防风饮片炮制工艺研究

2021-06-23李俊明陈光宇谢梦洲

亚太传统医药 2021年6期

李俊明，陈光宇，何群，谢梦洲*

(1.中医诊断学湖南省重点实验室湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心，湖南长沙 410208；2.湖南中医药大学，湖南长沙 410208)

防风，别名铜芸、回云、回草、百枝、百种，为伞形科植物防风Saposhnikoviadivaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根，春、秋二季采挖未抽花茎植株的根，除去须根和泥沙晒干。主产中国黑龙江、四川、辽宁、内蒙古、河北、宁夏、甘肃、陕西、山西、山东等省区，生长于草原、丘陵、多砾石山坡，根供药用，在我国有数千年应用历史，是中医药常用药材，系中国东北地区著名药材之一。有祛风解表、胜湿止痛、止痉的功效，用于感冒头痛、周身关节痛、神经痛、风湿痹痛、风疹瘙痒、破伤风等症，味辛、甘，微温，被历版《中国药典》收载，现收载于2015版《中国药典》一部149-150页，防风的化学成分主要有色原酮类、香豆素类、挥发油和多糖类等，其中的色原酮是其发挥疗效的物质基础，主要有效成分为升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷系色原酮类主要成分，具有较好的解热、镇痛、抗炎、消肿等活性。2015版《中国药典》一部150页防风饮片炮制规定：“除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。”各版本的中药炮制规范中防风的炮制工艺基本上皆为净制、软化、切制和干燥，皆无确切的、具体的工艺参数，工艺变数大，欠规范，可操作性不强，批间差异大，重复性差，从而影响了防风饮片的质量。为使防风炮制工艺科学、客观、量化、数字化、可操作性强，故本实验以浸出物、升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷为评价指标，参照2015版《中国药典》一部、各种炮制规范及相关文献，对防风进行了炮制工艺参数优化研究，优选出科学、合理、稳定、可行的防风炮制工艺参数，为工业化生产提供质量一致的防风饮片。

1 仪器与药材

1.1 仪器

Ultimate 3000高效液相色谱系统(赛默飞世尔科技(中国)有限公司；包括G1316A四元梯度泵，G1313A标准型自动进样器，G1316A恒温箱，G1314A紫外检测器，Agilent Chemstation 色谱工作站)；中文液晶台式超声波清洗器(昆山美美超声仪器有限公司)；ME204E型电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；TCS-100型电子台秤(上海乾峰电子仪器有限公司)；PW135型中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；SHH.W21电子三用水箱(北京中兴伟业仪器有限公司)；QY-1中药切片机(温州顶历医疗器械有限公司)；101-0AB型电热鼓风干燥箱(北京中兴伟业仪器有限公司)。

1.2 药材及试剂

各批防风药材经王智教授鉴定为伞形科植物防风Saposhnikoviadivaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根；升麻素苷对照品(批号：111522-201712)购自中国食品药品检定研究院(国家药品标准物质)，供含量测定用(升麻素苷含量96.2%)；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品(批号：111523-201610)购自中国食品药品检定研究院(国家药品标准物质)，供含量测定用(5-O-甲基维斯阿米醇苷含量96.1%)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂皆为色谱纯或分析纯规格；液相色谱柱(月旭，Ultimate©XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm)。

2 方法与结果

2.1 防风浸出物的测定

将防风饮片粉碎过二号筛，取防风饮片粉末4.000 g，精密称定，用乙醇作溶剂，按照2015版《中国药典》[1]四部通则2201浸出物测定法测定。

2.2 升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定[1]

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验液相色谱柱(月旭，Ultimate©XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm)；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(40∶60)为流动相，检测波长为254 nm，流速：1.0 mL·min-1，进样量：10 μL；柱温：30 ℃，理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2 000。

2.2.2 升麻素苷对照品溶液的制备取升麻素苷对照品约0.010 0 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含升麻素苷1.08 mg的升麻素苷浓溶液1；精密移取1 mL升麻素苷浓溶液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含升麻素苷0.108 mg的升麻素苷浓溶液2；精密移取6 mL升麻素苷浓溶液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含升麻素苷64.8 μg的对照品溶液，过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中。

