血NGAL、L-FABP、CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN

王小明　　彭四萍　廖洁

[摘要] 目的 探讨血中性粒细胞明胶酶相关性载脂蛋白（NGAL）、肝型脂肪酸结合蛋白（L-FABP）、胱抑素C（CysC）早期预测绝经期妇女经皮冠脉介入（PCI）术后对比剂肾病（CIN）。 方法 选择2018年6月至2020年9月我院收治的绝经期妇女PCI术后CIN患者80例为试验组，同期在我院行PCI术治疗且术后无CIN发生的绝经期妇女80例为对照组。对比两组NGAL、L-FABP、CysC差异，分析NGAL、L-FABP、CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN价值。 结果 试验组NGAL、L-FABP、CysC水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;NGAL早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的曲线下面积（AUC）为0.919，敏感度和特异度分别为88.96%、87.01%;L-FABP早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的AUC为0.851，敏感度和特异度分别为85.95%、88.11%;CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的AUC为0.922，敏感度和特异度分别为83.24%、94.68%。 结论 血NGAL、L-FABP、CysC均是早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的有效指标，可作为诊断CIN的“肌钙蛋白”。

[关键词] 绝经期妇女;对比剂肾病;经皮冠脉介入;中性粒细胞明胶酶相关性载脂蛋白;胱抑素C;肝型脂肪酸结合蛋白

[中图分类号] R587.2          [文献标识码] A          [文章編号] 1673-9701（2021）13-0021-04

Value of serum NGAL， L-FABP and CysC in early prediction of CIN of menopausal women after PCI

WANG Xiaoming1   PENG Siping2   LIAO  Jie1

1.Medical Laboratory， Pingxiang People′s Hospital in Jiangxi Province， Pingxiang   337000， China; 2.Department of Cardiovascular Internal Medicine， Pingxiang People′s Hospital in Jiangxi Province， Pingxiang   337000， China

[Abstract] Objective To explore the value of serum neutrophil gelatinase-associated apolipoprotein （NGAL）， liver fatty acid binding protein （L-FABP） and cystatin C （CysC） in the early prediction of contrast-induced nephropathy （CIN） for menopausal women after percutaneous coronary intervention（PCI）. Methods A total of 80 menopausal women with CIN after PCI in our hospital from June 2018 to September 2020 were selected as the experimental group， while 80 menopausal women without CIN after PCI in our hospital at the same time were selected as the control group. The differences of NGAL， L-FABP and CysC between the two groups were compared， and the value of NGAL， L-FABP and CysC in the early prediction of CIN of menopausal women after PCI was analyzed. Results The levels of NGAL， L-FABP and CysC were higher in the experimental group than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The area under curve （AUC） of NGAL for early prediction of CIN in menopausal women after PCI was 0.919， and the sensitivity and specificity were 88.96% and 87.01%，respectively. The AUC of L-FABP for early prediction of CIN in menopausal women after PCI was 0.851， and the sensitivity and specificity were 85.95% and 88.11%，respectively. The AUC of CysC for early prediction of CIN in menopausal women after PCI was 0.922， and the sensitivity and specificity of 83.24% and 94.68%， respectively. Conclusion Serum NGAL， L-FABP and CysC are all effective indicators for early prediction of CIN in menopausal women after PCI， and can be used as “troponin” for diagnosis of CIN.

[Key words] Menopausal women; Contrast agent nephropathy; Percutaneous coronary intervention; Neutrophil gelatinase-associated apolipoprotein; Cystatin C; Liver fatty acid binding protein

