广东省肇庆地区冠心病患者CYP2C19基因多态性差异性分布

张小乐，蔡肇栩，谢丽妍，梁龙清

(肇庆市第一人民医院，a.CCU；b.药学部；c.特需诊疗中心，广东 肇庆 526000)

冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)是由冠状动脉粥样硬化造成的血管腔狭窄或堵塞引起冠状动脉循环受阻，造成心肌缺血缺氧甚至坏死的一种心脏疾病[1]。近年来随着人们生活方式的改变，CHD在我国的发病率正逐年上升，已严重危害着人类的生命健康。经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention, PCI)已成为CHD患者重要的治疗手段。PCI术后进行抗血小板治疗能够有效降低患者再梗风险及病死率。尽管新的P2Y12抑制剂(如替格瑞洛等)比氯吡格雷更有效[2]，然而氯吡格雷具有出血风险小、成本效益相对较高的优点，因此氯吡格雷大多数情况下仍被作为首选治疗药物[3-4]。然而，在使用氯吡格雷进行治疗的同时，部分患者被发现对该药物的抗血小板疗效呈现低应答或无应答现象，出现氯吡格雷抵抗。氯吡格雷抵抗现象与细胞色素CYP2C19基因的多态性相关，CYP2C19等位基因功能缺失患者与正常基因型的患者相比，再发心血管不良事件风险增加[5-6]。据文献报告，CYP2C19基因多态性的地域分布不尽相同，存在显著差异[7]。然而，本地区CHD患者的CYP2C19基因多态性分布鲜有研究。因此，本研究拟探索广东省肇庆地区CHD患者的CYP2C19*2、*3和*17的基因多态性分布情况，为临床合理应用氯吡格雷进行抗血小板治疗提供参考依据。

1 资料与方法

1.1病例选择 2019年6月-2020年11月我院病案系统诊断为CHD患者共501例，男359例，女142例，年龄34～94岁，平均(67.27±12.12)岁。入选标准：所有患者均为CHD住院患者，常住肇庆地区，并接受CYP2C19*2、*3和*17基因多态性检测，在病史询问中都否认家族遗传病史，并且血缘上无相互联系。排除标准：患有重要器官疾病者，如严重心肝、肾病变，各种血液系统疾病；有明确消化系统疾病，如活动性消化性溃疡等。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2方法 采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管采集患者外周静脉血2 ml，混匀后取200 μl血加入1 ml稀释后的NH4Cl溶液裂解红细胞，静置5 min，将其置于高速离心机(H1650，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)在3 000 r/min下离心5 min，离心完成后弃上清，然后加入耀金保核酸纯化试剂(北京华夏时代基因科技发展有限公司)与下层白细胞混匀，静置至少20 min加入相应的耀金分测序反应通用试剂(北京华夏时代基因科技发展有限公司)，按指定标号位置放进微量荧光检测仪(Fluotec 48E，西安天隆科技有限公司)并在电脑系统软件记录保存，最后采用荧光染色原位杂交法对患者DNA样本进行CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17基因多态性检测，并统计基因型、代谢表型、等位基因以及突变位点数。

2 结 果

2.1Hardy-Weinberg平衡检验 本次研究针对501例广东省肇庆地区CHD患者的CYP2C19*2、*3、*17基因多态性进行了检测与分析，检测CYP2C19基因多态性结果符合Hardy-Weiberg平衡定律(P>0.05)，表明研究对象来自同一群体，群体基因遗传平衡，代表性较好。

2.2CYP2C19基因型、等位基因及代谢型频率分布情况 本研究收集501例检测样本，CYP2C19基因型分布分别为*1*17、*1*1、*1*2、*1*3、*2*2、*2*3，分别占患者总数的0.80%、44.11%、36.13%、6.39%、8.98%、3.59%，见表1。CYP2C19的代谢表型分布分别是超快代谢型(UM)(*1*17)为0.80%，快代谢型(EM)(*1*1)为44.11%，中间代谢型(IM)(*1*2、*1*3)为42.51%，慢代谢型(PM)(*2*2、*2*3)为12.58%，见表2。CYP2C19*1、*2、*3和*17等位基因频率分别为65.77%、28.84%、4.99%、0.40%，见表3。

2.3不同性别CHD患者CYP2C19基因型、等位基因及代谢型频率分布 本研究将CHD患者分为男、女两个组，男、女患者CYP2C19基因型分布差异无统计学意义(χ2=2.063，P=0.840)，等位基因分布差异无统计学意义(χ2=0.999，P=0.801)，代谢型分布差异也无统计学意义(χ2=1.516，P=0.678)。见表1～3。