2.2.3 5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液制备取5-O-甲基维斯阿米醇苷约0.010 0 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含5-O-甲基维斯阿米醇苷1.02 mg的5-O-甲基维斯阿米醇苷浓溶液1；精密移取1 mL 5-O-甲基维斯阿米醇苷浓溶液1于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含5-O-甲基维斯阿米醇苷0.102 mg的5-O-甲基维斯阿米醇苷浓溶液2；精密移取6 mL5-O-甲基维斯阿米醇苷浓溶液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含5-O-甲基维斯阿米醇苷61.2 μg的对照品溶液，过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中，即得。

2.2.4 供试品溶液制备的药典法将防风原药材敲除去泥沙灰尘，去除杂草、非药用部位和虫蛀、霉败品，切片后粉碎，取过五号筛(80目)的防风原药材细粉，约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，称定重量，水浴回流2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取4 mL离心5 min，吸取上清液，过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中，即得。

2.2.5 测定法分别精密吸取对照品溶液各3 μL与供试品溶液2 μL，注入液相色谱仪，测定，见图1、图2、图3、图4。

图1 升麻素苷对照品图谱

图2 5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品图谱

图3 防风药材HPLC图谱

图4 阴性对照品(甲醇空白)图谱

2.3 防风药材前处理方法

取防风药材，除去泥沙、杂草、非药用部位和虫蛀、霉败、腐烂品，将其放入沥箕内，用自来水淋湿，旋转沥箕(模拟滚筒式洗药机)1 min，再用自来水冲洗1 min，如此操作数次，直至洗净为止(无肉眼可见泥沙灰尘等)，总计约11 min，使洁净度符合规定，甩干水，待切制。

2.4 正交设计试验优选防风最佳切片(炮制)工艺参数

2.4.1 正交设计试验因素水平的确定影响饮片炮制质量的主要因素有鼓风干燥温度、饮片厚度(药典规定切厚片，故从2～4 mm中选择)、铺层厚度、翻动次数。考察因素水平见表1。

表1 防风切片工艺正交试验结果

2.4.2 正交设计试验安排及数据统计处理以浸出物、升麻素苷(A)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(B)总和含量为评价指标，采用L9(34)正交设计试验安排表进行试验，其组合方案见表2。饮片样品制备：取洗净药材约1 000 g，按大小品质均分为9份，每份100 g，分别淋洗11 min，甩干水，1、4、7号切2 mm片，2、5、8号切3 mm片，3、6、9号切4 mm片，湿饮片按表1因素水平与表2组合试验号进行实验，对9个试验号所得饮片按照2.1～2.2评价指标及测定方法，结果见表2，极差分析见表3，因素间方差分析见表4，对有统计意义的因素进行水平间方差分析见表5。

表2 防风饮片炮制正交试验结果 (%)

由表3、表4、表5结果可知，以浸出物含量为评价指标时，因素水平皆无统计意义，各因素可取任意水平；以升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷总量为评价指标时，B因素有统计学意义，C因素影响最小，作为误差项，A、D因素无统计学意义，可取任意水平；对有统计意义的B因素进行水平间方差分析见表5，其水平取值按最高值确定，B因素取1水平或2水平，从经济学角度考虑，A因素取3水平，C因素取3水平，D因素取1水平；综合分析可得，A因素取3水平，B因素取1水平或2水平，C因素取3水平，D因素取1水平，最终确定最佳组合为A3B1或B2C3D1，即防风最佳切制炮制工艺为60 ℃鼓风干燥，切2～3 mm厚片，堆放3 cm厚，翻动1次。

表3 防风饮片炮制正交设计试验极差分析结果

表4 防风饮片炮制正交试验因素间方差分析(完全随机模型)

表5 防风饮片炮制正交设计试验水平间方差分析(完全随机模型)

2.4.3 防风炮制正交设计验证试验对15批防风饮片炮制工艺进行了放大验证试验，即每批1 000 g，首先将防风药材去除杂质泥沙，淋洗11 min，沥干，再按照防风最佳切制炮制工艺：60 ℃鼓风干燥，切2～3 mm厚片，铺层(堆放)3 cm厚，翻动1次进行防风炮制正交设计验证实验，结果见表6，评价指标增加了指纹图谱相似度一项。由表6结果可知，所有项目的量值传递率均在90%以上。