经皮冠脉介入（Percutaneous coronary intervention，PCI）是临床常用治疗手段，因血管内对比剂的使用增加会增加对比剂肾病（Contrast induced nephropathy，CIN）发生的风险[1]。CIN多由大剂量高渗性含碘造影剂所致，临床症状为尿中出现尿酸盐结晶、肾小管上皮细胞等，能够损害患者消化、循环系统，严重时可诱发肾衰竭、呼吸衰竭等并发症，甚至危及生命安全[2]。因此，早期准确预测CIN，尽早给予患者相应的治疗措施，对改善患者预后至关重要。因受蛋白摄入量、药物等因素影响，临床常用的血清肌酐（Serum creatinine，Scr）诊断滞后于实际肾小球滤过率的改变，一般在术后24 h出现水平升高，难以早期反映肾损伤[3]。血中性粒细胞明胶酶相关性载脂蛋白（Neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）、肝型脂肪酸结合蛋白（Liver fatty acid binding protein，L-FABP）、胱抑素C（Cystatin C，CysC）等腎标志物指标逐渐受到临床关注。本研究分析血NGAL、L-FABP、CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN，为临床早期诊断和治疗提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年6月至2020年9月我院收治的绝经期妇女PCI术后CIN患者80例为试验组，年龄51～69岁，平均（59.24±2.45）岁;对比剂使用剂量71～130 mL，平均（104.65±14.58）mL;CIN病程4～10 d，平均（7.21±0.64）d。选择同期在我院行PCI术治疗且术后无CIN发生的绝经期妇女80例为对照组，年龄52～70岁，平均（59.63±2.42）岁;对比剂使用剂量68～129 mL，平均（104.37±14.35）mL。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：认知功能正常;签署知情同意书;凝血功能正常;绝经期女性;试验组术前肾功能正常，碘造影剂使用24～72 h后血清Scr浓度从基线值相对增加>25%或绝对增加≥0.5 mg/dL，符合CIN中相关诊断标准[4];对照组肾功能正常。

排除标准：急慢性感染;急性心肌梗死;慢性心力衰竭;急性肾功能不全;对比剂过敏;行血液透析治疗。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

1.3 方法

采集两组患者术后24 h空腹静脉血5 mL，离心10 min，3000 r/min，获取上清液，放置在-20℃冰箱中备用。

1.3.1 血清NGAL、L-FABP检测  使用酶联免疫吸附试验法（ELISA）测定血清NGAL、L-FABP。分别设置校准品孔、空白孔和待测样品孔，在空白孔中加入标准品&样品稀释液100 μL，将100 μL标准品加入校准品孔，100 μL待测样品加入待测样品孔，每孔加入100 μL生物素化抗体，振荡混匀，给酶标板覆膜，孵育90 min，37℃恒温。酶标板底部加样品，尽量不接触孔壁，轻晃混匀，控制加样时间在10 min内。孔内液体弃去，依次加入稀释好的洗涤液，洗板3次，每孔浸泡30 s至1 min，液体甩干，去除孔内液体。每孔加入10 μL辣根过氧化物酶标记抗体亲和素工作液，避光放置，覆膜，孵育30 min，37℃恒温。取出酶标板，孔内液体弃去，每孔加入350 μL稀释好的洗涤缓冲液，室温下静置1 min，洗涤缓冲液甩去，重复上述操作5次。每孔加入90 μL底物溶液，酶标板加上覆膜，避光孵育15 min，37℃。分别在每孔中加入终止液50 μL，终止反应，15 min内使用伯乐680型酶标仪，在450 mm波长处对各孔的OD值检测，计算每组复孔的平均OD值。

1.3.2 血清CysC检测  使用颗粒增强散射免疫比浊法测定CysC。取250 μL样本前处理液和20 μL血清混匀，反应10 min，37℃。加入SAHasa抑制剂250 μL，室温反应5 min，加入腺苷脱氨酶溶液250 μL，室温反应5 min。将校准品或前处理后的样本加入试剂R1，反应5 min，37℃。在加入试剂R2，反应5 min，37℃。试剂R2反应1 min、5 min后分别读取第1个和第2个吸光度值。校准品浓度为0时，试剂RI中的SAH mAb抗体全部与试剂R2乳胶颗粒上交联SAH抗原形成免疫复合物，吸光度达最高;校准品浓度为非0时，校准品中的ASH会结合试剂R1中的SAH mAb抗体反应，剩下的SAH mAb与试剂R2乳胶颗粒上交联SAH抗原形成免疫复合物，吸光度对于0浓度吸光度。按照样本中SAH浓度明确标准曲线。仪器为贝克曼AU5800全自动生化分析仪。

