EM菌饲料对贵州山区杂交鲟鱼生长的影响

曾 圣， 张效平， 王艳艳， 杜 强， 赵 飞

(1.贵州省农业科学院 水产研究所， 贵州 贵阳 550025； 2.贵州省特种水产工程技术中心， 贵州 贵阳 550025)

0 引言

【研究意义】鲟鱼是硬骨鱼纲辐鳍亚纲鲟形目鱼类的总称，鲟形目世界上现存2科7属27种，我国分布有8种[1-2]。鲟鱼是现存起源最早的脊椎动物之一，迄今已有2亿余年的历史，素有“水中活化石”之称。在20世纪80年代以前，鲟鱼的生产主要来源于野外捕捞，随着人类活动的加剧，鲟鱼栖息生境逐渐被占用和破坏，全球鲟鱼产量快速下降。21世纪以来，随着鲟鱼人工繁育技术的不断成熟，鲟鱼人工养殖逐渐替代了野外捕捞，中国成为全球鲟鱼人工养殖最多的国家。在众多鲟鱼品种中，杂交鲟因生长速度快、适应能力强、性成熟周期短等特点，逐渐成为最受养殖户喜爱的鲟鱼养殖品种之一。微生态制剂又称益生菌、微生态调节剂、益菌剂、促生素、生菌素、生菌剂、益生剂、益生素等，是根据微生态学原理利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经培养、纯化、繁殖后制成的含有大量有益活菌的制剂。因此，研究微生态制剂对杂交鲟生长和免疫的影响，对生产中提高鲟鱼养殖产量和品质以及鲟鱼养殖的可持续发展具有重要的现实意义。【前人研究进展】微生态制剂最初主要应用于陆生动物养殖，因其能改善肠道内部微环境、促进免疫功能等，而逐渐应用到水产养殖中。微生态制剂在水产养殖中可以提高养殖动物的营养水平促进生长、提高免疫力增强抗病害能力、改善水产养殖环境保持水体生态平衡等[3-4]。微生态制剂种类繁多，在水产养殖中应用的有芽孢杆菌、乳酸菌、光合细菌、EM菌和酵母菌等[5]。EM菌是由光合菌、乳酸菌，酵母菌和放线菌等5科 10属 80余种微生物复合培养而成的有效微生物群，具有组成复杂、结构稳定、功能广泛的特点[6],已被广泛应用于农业、畜牧业、环保等领域，对土壤恶化、连作障碍、作物的抗病抗逆能力、产量和品质以及禽畜的生长和抵抗疾病等有积极的促进作用[7]。【研究切入点】贵州鲟鱼养殖发展迅速，养殖产量已位居全国第二，现有养殖技术已相对成熟。目前未见EM菌在鲟鱼养殖中应用研究的报道。【拟解决的关键问题】在流水状态下对鲟鱼投喂混有EM菌的配合饲料，研究微生态制剂对贵州山区杂交鲟生长的影响，为提高鲟鱼养殖产量和品质提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

供试杂交鲟鱼400尾，体重13.30～15.28 g，由贵州惠众渔业有限公司提供；EM菌液购自江西天意生物技术开发有限公司，测试试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.2 试验设计

试验共设4个处理，处理1～3的EM菌液浓度分别为3%(T1)、6%(T2)和9%(T3)，处理4为空白对照(CK)。用蒸馏水配制的不同浓度EM菌液分别与鲟鱼配合饲料按1∶5(V/M)比例充分混合搅拌，于阴凉处风干后投喂鲟鱼，每天8:00—9:00和18：00—19：00各投喂1次，投饵量为鲟鱼体重的2%～3%，共投喂55 d。杂交鲟鱼饲养在直径2 m、水深50～60 cm的微流水圆形玻璃钢鱼池中，流量约0.000 5 m3/s。

1.3 测量指标

试验开始和结束后分别测量鲟鱼的体重、体长及全长。投喂试验结束后计数活鱼数量。从各组中随机捞取10尾试验鱼(共40尾)，断尾采血，于室温静置1 h，然后在4℃冰箱中保持4 h，4℃下4 000 r/min离心10 min，收集上层血清用于免疫机能测定。取出40尾鱼的肝脏及肠道组织，用生理盐水冲洗干净并用滤纸吸干，称重，各组织用预冷的生理盐水制备成1∶9的匀浆液，用于消化酶活性测定，匀浆过程在冰浴中进行。

1.3.1 生长指标 生长指标由相对增重率、特定生长率、平均日增重和存活率4个指标组成。

相对增重率=(终末体重-初始体重)/初始体重×100%

特定生长率=(ln终末体重-ln初始体重)/试验时间×100%

平均日增重=(终末体重-初始体重)/试验时间

存活率=终末尾数/初始尾数×100%

1.3.2 消化酶活性 胃蛋白酶：1 mg组织蛋白在37℃下1 min分解蛋白生成1 μg氨基酸相当于1个酶活力单位(U)。胰蛋白酶：在pH 8.0、37℃条件下，1 mg蛋白中含有的胰蛋白酶1 min使吸光度变化0.003为1个酶活力单位(U)。淀粉酶：组织中1 mg蛋白在37℃与底物作用30 min，水解10 mg淀粉定义为1个淀粉酶活力单位(U)。脂肪酶：在37℃条件下，1 g组织蛋白在反应体系中与底物反应1 min，每消耗1 μmol底物为1个酶活力单位(U)。

