饵料强化剂对牙鲆苗种繁育期存活及生长的影响

赵春暖 任利群 于涛 蔡忠强 郑言鑫 王喜文 陈洋

摘要 以裂壶藻为饵料强化剂，设置不同的裂壶藻强化剂使用量及强化时间，研究其对繁育期牙鲆苗种生长发育的影响。结果表明，轮虫强化密度为450个/mL，卤幼强化密度为150个/mL。当轮虫强化剂使用量为0.09 g/L，强化时间12 h，卤幼饵料强化剂使用量为0.10 g/L、强化时间20 h时，牙鲆苗种的发育、驯化情况最好，存活率最高，生长速度最快。通过对强化持续期的对比发现，强化饵料投喂20 d时牙鲆苗种变态存活率趋于稳定，无白化、病害发生，个体生长均匀、生长速度快。

关键词 牙鲆;轮虫;卤虫;强化剂使用量

中图分类号 S961文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2021）10-0089-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.10.024

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Effects of Diet Enhancer on the Survival and Growth of Paralichthys olivaceus Seedlings during the Breeding Period

ZHAO Chun-nuan，REN Li-qun，YU Tao et al （Changdao Multiplication Experimental Station，Chinese Academy of Fishery Sciences，Yantai，Shandong 265800）

Abstract Taking Schizochytrium sp. as bait enhancer，different enhancer dose and intensification time were set up to study their effects on the growth of Paralichthys olivaceus seedlings during the breeding period.The enhanced density of rotifer was 450 ind./mL，and the density of artemia was 150 ind./mL.When the enhanced dose of rotifer was 0.09 g/L，the intensification time was 12 h，the enhanced dose of artemia was 0.10 g/L，the intensification time was 20 h，the development and domestication of P.olivaceus seedlings were the best，the survival rate was the highest，and the growth rate was the fastest.Through the comparison of the strengthening duration，it was found that the metamorphic survival rate of P.olivaceus seedlings tended to be stable after P.olivaceus seedlings were fed with the bait enhancer 20 days，no albinism or disease occurred，the individual grew evenly and the growth rate was fast.

Key words Paralichthys olivaceus;Rotifers;Artemia;Enhanced dose

在牙鲆苗種繁育过程中，饵料强化剂发挥着重要作用，影响牙鲆苗种的正常发育，是饵料驯化过程中必不可少的重要材料。笔者立足牙鲆海水鱼类的饵料营养强化，开展牙鲆繁育各个阶段的开口饵料营养强化剂使用量、营养强化持续期研究，以期为海水鱼类繁育工作提供有效参考，丰富牙鲆健康繁育技术，提高牙鲆存活率、生长速度，有效增强增殖放流海水鱼苗种的放流品质和放流成效。研究表明，投喂未经营养强化的轮虫、卤虫无节幼体不利于苗种的成活、生长以及抗病、抗逆能力[1-3]。雷霁霖院士是工厂化育苗与养殖产业化的主要奠基人和学科带头人。研究发现，海水仔稚鱼对脂类营养具有一定的需求[4]。裂壶藻粉是由裂殖壶菌的紫外诱变菌株经发酵培养、干燥发酵液得到的藻粉。大量研究表明，二十二碳六烯酸（DHA）对动物机体的很多功能都具有促进作用[5-8]。用裂殖壶藻粉作为轮虫和卤虫的营养强化剂，提高轮虫和卤虫体内的DHA含量，再利用轮虫、卤虫到幼鱼的食物链提高幼鱼的DHA含量，从而提高幼鱼的成活率和抗病害能力，能有效防止 “白化病”，可确保鱼苗等的存活率和抗应激能力。 近年来，国内外报道主要集中在强化轮虫、卤虫二十碳五烯酸（EPA）、DHA的含量及配比研究[9-10]。开口饵料强化剂中含有高度

不饱和脂肪酸，而海水鱼类所必需的脂肪酸对其生长发育具有重要的影响[11-18]。裂壶藻不仅多不饱和脂肪酸含量高，而且作为海洋微藻，其干粉制品实用、无污染，与鱼油及其他营养强化剂相比更易于被饵料生物吸收利用[19]。其中，高度不饱和脂肪酸的数量及种类直接影响鱼类的存活率、生长速度等[20-21]。为探究裂壶藻强化饵料生物时间及其培育期间强化时间对牙鲆苗种存活、生长发育、变态体色及抗病、抗逆能力的影响，笔者开展了牙鲆的车间苗种繁育试验，以期在正常生产培育、降本增效的基础上，获得不同饵料的最佳裂壶藻强化剂使用量以及最适宜的饵料生物强化持续期，研究在适宜条件下牙鲆苗种的生长情况。