表1 肇庆地区CHD不同性别患者CYP2C19基因型分布[例(%)]

表2 肇庆地区CHD不同性别患者CYP2C19代谢表型分布[例(%)]

表3 肇庆地区CHD不同性别患者CYP2C19等位基因分布[例%)]

2.4肇庆地区CHD患者CYP2C19等位基因和代谢表型与广东省其他地区人群的比较 本次研究将肇庆地区CHD患者与广州、佛山、东莞、梅州客家、粤北地区CHD患者的CYP2C19等位基因和代谢表型进行比较。肇庆地区CHD患者与广东省上述地区CHD患者CYP2C19等位基因和代谢表型分布差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 广东省不同地区CHD患者CYP2C19等位基因和代谢表型比较[例(%)]

3 讨 论

氯吡格雷作为第二代噻吩吡啶类抗血小板聚集药物，是能有效预防CHD患者介入治疗术后血栓形成的经典药物之一。氯吡格雷作为前药，需在体内经过肝药酶P450(CYP)代谢后形成活性产物，与表面的二磷酸腺苷(ADP)受体不可逆地进行结合，进而发挥抗血小板聚集的治疗作用[13]。随着药物基因组学研究的深入，发现氯吡格雷的抗血小板聚集作用与CYP2C19基因多态性密切相关，CYP2C19*1作为正常编码活性的等位基因，而CYP2C19*2和*3为功能缺失型等位基因，可引起酶活性降低，从而减弱氯吡格雷抗血小板的活性，导致心血管不良事件发生率明显提高[14]。CYP2C19*17为功能增强型等位基因，该基因会导致机体对氯吡格雷的反应性增强，降低血小板聚集率，增加出血性事件[15]。因此，我们应该根据CHD患者的CYP2C19基因多态性来调整氯吡格雷的标准维持剂量，从而给予患者个体化的医疗服务。

本研究对广东省肇庆地区501例CHD患者的CYP2C19*2、*3和*17基因多态性采用数字分子杂交技术进行检测并分析，本次研究人群的CYP2C19基因多态性检测结果符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)，表明研究对象来自同一群体，群体基因遗传平衡，代表性较好。研究发现肇庆地区CHD患者CYP2C19*1、*2、*3和*17等位基因频率分别为65.77%、28.84%、4.99%、0.40%和CYP2C19的代谢表型分布分别是UM(*1*17)为0.80%、 EM(*1*1)为44.11%， IM(*1*2、*1*3)为42.51%、PM(*2*2、*2*3)为12.58%。 本次研究结果与先前的一些研究[8-12]结果一致，从而揭示了肇庆地区CHD患者CYP2C19*2、*3、*17等位基因和代谢表型分布与广州、佛山、东莞、梅州客家、粤北地区CHD患者差异无统计学意义(P>0.05)。本研究只选取本地区CHD患者，入组样本量有待提高，不能完全反映肇庆地区人群中CYP2C19基因多态性分布的客观情况，后续还需纳入其他心脑血管患者以及正常体检人群进行研究，从而可以真实客观地分析本地区CYP2C19基因多态性的分布特征。

Sun等[16]研究报道，至少含1个CYP2C19功能缺失等位基因的CHD患者PCI术后应用氯吡格雷进行抗血小板治疗1年后的主要心血管不良事件发生率是正常代谢型基因的2.66倍。同时，有研究指出欧美人群中氯吡格雷相关CYP2C19基因的突变率约为30%，但在亚洲人群中有至少1个CYP2C19功能缺失基因的CHD患者比例超过50%，其中PM约占10%[17]，与本研究结果相近。广东肇庆地区CHD患者CYP2C19的IM与PM所占比例达50%以上，提示患者携带CYP2C19*2和*3的功能缺失型等位基因概率较大，易导致CHD患者使用氯吡格雷进行抗血小板治疗效果降低，从而使患者的心血管不良事件发生率增加。因此，鉴于本地区CHD患者CYP2C19的IM和PM所占比例较高，建议首次使用氯吡格雷的患者在条件允许的情况下进行CYP2C19基因检测，以及时知晓患者的基因型，提高诊疗水平，从而调整抗血小板治疗策略，为患者提供合理的个体化治疗方案，旨在降低CHD患者心血管不良事件的发生率，减少患者住院天数，使患者真正获益。