弥漫大B细胞性淋巴瘤患者Ki-67、β2-MG、CRP、ESR的水平变化及意义

张 青 李承彬 邓明凤

弥漫大B细胞性淋巴瘤(Diffuse Large B-cell Lymphoma,DLBCL)是最常见的侵袭性非霍奇金淋巴瘤亚型，目前约占全球非霍奇金淋巴瘤的25%-45%[1]。研究[2]表明，细胞增殖核抗原Ki-67(Nuclcar-associated Antigen Ki-67)在套细胞淋巴瘤中呈阳性表达，且表达水平高低与恶性程度密切相关，套细胞淋巴瘤的恶性程度越高，Ki-67表达水平越高。另外研究发现在DLBCL患者中，乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase，LDH)、β2微球蛋白(β2-Microglobulin，β2-MG)、C-反应蛋白(C-reactive Protein，CRP)、红细胞沉降率(Erythrocyte Sedimentation Rate,ESR)等血清学指标升高[3-5]。其中LDH被证实与DLBCL诊断与预后相关，已纳入非霍奇金淋巴瘤国际预后指数评分(IPI)[6]。因此，本研究对121例DLBCL患者的 Ki-67、β2-MG、CRP、ESR表达水平进行分析，以期找出其与临床特征的关系及在DLBCL中的诊断价值，为DLBCL的临床诊断、分期评估提供辅助依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

回顾性选择2018-1-2020-12荆州市中心医院收治的DLBCL患者121例。男性72例，女性49例，年龄24-87岁，平均59.24±13.02岁。纳入标准：(1)经过肿块活检或细胞学检查确诊，并依据2014年Lugano标准[7]进行诊断与分期；(2)术前未进行放化疗及免疫疗法治疗。排除标准：(1)合并其它恶性肿瘤；(2)有严重心肝肾等器官疾病。

1.2 检测指标与方法

1.2.1淋巴组织Ki-67检测：术中切除肿块常规石蜡包埋，石蜡块以4μm连续切片进行免疫组织化学染色，Ki-67指数为细胞核任何强度染色的肿瘤细胞数占所有肿瘤细胞数的百分比，阴性参考范围为<10%。试剂盒为Ki67兔抗人单克隆抗体、免疫组织化学试剂盒SP-9000。

1.2.2血液学指标检测:术前空腹采集静脉血6ml, 分别装入3个不同的试管。β2-MG检测采用免疫比浊法, 在BECKMAN COULTER AU5800生化分析仪上测定，试剂盒购于北京利德曼生化股份有限公司，正常值范围为1.0-2.3mg/L。CRP检测采用免疫比浊法, 用BECKMAN COULTER IMMAGE800免疫分析仪测定，试剂盒为BECKMAN COULTER 配套试剂盒,正常值范围为0-10mg/L。ESR检测采用魏氏血沉法, 用赛科希德SD-100型动态血沉/压积测试仪测定，正常值范围为<20mm/h。

1.2.3临床特征评估：(1)B症状：包括发热、盗汗及体重减轻；(2)美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG)评分：分值范围0-5分，0分为活动完全正常，5分为死亡，分值越高表示患者身体健康状况越差；(3)IPI评分：包括年龄、分期、ECOG评分、结外病变、LDH水平5项内容，每个特点1分：年龄>60岁、分期为Ⅲ-Ⅳ期、ECOG评分≥2分、≥2个结外病变、LDH水平高于正常。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 不同临床特征DLBCL患者Ki-67、β2-MG、CRP、ESR水平比较

年龄≥60岁患者的β2-MG、ESR水平明显高于年龄<60岁患者；伴有B症状患者的β2-MG、CRP水平高于不伴B症状患者；Ⅲ-Ⅳ期患者的Ki-67、β2-MG水平高于Ⅰ-Ⅱ期患者；IPI评分3-5分患者的β2-MG水平高于IPI评分0-2分患者；且差异有统计学意义(P<0.05)。具体结果见表1。

2.2 Ki-67、β2-MG、CRP、ESR表达水平与年龄、B症状、分期及IPI评分相关性分析

对表1中有统计学意义的临床特征单独赋值，采用Spearman检验分析变量间的相关性。结果显示Ki-67表达水平与患者临床分期相关(P<0.01)，β2-MG水平与患者年龄、B症状、IPI评分相关(P<0.01)，CRP水平与患者B症状、分期相关(P<0.05或P<0.01)，且β2-MG、CRP、ESR三者之间互有相关性，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，具体结果见表2。

表1 DLBCL患者不同临床特征与Ki-67、β2-MG、CRP、ESR水平比较

表2 Ki-67、β2-MG、CRP、ESR表达水平与年龄、B症状、分期及IPI评分相关性分析

2.3 Ki-67、β2-MG、CRP对于高危DLBCL的诊断价值

将患者按照临床分期分为低危组( Ⅰ-Ⅱ期)和高危组(Ⅲ-Ⅳ期)，Ki-67、β2-MG、CRP对高危DLBCL诊断的AUC分别是0.808、0.839、0.654；三者联用时AUC为0.909，即Ki-67、β2-MG、CRP联合检测能提高高危DLBCL患者的诊断价值，具体结果见表3及图1。