1 材料与方法

1.1 亲本采集 试验所选亲本为全雌牙鲆种鱼，经控温调光自然采卵，优质牙鲆卵选自中国水产科学研究院北戴河增殖实验站。

1.2 育苗前期准备 清洗、消毒育苗池晾晒待用，每池布设气石8个，均匀分布，顶层围绕育苗池布设电线（挂灯调光），车间透明玻璃安装防晒窗帘，避免强光照射车间边缘育苗池致鱼死亡，制作吸底装备，清除底池污物;合理安放饵料孵化桶，用于后期轮虫、卤虫无节幼体的培养、孵化及营养强化，同时准备20、40、60、80目网箱用于日常换水;制作120、200目网袋用于富集轮虫、卤虫无节幼体，卤虫孵化桶上方布设灯泡及加热棒，以便于卤虫的孵化和营养强化，同时做好育苗工作的其他前期准备，检查水电设备是否正常运转。

1.3 日常管理 牙鲆卵入池孵化，育苗池水起始温度18 ℃，每天控制升温0.5～1.0 ℃，逐渐升温至20 ℃。仔鱼变态伏底前期，育苗池每天吸底除污，用网箱水管虹吸换水（图1）。网目随鱼体生长逐渐更换（试用不漏鱼苗后使用），日换水量逐渐加大，保持育苗池水质良好;调节气石，保证育苗池的溶氧量，随鱼体生长逐渐加大充气量。

育苗期间仔细观察鱼体的生长情况，监测育苗池饵料密度，控制轮虫、卤虫无节幼体及后期配合饲料的投喂密度，及时补充育苗池饵料，根据实际情况调节投喂量，育苗池泼洒一定量的小球藻。试验期间，冰冻卤虫卵孵化后，采用80目+120目网袋收集卤虫无节幼体（图1），将孵化不良或未孵化的卤虫壳过滤在外。

1.4 试验方法

1.4.1 轮虫强化剂使用量试验。轮虫经运输至培育池，泼洒小球藻投喂暂养，用裂壶藻粉作为营养强化剂，经富集待强化的轮虫密度控制在450个/mL，设计5种裂壶藻强化剂使用量，分别为0.05、0.07、0.09、0.11、0.13 g/L，在牙鲆卵入池孵化2 d左右，待牙鲆卵开口摄食饵料时，通过投喂5种不同强化剂使用量的轮虫，培育投喂9 d后摄食投喂卤虫无节幼体前，比较各组牙鲆苗种摄食轮虫后的存活率及生长情况，探索强化轮虫的裂壶藻适宜强化剂使用量。试验后，选择此使用量投喂新一批牙鲆卵，进行后期试验。

1.4.2 卤虫无节幼体强化剂使用量试验。选择冰冻卤虫卵进行试验，冷库取冰冻卵解冻，经淡水浸泡1 h，倒入孵化桶孵化，调温30 ℃，开灯孵化24 h后，遮阳收集卤虫无节幼体，设计5个不同强化剂使用量试验组，裂壶藻强化剂使用量分别为0.08、0.09、0.10、0.11、0.12 g/L，待牙鲆苗种摄食轮虫9 d后，投喂5组强化卤虫无节幼体10 d，比较不同强化剂使用量下牙鲆苗种摄食卤虫无节幼体的存活率及生长情况，探索强化卤虫无节幼体的最佳裂壶藻粉使用量，选择最佳强化剂使用量下的牙鲆苗种继续下一步的车间培育。

1.4.3 卤虫无节幼体强化持续期试验。

轮虫、卤虫已被广泛用作海水鱼类的开口饵料，但其缺乏不饱和脂肪酸，因此在投喂牙鲆苗种摄食前需要进行饵料强化。该试验采用优质裂壶藻粉作为饵料强化剂，设计不同强化持续期（持续期内完成饵料驯化），分别为14、16、18、20、22 d，定期记录数据，待孵化40 d后比较不同强化持续期的牙鲆苗种生长情况，探索最佳的卤虫强化持续期。

2 结果与分析

2.1 轮虫强化剂使用量对牙鲆苗种存活及生长的影响 孵化后投喂强化轮虫9 d后，不同强化剂使用量培育下牙鲆苗种存活及生长情况如表1所示。由表1可知，当强化轮虫的裂壶藻强化剂使用量为0.05 g/L时，牙鲆苗种的存活率为73.82%，平均体长为7.95 mm。当强化剂使用量为0.09 g/L时，牙鲆苗种的存活率最高（76.25%），体长也最大（8.16 mm）。

