差异，有必要对10个产地女贞子红景天苷和特女贞苷进行聚类分析，找出红景天苷和特女贞苷的特征值，进而为女贞子的合理利用开发提供一定的科学依据与理论基础。

2.10 数据分析聚类分析是将样品按照品质特性相似度逐渐聚合在一起，最终按照类别的综合性质将多个品种聚合，从而完成聚类分析的过程。采用SPSS 19.0统计软件，采用组间连接法进行系统聚类分析，采用平方Eulidean距离，聚类分析结果见图3。将不同产地酒女贞子分为三类，第一类是陕西西安、湖北宜昌、湖南邵阳的酒女贞子。第二类为河南开封，浙江磐安、江苏徐州的酒女贞子。第三类为四川成都、安徽亳州、山东曹县、河北安国的酒女贞子，该4个地区酒女贞子综合评分排名较前，说明该地区酒女贞子质量较好。在分析过程中，发现各地的特女贞苷的含量差异有统计学意义，可以作为主要参考指标。

2.11 不同产地女贞子炮制前后中红景天苷和特女贞子的含量变化按照聚类分析的结果，测定四川成都、安徽亳州、山东曹县、河北安国相同批次的女贞子生品，按照“1.3.2”项下方法测定，比较女贞子炮制前后红景天苷和特女贞苷的含量变化。结果见下图4～5。从图中可见，女贞子炮制后红景天苷和特女贞苷的含量均有明显的提高。

3 讨论

女贞子主要产于我国的河南、陕西、江苏等地，当前药材市场上的女贞子存在以次充好的现象，对女贞子药材进行质量控制，保障临床用药的安全性。红景天苷是具有苯乙醇结构的苷类成分[16]，研究表明其具有保肝、抗肿瘤、增强免疫等多种药理作用。特女贞苷为裂环环烯醚萜苷类成分[6-7]，作为酒女贞子的特征成分，可以作为衡量酒女贞子的重要指标之一。

通过测定女贞子炮制前后红景天苷和特女贞苷的含量，发现酒制可以提高有效成分含量，增强疗效。女贞子临床上多用于滋补肝肾[17]，用量一般较大。若大剂量长时间服用生品，易滑肠致泄。因此，临床多上多制用[18]。本实验表明，通过酒制之后，女贞子的有效成分明显增加，从而达到了增效的目的。

聚类分析法[19]作为一种比较客观合理的统计方法，可以用于不同产地中药材质量评价的选择，具有实际的应用价值。本研究利用主成分分析法对不同产地女贞子红景天苷和特女贞苷的数据进行系统的分析，对不同产地女贞子质量状况进行评价和判断。本实验研究结果将为女贞子的质量评价及产地与有效成分含量的关系提供参考依据。

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