蓖麻叶质量控制研究

王明金 王爱民 刘春花 张 旭 李勇军 王永林 林昌虎*

1.贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室，贵州 贵阳 550004；2.贵州医科大学药学院，贵州 贵阳 550004；3.贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳 550004

蓖麻叶为大戟科植物蓖麻RicinuscommunisL.的新鲜或干燥的叶。蓖麻为一年生粗壮草本或草质灌木，高达5米；小枝、叶和花序通常被白霜，茎多液汁[1-2]。蓖麻叶味苦、辛，性平，小毒，具有清热解毒、拔毒消肿、祛风除湿的功效，主要用于治疗风湿麻痹、咳嗽痰喘、子宫下垂、痈疮肿毒等，为贵州少数民族用药[3]。据报道，蓖麻叶中含有含有生物碱、挥发油、萜类等成分[4-8]。蓖麻资源丰富，除了《中国药典》收载的蓖麻子和蓖麻油[9]，蓖麻叶也具有良好的药用价值和应用前景。但是目前关于蓖麻叶的质量控制方法尚不完善，仅收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003版中，质量控制项目简单，仅有性状鉴定。因此，本研究采用显微鉴别法、薄层色谱(TLC)对蓖麻叶进行定性研究，同时检查项增加水分、总灰分以及浸出物，为完善蓖麻叶的质量控制标准提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 50i显微镜及DS-Fi2显微成像系统(日本尼康公司)； REPROSTAR3薄层数码成像系统(瑞士CAMAG)；EL204电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；AE240十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；CQ250A-TS超声波清洗机(250 W，频率40 kHz，上海跃进医用光学器械厂)；DK-98-Ⅱ型水浴锅(天津泰斯特有限公司)；WP-ΜP-II-20实验室超纯水机(四川沃特尔水处理设备有限公司)。

1.2 试药 水合氯醛(AR，国药集团化学试剂有限公司)，丙三醇(AR，天津市致远化学试剂有限公司)；氢氧化钾、无水乙醇、甲醇、乙醚购自国药集团化学试剂有限公司，三氯甲烷、乙酸乙酯购自上海申博化工有限公司，硫酸购自重庆川东化工(集团)有限公司，环己烷、磷钼酸、香兰素购自天津市科密欧化学试剂有限公司，石油醚购自科安隆博华(天津)医药化学有限公司，乙酸丁酯购自国营重庆无机化学试剂厂，以上试剂均为分析纯；三乙胺(AR，国药集团化学试剂有限公司)；

青岛海洋硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)；烟台江友黄海硅胶HSG板(烟台江友硅胶开发有限公司)；青岛鼎康硅胶G板(青岛鼎康硅胶有限公司)。

11批的蓖麻叶(批号：20170816、20170816、20170901、20170902、20180701、20180715、20180720、20180722、20180726、20180801、20180803)，分别产自贵州贞丰，贵州贞丰，贵州平塘，贵州安顺，贵州镇宁，贵州金沙，贵州兴义，贵州兴义，贵州金沙，贵州盘州，贵州关岭。所有药材经贵州医科大学药学院张旭副教授鉴定为大戟科植物蓖麻RicinuscommunisL.的干燥叶，以来自镇宁的样品(批号：20180701)为对照药材，代表性标本保存于贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室。

2 实验方法

2.1 显微鉴别 蓖麻叶粉碎，过4号筛，挑去少许粉末置载玻片上，滴加蒸馏水、水合氯醛试液(必要时加热透化)，盖上盖玻片，置显微镜下观察，记录拍照。

2.2 薄层色谱鉴别 取本品粉末1 g，加无水乙醇10 mL，冷浸20 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取蓖麻叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各1 μL，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。

2.3 水分、总灰分、水溶性浸出物测定取本品粉末(过二号筛)2 g，精密称定，照《中国药典》(2015版)通则0832水分测定法(第二法 烘干法)测定[10]102。

取本品粉末2 g，照《中国药典》(2015版)通则2302 灰分测定法(总灰分测定法)测定[10]204，根据残渣重量，计算本品中总灰分的含量(%)。

取本品粉末(过二号筛)2 g，精密称定，置100 mL的锥形瓶中，精密加水50 mL，照《中国药典》(2015版)通则2201浸出物测定法(水溶性浸出物测定法 热浸法)测定[10]202，以干燥品计算本品中水溶性浸出物的含量(%)。

3 实验结果

3.1 显微鉴别结果 经过对多批蓖麻叶进行粉末鉴别试验，对其特有的结构进行总结，其粉末显微结构如图1所示，本品粉末为深绿色。叶表皮细胞呈不规则形状，气孔呈平轴式，直径21～23 μm；导管多为螺纹，直径3～42 μm；草酸钙簇晶较多，直径9～39 μm，有的簇晶排列成行；晶鞘纤维多，直径8～14 μm；纤维散在，直径7～23 μm，壁厚，纹孔明显。

3.2 薄层鉴别结果

3.2.1 系统适用性试验 照上述2.2的方法对蓖麻叶进行薄层色谱鉴别。结果如图2所示，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点。

