CK和P63与原位杂交EBER在诊断复发性鼻咽癌中的价值分析

陆妹英，以 敏（通讯作者）

（柳州市工人医院病理科 广西 柳州 545005）

鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤之一，多发于鼻咽黏膜处，据全国鼻咽癌学术会议表明，世界上有80%的鼻咽癌发生在中国，南方地区高于北方地区。患者发病早期比较隐匿，不易被发现，但是较容易出现远处转移或淋巴结节转移情况。临床研究显示，鼻咽癌的发病机制不明确，治疗效果有限，患者5年的生存率为50%左右[1]。临床上对鼻咽癌多应用放射治疗，但是通过放射治疗后依然有20%左右的患者会出现复发情况，而且复发性鼻咽癌的预后性较差，再次放射治疗后患者5年生存率仅为30%左右[2]。为了判断患者是否为复发性鼻咽癌，本文选取我院200例鼻咽癌患者作为研究对象，探讨CK、P63与原位杂交EBER在诊断复发性鼻咽癌中的应用价值，具体报告如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2018年1月—2020年12月200例鼻咽癌患者作为研究对象，其中首发患者123例，复发患者77例。纳入标准：所有患者均经病理诊断确诊为鼻咽癌且相关病例资料完整；复发患者在鼻咽癌复发之前已经确诊为鼻咽癌并经过相关放射治疗；首发患者在病理诊断前未经过相关治疗。所有患者对本研究知情并签署同意书。所有鼻咽癌患者中男性152例，女性48例；年龄为12～89岁，平均年龄（65.31±3.25）岁。

1.2 方法

原位杂交EBER检测：实验设置外部阴性对照、阳性对照及组织内对照，切片组织粘附在APES处理的载玻片上，将切片于65 ℃烘烤1 h之后，脱蜡及水化，进行原位杂交预处理，杂交，依照泰普生物地高辛染色液试剂说明书操作规范操作，用三步法检测组织切片中地高辛标记的核酸靶点，用DAB作为底物显色，在阴、阳性对照成立的基础上，依据杂交信号有无判断结果，阳性结果为组织切片中的细胞核见黄色、棕黄色或棕褐色着色，而细胞质和细胞膜无着色，只有当核分裂时可以出现细胞质着色。

CK、P63免疫组化检测，实验设置外部阴性对照、阳性对照及组织内对照，将组织切片于65 ℃烘烤1 h之后，使用罗氏全自动免疫组化染色机，应用迈新生物技术有限公司提供的试剂盒，严格按照仪器操作规程进行免疫组化染色，结果P63阳性为细胞核呈棕褐色着色，CK阳性为细胞质或上皮细胞胞膜呈棕黄色或黄色着色。

1.3 观察指标

记录并分析首发病例与复发病例患者的性别、年龄、组织学类型、病灶部位等临床资料；应用免疫组化检测和原位杂交检测首发病例与复发病例CK、P63与原位杂交EBER水平，并记录分析。

1.4 统计学方法

本研究数据采取统计学软件SPSS 23.0进行数据分析，计数资料以例数、百分比（n，%）表示，进行χ2检验；计量资料以符合正态分布则用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；采用Logistic回归分析分析CK、P63与原位杂交EBER在复发性鼻咽癌中的诊断价值；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 首发病例与复发病例临床病理资料比较

首发病例与复发病例的性别、年龄、组织学类型和病灶部位比较无统计学差异（P＞0.05），见表1。

表1 首发病例与复发病例临床病理资料对比分析（例）

2.2 首发病例与复发病例CK、P63与原位杂交EBER表达分析

复发病例的CK、P63与原位杂交EBER表达阳性人数高于首发病例，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3 CK、P63与原位杂交EBER在复发性鼻咽癌中的诊断价值

Logistic回归分析结果显示：CK、P63与原位杂交EBER并非复发性鼻咽癌的独立诊断指标（P＞0.05），联合诊断对复发性鼻咽癌具有诊断价值（P＜0.05），见表3。

表3 CK、P63与原位杂交EBER在复发性鼻咽癌中的诊断价值

3.讨论

鼻咽癌病理诊断中常应用原位杂交与免疫组化，其中主要包含CK、P63与原位杂交EBER检测，其中CK属于上皮细胞的标记物，能够勾画出细胞的轮廓，显微镜下可看到呈筛孔状或网状排列，而且大多患者会呈阳性表达情况。而P63为基底细胞标志物，P36主要表达临床上皮源性恶性肿瘤，在腺癌中几乎不表达。而且临床研究显示，在鼻咽癌患者中P63高表达可能是鼻咽癌发生的早期事件[3]。EB病毒（EBV）是γ疱疹病毒科的一员，它的编码小分子RNA-EBER在EB病毒感染细胞核中会出现高拷贝现象。所以，应用原位杂交法能够特异性的进行EBV检测，其主要原理是应用EBER特有的序列设计特异性探针和EBER的靶序列互相结合、互补，达到检测目的。原位杂交EBER检测可以准确定位细胞，明确组织细胞中EB病毒的位置及感染程度，有利于病理诊断及分级。大量研究表明，EB病毒在鼻咽癌患者体内参与了疾病的发生与恶变的过程，几乎所有鼻咽癌患者的癌组织之中都能够检测出EB病毒特异性抗体与DNA[4-5]。由此可见，应用CK、P63与原位杂交EBER对复发性鼻咽癌诊断是具有科学依据的。

本研究结果表明，首发病例与复发病例的性别、年龄、组织学类型和病灶部位对比无明显差异（P＞0.05），由此证明，无论是首发病例还是复发病例患者的性别、年龄、组织学类型和病灶部位都没有明显差异。相关研究显示，首发鼻咽癌患者超过5年之后可能是因为新的肿瘤而导致复发[6]，因此，可能与患者的病理情况无明显关系；首发病例与复发病例的CK、P63与原位杂交EBER表达对比差异显著，复发病例的CK、P63与原位杂交EBER表达阳性人数明显高于首发病例（P＜0.05），由此证明，CK、P63与原位杂交EBER表达与鼻咽癌的复发性可能存在一定关系。相关报道显示，有10.8%的复发性鼻咽癌患者EBER检测为阴性[7]。本研究结果中的阴性患者人数较低，这可能是因为与组织学处理欠佳有关。而且肿瘤成分比较少的时候镜下容易出现漏诊现象，因此在检测过程中要特别注意。相关研究表明，CK作为细胞的靶结构，会参与辐射，从而导致细胞的变化与活动，但是并不能作为鼻咽癌患者复发性的独立判断指标[8]，与本研究结果具有相似性。Logistic回归分析结果显示：CK、P63与原位杂交EBER并非复发性鼻咽癌的独立诊断指标（P＞0.05），联合诊断对复发性鼻咽癌具有诊断价值（P＜0.05）。由此证明，应用CK、P63与原位杂交EBER联合诊断能够判断患者是否为复发性鼻咽癌，从而为患者的临床诊断与治疗提供参考。

综上所述，CK、P63与原位杂交EBER水平与复发性鼻咽癌的发展密切相关，可以结合形态学，免疫组化CK、P63与原位杂交EBER联合判定患者是否为复发性鼻咽癌，但是3种诊断并非为复发性鼻咽癌的独立预测指标。