2.2 卤虫无节幼体强化剂使用量对牙鲆苗种存活及生长的影响 孵化投喂0.09 g/L强化轮虫9 d后开始投喂强化卤虫，孵化25 d后不同强化剂使用量下牙鲆苗种的存活及生长情况如表2所示。由表2可知，牙鲆苗种存活率、体长均随着卤虫无节幼体强化剂使用量的升高而增加，当强化剂使用量为0.10 g/L时，牙鲆苗种存活率和体长均达到最大值，存活率达55.33%，体长达12.13 cm。随着强化剂使用量的增加，牙鲆苗种存活率及体长呈现先增加后趋于稳定的变化趋势。

2.3 卤虫无节幼体强化持续期分析

牙鲆苗种入池孵化2 d后逐渐开口摄食，用0.09 g/L的强化轮虫投喂9 d后，投喂0.10 g/L 强化卤虫无节幼体，不同强化培育时间下孵化40 d后苗种的生长情况见表3。

由表3可知，不同卤虫强化持续期牙鲆苗种生长指标表现出一定的差异。卤虫强化剂使用持续20 d 时，存活率为43.51%，变态率为84.82%，平均体长达15.53 mm，无白化发生。由此可见，卤虫强化剂的最佳持续期为20 d。

2.4 适宜条件下牙鲆苗种的生长情况

孵化30 d后牙鲆仔稚鱼饵料驯化完成，前期轮虫强化剂使用量为0.05 g/L，强化9 d后投喂强化剂使用量0.1 g/L的卤虫无节幼体，强化培育20 d，后期驯化用配合饲料正常投喂。

经过75 d的车间培育，牙鲆苗种无白化及其他病害发生，生长良好，平均体长达到5.15 cm，平均体重达到2.05 g/尾，共出池牙鲆苗種90余万尾。孵化2 d时牙鲆体长在1 mm 以下;孵化11 d时，牙鲆体长为7～9 mm;孵化40 d时，牙鲆体长为15～16 mm;孵化75 d时，牙鲆体长为75～80 mm。

3 讨论

3.1 各时期饵料的最适强化剂使用量

牙鲆苗种繁育过程中，破卵孵化后开口饵料为轮虫，随着苗种的生长，鱼体口裂增大，能够摄食卤虫无节幼体时，适时开始冰冻卤虫的孵化和投喂，轮虫、卤虫摄食前的强化对于苗种繁育工作至关重要。该研究表明投喂轮虫期轮虫的强化剂（该试验使用裂壶藻）使用量为0.09 g/L时，牙鲆苗种的存活率和体长均达到最大值，当强化剂使用量达到0.09 g/L后，牙鲆苗种生长指标趋于稳定。当卤虫无节幼体强化剂使用量为0.10 g/L时，牙鲆苗种表现出最佳成活率和体长，后期持续加大使用量对牙鲆苗种生长指标没有明显影响。该试验结果表明，当强化轮虫密度为450个/mL、强化卤虫密度为150个/mL时，轮虫强化剂使用量0.09 g/L，卤虫强化剂使用量0.10 g/L，即可在节约成本的基础上，获得良好的牙鲆苗种生长。

3.2 饵料驯化前强化持续期比较

牙鲆苗种繁育需经过轮虫、卤虫到配合饲料的转化，投喂不同强化持续期的卤虫对于牙鲆苗种驯化、后期生长及白化的出现具有重要影响。该试验在饵料驯化完成前，进行了卤虫营养强化持续期研究，结果表明在卤虫强化14～22 d，牙鲆苗种的存活率、变态率、体长及白化现象均有不同，在持续投喂强化卤虫20 d即饵料驯化，经孵化40 d后牙鲆苗种白化现象得到显著遏制，而在持续投喂卤虫22 d试验组牙鲆苗种各项生长指标没有显著变化。由此可见，卤虫强化持续期达到20 d即可有效防止牙鲆白化，同时能够获得良好的苗种存活率、变态率及体长等生长指标。

49卷10期赵春暖等 饵料强化剂对牙鲆苗种繁育期存活及生长的影响

3.3 牙鲆苗种白化的诱因及裂壶藻粉育苗实效

该试验采用裂壶藻粉作为强化轮虫、卤虫的营养强化剂，其营养全面且对水质无污染，能够较好地保持育苗池干净的水环境。该试验在不同育苗条件下牙鲆出现一部分白化，究其原因，应该是前期卤虫强化持续期对牙鲆后期生长产生了一定的影响，轮虫、卤虫强化剂使用量也可能导致后期牙鲆白化现象的发生，而苗种繁育过程中温度、光照、盐度等可能对牙鲆白化苗种的发生也具有一定的影响。在整个牙鲆苗种繁育过程中，裂壶藻粉作为轮虫、卤虫营养强化剂，表现出良好的实用价值，对于苗种的存活、生长等各项生理指标都表现出较好的促进作用。裂壶藻粉是一种牙鲆苗种繁育的优良营养强化剂，具有十分突出的实用性，效果显著。

参考文献

[1]

LEVINE D M，SULKIN S D.Nutritional significance of long-chain polyunsaturated fatty acids to the zoeal development of the brachyuran crab，Eurypanopeus depressus（Smith） [J].J Exp Mar Biol Ecol，1984，81（3）：211-223.