3.2.2 耐用性试验

3.2.2.1 不同品牌硅胶G板考察结果 为了评价该方法的实用性和可靠性，按拟定色谱条件，分别考察青岛海洋硅胶G板、烟台江友黄海硅胶HSG板和青岛鼎康硅胶G板的展开效果。结果如图3所示，上述三种品牌硅胶G薄层色谱板均能较好的对斑点进行分离。

3.2.2.2 不同展开温度的考察 按拟定色谱条件，分别在20℃、25℃、35℃下展开，相对湿度为50%下展开，考察不同温度对展开的影响。结果如图4所示，不同温度下供试品色谱中，各个斑点清晰，温度在20～35℃均能较好的鉴别蓖麻叶，说明温度对该方法的展开结果影响不大。

3.2.2.3 不同展开湿度的考察 按拟定色谱条件，分别在湿度30%、50%、70%下展开，考察不同相对温度对展开的影响。结果如图5所示，各斑点显示清晰，相对湿度在30%～70%之间均能较好的鉴别蓖麻叶，说明相对湿度对该方法下的试验结果影响不大。

3.2.3 稳定性试验 每天制备一份供试品溶液，连续3 d，室温保存，在第4天再分别制备一份供试品溶液和对照药材溶液，将不同放置时间的供试品溶液点于同一硅胶G板上，展开，显色，以考察供试品溶液的稳定性。对稳定性考察结果如图6所示，供试品溶液在室温下放置72 h稳定性良好。

2.2.4 样品鉴别结果 以镇宁(批号20180701)为对照药材，照建立的薄层色谱鉴别方法对所收集的10批蓖麻叶鉴别结果如图7所示，供试品色谱中，在与对照药材相同位置处，显示相同颜色的斑点。

3.3 水分、总灰分、水溶性浸出物测定结果 照2.3项下方法测定水分、总灰分、水溶性浸出物，分别计算结果，结果见表1。11批干蓖麻叶水分平均含量范围为9.69%～13.8%，平均值为13.85%；总灰分含量范围为8.53%～12.12%，平均值为10.39%；水溶性浸出物含量范围为16.34%～24.48%，平均值为20.51%。

表1 干蓖麻叶水分、总灰分和水溶性浸出物测定结果

3 讨论与小结

3.1 显微鉴别方法的考察 中药鉴定方法有传统鉴定方法和新技术方法，性状鉴定、来源鉴定、理化鉴定、显微鉴定是传统中药鉴定的主要四类方法，其中显微鉴定是目前中药鉴别的主要方法之一[11-12]。中药显微鉴定是应用显微技术对中药进行分析或鉴定，即应用显微镜对中药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种鉴别方法[13]。此次试验鉴定的为蓖麻叶，属于叶类中药，大部分根、茎、叶、花、果实、根皮、茎皮类均可采用粉末制片法[14]，因此采用粉末制片法对蓖麻叶进行显微鉴定，该方法简单、快速，能清晰有效地观察到蓖麻叶粉末中的特征显微结构，能有效的鉴定蓖麻叶。

3.2 提取条件及展开系统的考察 薄层色谱法是在合适大小的玻璃板上，将硅胶、氧化铝、聚酰胺键等吸附剂制成的固定相均匀的铺在板上，然后将样品溶液点于薄层板上，在适当的展开容器中用合适的展开溶剂展开，当展开到适当距离时取出，显色，最后将所得色谱图同标准物质按同法所得的色谱图比较，用于定性、定量试验[15-16]。此次试验通过对不同提取方法、提取溶剂、提取时间等因素的考察，确定最佳提取条件为本品粉末1 g，加无水乙醇10 mL,冷浸20 min，滤过，取滤液作为供试品溶液，该方法简单易行。同时考察了不同展开剂和检视方法，确定以石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25∶4∶0.1)为最终的展开系统，以磷钼酸试液为显色剂，结果显示分离度好，斑点清晰。同时对不品牌的薄层色谱板、不同温度、不同湿度，稳定性进行考察，结果显示该方法可靠、稳定，最终用于11批样品的鉴定，均能较好的鉴定各批蓖麻叶药材。

3.3 小结 本研究所建立的蓖麻叶质量控制方法具有简便、稳定和可靠的特点，显微镜下观察到气孔为平轴式，导管为螺纹，草酸钙簇晶存在于叶肉薄壁细胞中，晶鞘纤维多，纤维散在，同时测量了各组织的直径，以上特征均可作为鉴定蓖麻叶粉末特征的依据；薄层色谱结果显示主斑点显示清晰，且各斑点之间分离度良好，在相同位置与对照药材显示相同颜色的斑点，由此进一步说明所建立的方法稳定、可靠、重现性好，适用于蓖麻叶的鉴别；水分、总灰分、浸出物结果显示11批蓖麻叶水分平均含量范围9.69%～13.8%，平均含量为13.85%；总灰分平均含量范围为8.53%～12.12%，平均含量为10.39%；浸出物平均含量范围为16.34%～24.48%，平均含量为20.51%。因此可暂定水分、总灰分、浸出物分别不得超过15%、13%、18%。11批蓖麻叶的水分、总灰分、浸出物含量存在差异可能与药材的不同产地、不同气候气候、采收时间有关。综上，本实验较为系统的研究了蓖麻叶质量控制方法，并且该方法稳定、简便可靠，能为蓖麻叶的质量控制提供依据。