1.3.3 免疫机能 血清中超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)和过氧化物酶(POD)采用南京建成生物有限公司的试剂盒测定。溶菌酶(LSZ)∶530 nm波长下1 min可以使吸光率下降0.001的溶菌酶的量为1个酶活性单位(U)。超氧化物歧化酶(SOD)：1 mL反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为1个SOD活力单位(U)。过氧化物酶(POD)：在37℃条件下，1 mL血清(浆)1 min催化1 μg底物的酶量定义为1个酶活性单位(U)。

2 结果与分析

2.1 微生态制剂不同浓度下杂交鲟的生长情况

从表1看出，投喂微生态制剂55 d后，杂交鲟平均体重、相对增重率、特定生长率、平均日增重、平均体长、平均全长、存活率等生长指标对照均低于T1、T2和T3；T2除存活率外，各项指标均高于T1和T3；存活率各处理间相差不大。

表1 投喂微生态制剂杂交鲟的生长指标

2.2 微生态制剂不同浓度下杂交鲟的消化酶活性

从表2看出，投喂微生态制剂55 d后，胰蛋白酶活性T2最高，其次是T3，对照最低；胃蛋白酶活性T2最高，其次是T3，对照最低；淀粉酶活性T3最高，T2其次，对照最低；脂肪酶活性T1最高，T2次之，对照最低。

表2 投喂微生态制剂杂交鲟的消化酶活性

2.3 微生态制剂不同浓度下杂交鲟的免疫酶活性

从表3看出，投喂微生态制剂后T1～T3杂交鲟免疫相关酶活性均高于对照。超氧化物歧化酶活性T2最高，T2次之，对照最低；溶菌酶活性T2最高，T1次之，对照最低；过氧化物酶活性T3最高，T2次之，对照最低。

表3 投喂微生态制剂杂交鲟的免疫相关酶活性

3 讨论

微生态制剂中含有多种有益微生物，不仅可以改善水质，还可以提供蛋白质、维生素、类胡萝卜素等，促进水产动物的生长。袁成玉等[8]对幼刺参研究表明，饲料中添加芽孢杆菌、光合细菌等可以加快幼参生长，并能减少死亡，提高幼参的成活率。丁丽等[9]研究发现，酵母菌、乳酸菌和芽孢杆菌对异育银鲫的生长具有一定的促进作用，其中酵母菌是影响异育银鲫生长的主要因素。饲料中添加芽孢杆菌对西伯利亚鲟幼鱼有一定的促生长作用，并可提高饵料系数以及营养物质的消化率[10]。罗辉等[11-12]发现，饲料中添加微生态制剂有提高鲤鱼生产性能的趋势，其中以芽孢杆菌对鲤鱼的质量增加和饵料利用率的促进作用最强。EM菌在促进大口鲇和鲫鱼生长和改善增重效果方面能起到积极作用[13]。本研究表明，在流水状态下，投喂含有微生态制剂的饲料55 d后，杂交鲟相对增重率、特定生长率、平均日增重、成活率等生长指标均高于不含微生态制剂的饲料。相较于鲤鱼、大口鲇和异育银鲫等，本研究微生态制剂对杂交鲟生长指标的提升相对较小，原因可能是在流水状态下养殖水体水交换率较高，部分微生态制剂随水流排出，留在养殖水体的微生态制剂相对较少造成。因此，在流水养殖条件下，如何提高鱼类对微生态制剂的摄入效率是今后的研究方向之一。

王荻等[14]选用以枯草芽孢杆菌为主要成分的微生态制剂进行池塘养殖投喂、泼洒和混合使用试验发现，投喂微生态制剂可以促进草鱼消化酶活性，对草鱼快速健康生长有较好作用。袁成玉等[8]发现，在投喂微生态制剂后，试验组刺参肠道中淀粉酶、蛋白酶活性提升较明显，纤维素酶活性提升较小。高欣等[10]发现，芽孢杆菌能够显著提高西伯利亚鲟幼鱼蛋白质、脂肪、碳水化合物、粗灰分以及能量等的消化率。刘龙镇等[15]研究结果表明，饲料中合理添加复合菌制剂、复合菌酶制剂及复合菌培养物能提高对虾血清的非特异性免疫酶活性，增强对虾对副溶血弧菌的抗病力。本研究结果与多数水产动物的研究结果相似，杂交鲟鱼胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶以及脂肪酶活性在投喂含有EM菌饲料后均有显著提升，表明微生态制剂对杂交鲟营养物质的吸收起积极作用，这也直接反映在各项生长指标中。

溶菌酶是一种能水解细菌中黏多糖的碱性酶，在鱼类中主要存在于黏液、淋巴组织、血清、头肾等，是鱼类非特异性免疫中一种重要的酶[16]。超氧化物歧化酶是广泛存在于动物、植物和微生物中的金属酶，对于增强吞噬细胞防御能力和整个机体的免疫功能具有重要作用。刘晓勇等[17]研究表明，饲料中添加枯草芽孢杆菌能显著提高杂交鲟幼鱼的SOD活性。过氧化物酶广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。本研究结果表明，杂交鲟鱼投喂含有EM菌饲料后，免疫相关的LSZ、SOD、POD活性均显著提高，表明EM菌能有效提高杂交鲟的免疫机能。

4 结论

投喂含有微生态制剂的饲料后，杂交鲟生长指标、消化酶活性、免疫机能均显著提高，以在鲟鱼配合饲料中添加6%EM菌液的处理效果最为明显。可见，投喂含有微生态制剂的饲料是提升鲟鱼养殖效率的一种有效方式。