1.4 观察指标

①对比两组NGAL、L-FABP、CysC差异;②分析NGAL、L-FABP、CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN价值。

1.5 统计学方法

应用SPSS 21.0统计学软件分析数据，计量资料用（x±s）表示，采用t检验，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，绘制受试者工作曲线（ROC），并计算曲线下面积（AUC），分析NGAL、L-FABP、CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN价值。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组NGAL、L-FABP、CysC水平比较

试验组NGAL、L-FABP、CysC水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 NGAL、L-FABP、CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN价值

NGAL早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的AUC为0.919，敏感度和特异度分别为88.96%、87.01%;L-FABP早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的AUC为0.851，敏感度和特異度分别为85.95%、88.11%;CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的AUC为0.922，敏感度和特异度分别为83.24%、94.68%。

3 讨论

CIN是医院获得性肾衰竭的主要因素之一，能够增加并发症、延长患者住院时间，并可增加远期不良事件的发生，病死率约为1.2%～16.0%。尚不十分清楚CIN发病机制，可能与以下几点因素有关：①对比剂能够造成肾血管短暂扩张和持续4 h的收缩，诱发髓质缺血，肾小管上皮严重缺氧而发生损伤;②对肾小管上皮的直接毒性作用;③对比剂会增加尿酸盐重吸收，尿酸盐沉积会阻塞肾小管，或诱发Tamm-Horsfall尿蛋白分泌、沉淀，阻塞肾小管，造成肾小管进一步损伤[5-6]。大部分CIN是在对比剂使用后2～3 d后出发生Scr升高，4～5 d后方可达到峰值，而多数PCI术治疗患者会在术后1～3 d内出院，住院期间期间检查的Scr难以早期准确反映患者肾损害，易造成患者错失治疗最佳时机，影响预后恢复[7-8]。

NGAL属于载脂蛋白超家族成员，生理状态下在覆盖活化的上皮细胞的各种组织和器官中不存在NGAL，仅表达于粒细胞前体及受损的活化上皮细胞中[9]。当肾脏发生损伤时，位于肾小管上皮内的NGAL可短时间内迅速升高，短期内可在血液中被检测到。NGAL是在肾组织产生mRNA和蛋白质的最早最快上升的基因，为无偏转录，肾受损后几分钟至几小时，受损的远端肾单位诱导和释放NGAL，可作为诊断肾损伤敏感且可靠的生物标志物之一[10-11]。L-FABP属于游离脂肪结合蛋白，是维持机体稳态的重要因素，参与游离脂肪酸在细胞内的代谢、转化等途径，在肾脏近端小管也有表达[12-13]。肾损伤时，大量位于肾近曲小管中的游离脂肪酸过度堆积，其过氧化产物和氧化产物能够造成肾小管损伤进一步加重，促使细胞内L-FABP呈高表达，是反映肾组织损伤的敏感指标之一。CysC是一种广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂蛋白质，能在所有的有核细胞内以恒定速度持续转录与表达，正常情况下血清中含量极低，且不会受到年龄、性别、肝脏疾病等因素影响[14-15]。CysC分子量小，能够经肾小球滤过，完全被肾小管上皮细胞重吸收并于细胞内降解，是反映肾小球滤过率变化的理想标志物。与Scr相比，CysC预测到CIN发生早1～2 d。本研究中，试验组NGAL、L-FABP、CysC水平高于对照组，NGAL早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的AUC为0.919，敏感度和特异度分别为88.96%、87.01%;L-FABP早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的AUC为0.851，敏感度和特异度分别为85.95%、88.11%;CysC早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的AUC为0.922，敏感度和特异度分别为83.24%、94.68%，提示血NGAL、L-FABP、CysC均是早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的有效指标，能够筛查PCI术后高危患者实施重点监测，早期给予患者有效的干预措施，改善预后。

综上所述，血NGAL、L-FABP、CysC是早期预测绝经期妇女PCI术后CIN的有效指标，能够筛查绝经期妇女PCI术后CIN高危患者，指导临床实施相应防治措施。

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（收稿日期：2020-12-12）