[2] 邱小琮，周洪琪，曾庆华，等.营养强化的轮虫、卤虫对牙鲆仔鱼的成活、生长及体脂肪酸组成的影响[J].水产科学，2004，23（2）：4-8.

[3] RODRIGUEZ C，PEREZ J A，LORENZO A，et al.n-3 HUFA requriement of larval gilthead seabream Sparus aurata when using high levels of eicosapentaenoic acid [J].Comp Biochem Physiol Part A：Physiol，1994，107（4）：693-698.

[4] 刘镜恪，雷霁霖，宫怀孔.海水仔稚鱼对脂类的需求[J].齐鲁渔业，1996，13（1）：19-21.

[5] 查睿，尹辉，刘涛.DHA及其衍生物对肠道炎症作用的研究进展[J].食品工业科技，2020，41（24）：314-320.

[6] 邱楚雯，王韩信.轮虫、卤虫营养强化研究进展[J].水产科技情报，2019，46（6）：354-358.

[7] 郑智莺，苏跃中，游岚，等.轮虫的营养强化对大黄鱼生长及成活率影响的试验[J].台湾海峡，1996，15（S1）：6-10.

[8] 赵明日，孙世春，麦康森，等.7株海洋微藻强化褶皱臂尾轮虫效果的研究[J].青岛海洋大学学报（自然科学版），2002，32（1）：32-38.

[9]SARGENT J R，MCEVOY L A，BELL J G.Requirements，presentation and sources of polyunsaturated fatty acids in marine fish larval feeds [J].Aquaculture，1997，155（1/2/3/4）：117-127.

[10]

SARGENT J，MCEVOY L，ESTEVEZ A，et al.Lipid nutrition of marine fish during early development：Current status and future directions[J].Aquaculture，1999，179（1/2/3/4）：217-229.

[11] 马长兴，王际英，李宝山，等.n-3/n-6 HUFA对许氏平鲉幼鱼生长、体组成及组织脂肪酸组成的影响[J].水产学报，2019，43（10）：2138-2153.

[12]

BELL M V，BATTY R S，DICK J R，et al.Dietary deficiency of docosahexaenoic acid impairs cision at low light intensities in juvenile herring （Clupea harengus L.）[J].Lipids，1995，30（5）：443-449.

[13] 譚青，王际英，李宝山，等.n-3/n-6 HUFA对大菱鲆幼鱼生长性能、全鱼脂肪酸组成和血清生化指标的影响[J].水产学报，2018，42（5）：754-765.

[14] BESSONART M，IZQUIERDO M S，SALHI M，et al.Effect of dietary arachidonic acid levels on growth and survival of gilthead sea bream（Sparus aurataL.） larvae[J].Aquaculture，1999，179（1/2/3/4）：265-275.

[15] ESTEVEZ A，ISHIKAWA M，KANAZAWA A. Effects of arachidonic acid on pigmentation and fatty acid composition of Japanese fiounder，Paralichthys olivaceus （Temminck and Schiegei）[J].Aquacult Res，1997，28：279-289.

[16] 谭青.n-3/n-6HUFA对大菱鲆幼鱼生长、体组成、脂肪酸成分及免疫的影响[D].上海：上海海洋大学，2017.

[17] IZQUIERDO M S，SOCORRO J，ARANTZAMENDI L，et al.Recent advances in lipid nutrition in fish larvae[J].Fish Physiol Biochem，2000，22（2）：97-107.

[18] 马长兴，王际英，李宝山，等.n-3/n-6 HUFA对许氏平鲉幼鱼生长、体组成及组织脂肪酸组成的影响[J].水产学报，2019，43（10）：2138-2153.

[19] 陈家鑫.裂壶藻及其制品在水产苗种培育中的应用[J].科学养鱼，2002（6）：53.

[20] 纪志有，彭晓芳，马金余.富含DHA微藻作为新型饲料添加剂在水产养殖业的应用[J].饲料广角，2010（19）：36-38.

[21] 乔洪金，宋志东，马晶晶，等.饲料中添加微藻替代鱼油对牙鲆（Paralichthys olivaceus）幼鱼生长、体成分及脂肪酸组成的影响[C]//中国水产学会动物营养与饲料专业委员会.第九届世界华人鱼虾营养学术研讨会论文摘要集.厦门：集美大学水产学院，2013：234.