湖南湘潭县屠宰生猪沙门氏菌和链球菌感染情况调查及耐药性分析

王大春，李庆丰

（湘潭县锦石乡人民政府农业服务中心，湖南 湘潭 411228）

在生猪养殖环境中存在各种机会致病性病原，健康猪群感染此类病原后不表现明显的临床症状，但可持续性携带。沙门氏菌属于革兰氏阴性菌，该病原可感染多种动物（如猪、牛、羊和人等），其中猪感染该病后可出现肠炎和败血症，继而造成严重的经济损失。目前我国报道的沙门氏菌有超过300种血清型，且不同血清型菌株致病性具有差异[1-2]。猪链球菌在猪场环境中广泛存在，猪群感染该病后可出现严重的临床症状，其中包括败血症、脑膜炎等，且猪链球菌血清型2型可感染人，且近年来人链球菌病发生部分原因是由于患者接触或食用被链球菌污染的猪肉所导致[3-4]。

2019年4月至2020年8月，从湘潭县及周边地区屠宰场收集生猪淋巴结样品共302份，通过细菌分离及鉴定，调查该地区健康屠宰猪沙门氏菌和链球菌隐性感染情况，同时对菌株的血清型进行调查，最后通过药敏试验确定不同菌株的耐药情况，旨在为临床上沙门氏菌和链球菌的防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2019年4月至2020年8月，从湘潭县及周边地区屠宰场共采集屠宰猪淋巴结样品共302份，所有屠宰猪均为肥育猪，且外表健康，无临床疾病。记录采集样本信息（如来源、日期等）后将其低温送至湘潭市动物疫病预防控制中心，待检。

1.2 细菌分离与鉴定

在超净工作台下用手术剪和手术刀将组织切开，使用接种环蘸取少量组织液接种于鲜血营养琼脂培养基，在37 ℃恒温箱内培养24 h，其后挑选疑似链球菌或沙门氏菌的单菌落再次接种于鲜血营养琼脂培养基进行纯化，培养后将纯化的菌落进行革兰氏染色鉴定。

1.3 血清型鉴定

以PCR法对猪链球菌进行血清型鉴定。对疑似链球菌菌株进行扩增后，以DNA提取试剂盒提取细菌基因组DNA，设计针对链球菌2型、7型和9型血清型检测特异性引物[5]，以细菌基因组DNA为模板，以PCR法对获得的链球菌进行血清型鉴定；根据参考文献[3]，参考White-Kauffmann-Le Minor抗原表，对本文获得的沙门氏菌菌株进行血清型鉴定。

1.4 药敏试验

用生理盐水将本研究分离的沙门氏菌或链球菌稀释至0.5 MCF（麦氏浊度），取50 μL菌液均匀涂布于鲜血琼脂固体培养基表面，待菌液稍干后在培养基表面贴上含不同抗生素的纸片，在37 ℃恒温箱内培养24 h后，用卡尺记录各药敏纸片的抑菌圈大小，参考相关标准判定菌株对药物的敏感性[6]。

2 调查结果

2.1 湘潭县及周边地区屠宰生猪来源样品沙门氏菌和链球菌感染情况调查结果

调查结果显示（表1），被检测的302份样品中沙门氏菌和链球菌阳性样品分别为17和22份，检出率分别为5.63%和7.28%，且不同地区来源样品均含有沙门氏菌或链球菌阳性样品，但检出率差异相对较小，其中湘潭县、雨湖区和韶山市来源样品中沙门氏菌检出率分别为4.63%、6.14%和6.25%，而链球菌检出率分别为9.26%、7.02%和5.00%。

表1 湘潭县及周边地区屠宰生猪来源样品沙门氏菌和链球菌感染情况调查结果

2.2 沙门氏菌和链球菌血清型检测结果

通过对本文获得的17株沙门氏菌进行血清型鉴定，共鉴定出4种血清型，分别为德尔卑沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌和伦敦沙门氏菌，其中德尔卑沙门氏菌所占比例最高，为52.94%（9/17），而鼠伤寒沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌和伦敦沙门氏菌所占比例分别为23.53%（4/17）、11.76%（2/17）和11.76%（2/17）；22株链球菌中共鉴定出2种血清型，分别为2型和9型链球菌，其所占比例分别为27.27%（6/22）和72.73%（16/22）。

2.3 药敏试验结果

分别将本文获得的17株沙门氏菌和22株链球菌进行药敏试验，结果如表2所示。本研究分离的沙门氏菌对头孢菌素类抗生素、链霉素和环丙沙星较为敏感，其耐药率分别为0（头孢他啶）、0（头孢唑林）、0和5.88%，对阿莫西林、氟苯尼考等抗生素属于中介敏感，其耐药率分别为47.06%和47.06%，对大观霉素、庆大霉素和磺胺甲氧嘧啶等抗生素耐药率较高，分别为76.47%、76.47%和88.24%；而链球菌也对头孢他啶和头孢唑林具有高度敏感性，其耐药率均为0，但对氟苯尼考、环丙沙星、氨苄西林等抗生素耐药性较强，其耐药率分别为81.82%、72.73%和77.27%。

表2 本研究分离的沙门氏菌和链球菌菌株药敏试验结果 %

3 讨论与分析

猪肉是我国消费最多的肉类之一，而屠宰场来源肉类食源性致病菌感染（污染）问题关系到食品卫生安全，因此对屠宰场来源猪肉样品中沙门氏菌和链球菌感染情况进行调查具有较重要的公共卫生意义。湘潭县生猪养殖业发达，本文选择该地具有代表性屠宰场进行样品采集，分离沙门氏菌和链球菌后进行血清型鉴定及耐药性分析，分别分离出17和22株菌株，其分离率分别为5.63%和7.28%，其中沙门氏菌分离率结果与方忠意等[2]和高延玲等[7]基本一致，分别为5.63%和6.90%。其研究结果提示湘潭县部分地区屠宰部分肥育猪存在沙门氏菌和（或）链球菌感染情况，相关部门需引起重视。

进一步血清型分析结果发现，17株沙门氏菌菌株鉴定出4种血清型，分别是德尔卑沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌和伦敦沙门氏菌，其中德尔卑沙门氏菌（52.94%）和鼠伤寒沙门氏菌（23.53%）所占比例较高，这与四川地区猪肉生产链沙门氏菌血清型优势菌特征基本一致[8]，同时也提示这两种血清型沙门氏菌在我国生产中普遍存在，对人畜健康威胁较大。此外，22株猪链球菌分离株中存在2型和9型血清型，其所占比例分别为27.27%（6/22）和72.73%（16/22），本研究中2型链球菌所占比例低于刘泽文等[9]湖北地区调查结果（47.1%，16/34），这可能与样品来源及数量等具有差异有关，但由于2型链球菌是重要的食源性病原，其威胁公共卫生安全的问题不能忽视。

进一步药敏试验结果表明，本文获得的沙门氏菌和链球菌均对头孢唑林和头孢他啶敏感，此外，沙门氏菌对链霉素和环丙沙星也较为敏感，其耐药率均低于10.0%，对磺胺甲氧嘧啶、庆大霉素等耐药率均高于60.0%，但链球菌对四环素、氟苯尼考等具有较高的耐药性，故而在临床上用药应使用对细菌敏感的药物，可采用联合用药方式同时对链球菌和沙门氏菌进行防控。