表3 Ki-67、β2-MG、CRP水平对高危DLBCL的诊断效能

图1 各指标对危重DLBCL诊断的ROC曲线

3 讨 论

DLBCL是发病率最高的非霍奇金淋巴瘤亚型，与其它亚型相比，它具有独特的分子遗传和临床特征。迄今为止，几乎所有的淋巴瘤患者均需要接受包括免疫组织化学染色在内的病理检查后方能确诊，少数病理诊断和鉴别还需要其他检测手段加以辅助。在活体组织病理学检查中，免疫组化法检测Ki-67抗原应用最为广泛。Ki-67抗原是细胞核增殖相关抗原，其合成起始于细胞增殖起始时期，除G0期外，其它细胞周期阶段均表达Ki-67[8]。通过检测Ki-67的表达水平可以评估肿瘤细胞的增殖状态。在乳腺癌[9]、卵巢癌[10]中，Ki-67表达已作为一种独立的预后预测标志物。Hans的meta分析[8]比较了非霍奇金淋巴瘤患者PET、MRI、组织病理检查三种方式预测预后的优劣性，结果显示PET的SUVmax值与免疫组化的Ki-67指数有相似的预测能力，且优于MRI的ADC 值。

基于目前检测手段，Ki-67检测数值可能因为活检部位的选择或其他人为因素而产生偏差，影响最终结果。Lu等[11]评估了非霍奇金淋巴瘤患者血清学因素、放射学和病理指标之间的关系，以及它们对非霍奇金淋巴瘤患者长期进展的预测价值。结果显示：相对于SUVmax和Ki-67而言，血清学因素的预测价值更高。他认为评估总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)应首选血清乳酸脱氢酶(LDH)、β2-MG、CRP这些血清学指标，而CRP、β2-MG和IL-6可用于预测完全缓解(CR)。龚予希等[5]研究复发性DLBCL临床病理特征时发现，复发DLBCL患者治疗前β2-MG、CRP水平显著增高，与肿瘤负荷正相关，他还提出β2-MG、CRP与LDH联合检测可做为早期筛选复发性DLBCL患者的实验室指标。Wu等[4]长期监测DLBCL患者ESR表达水平后，首次提出治疗前ESR升高与高危险度临床特征、不良预后密切相关。上述研究提示，β2-MG及炎症因子CRP、ESR可能在DLBCL的发生发展和预后中发挥重要作用。

β2-MG是的一种低分子量蛋白(11.8 kD)，所有表达MHCⅠ类抗原的细胞均可产生，以淋巴细胞和单核细胞为主。经肾小球滤过后，几乎99.9%的β2-MG被近端小管细胞重吸收[12]。正常生理状态下，人体内β2-MG维持着动态平衡，其水平相对恒定。发生恶性淋巴瘤时，淋巴细胞增殖加快引起β2-MG合成增多、表达增加[13]。黄然欣等[14]比较了不同分期非霍奇金淋巴瘤患者的β2-MG水平，提出β2-MG是非霍奇金淋巴瘤的肿瘤负荷指标之一，对非霍奇金淋巴瘤分期、疗效观察及预后均有一定影响。

炎症反应对癌症的影响已被证实：在肿瘤形成早期，炎性细胞释放生长和生存因子，促进血管和淋巴管生成，产生促肿瘤作用[15]。其中应用最广泛的炎症标志物为CRP和ESR。目前只有少数关于DLBCL与CRP、ESR的研究被报道，一项研究[16]认为治疗前CRP水平与DLBCL患者预后相关，但CRP与危险度分层的关系仍需进一步验证。Qin等[17]对3000名DLBCL患者生存结果及治疗前CRP水平进行meta分析，结果表明治疗前CRP水平可能是DLBCL患者的潜在预后指标，CRP水平越高，PFS、OS越差。关于ESR的一项最新的临床研究[18]也认为，高CRP、高ESR水平是导致DLBCL难治复发的独立预后因素。血清学指标检测结果获取方便、对患者损伤小，因此，将病理学指标与血清学指标联合使用，可能成为提高非霍奇金淋巴瘤诊断效率的新方式。

在本研究中，β2-MG表达受年龄、B症状、分期及IPI评分因素的影响，Ki-67水平与分期相关，CRP、ESR表达分别与B症状、年龄相关，这与之前的研究结果类似[17]。另外，本研究创新性的探讨了Ki-67、β2-MG、CRP、ESR之间的相关性，结果发现β2-MG、CRP、ESR三者互有相关性，而且Ki-67、β2-MG、CRP联合使用的诊断效率明显增高。本研究的局限之处在于收集的样本数量有限，随访时间短，得出的结论存在偏倚可能，对Ki-67、β2-MG、CRP、ESR四者与DLBCL预后的关系仍需多中心、长时间的动态监测后进一步评价。

综上所述，本研究发现DLBCL患者Ki-67、β2-MG、CRP、ESR水平与患者的年龄、B症状、分期、IPI评分有一定程度的相关性。在探讨Ki-67、β2-MG、CRP水平对高危DLBCL诊断能力时，创新性发现三者联合使用有助于提高高危DLBCL患者诊断价值，为高危DLBCL患者的及时诊断提供新策略。

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