老年急性ST段抬高型心肌梗死患者血浆miR-499-5p表达水平对并发急性心力衰竭的预测价值

李 娟，张芬红，徐卓婧，张 涛

（西安市第五医院a.心血管二病区；b.呼吸内科,西安 710082）

急性心力衰竭（acute heart failure，AHF）是心肌梗死患者最常见的院内并发症之一，尤其在老年患者中发生风险更高，严重影响患者预后[1-2]。近年来，越来越多研究证据表明存在多种微小RNA（micro RNA，miRNA）可能参与冠心病、心力衰竭、心律失常等心脏疾病的发生发展过程[3-4]。MiR-499 即是其中代表之一，研究报道miR-499 与NKx2.5,GATA4 和MEF2C 等多种心肌细胞特征性基因密切相关，可通过多条途径参与调控心肌细胞的病理生理功能[5]。多项临床研究结果显示血浆miR-499 水平对急性心肌梗死具有较高的诊断价值和判断预后价值，且不易受年龄、性别、肾功能等临床指标影响，可与心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）等指标相互补充，提高诊断准确性[6-7]。然而，目前鲜有报道miR-499 与心力衰竭的相关性，心肌梗死并发AHF 患者外周血miR-499水平的相关研究更为罕见。因此，本研究拟分析老年急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者血浆miR-499-5p 对并发AHF 的预测价值，为临床提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 连续性选择2019年1月～12月西安市第五医院心血管二病区住院治疗的年龄≥60岁的135 例急性STEMI 患者纳入病例组，其中男性74 例，女性61 例，年龄60～83 岁，平均年龄68.02±5.53 岁。另随机于同期在我院行健康体检人员中选择50 例老年志愿者作为对照组，其中男性25 例，女性25 例，年龄60～77 岁，平均年龄66.34±4.88 岁。两组研究对象年龄、性别差异均无统计学意义（t=1.895，χ2=0.340，均P＞0.05）。急性STEMI 诊断符合2015年版《中国急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南》[8]，且发病到入院时间＜12 h。排除标准：①并发陈旧性心肌梗死；②既往并发慢性心力衰竭；③并发心肌病、心脏瓣膜病等其他心脏疾病；④并发恶性肿瘤、严重肝肾功能障碍、严重感染。参照2014年版《中国心力衰竭诊断和治疗指南2014》[9]，结合急性STEMI患者入院后48h 内的临床表现、体格检查和相关辅助检查等结果，评估患者是否并发AHF，并以此标准进行分组。

1.2 仪器与试剂 miRNeasy Serum/Plasma 试剂盒（QIAGEN 公司），HG TaqMan miRNA 反转录试剂盒（新海基因检测有限公司），Biosystems7500实时PCR 系统（Thermo Fisher 公司）。

1.3 方法

1.3.1 血浆miR-499-5p 相对表达水平检测：STEMI患者于入院时采集外周静脉血样本，对照组成员则于体检日清晨采集空腹静脉血样本。按照说明书操作步骤提取总RNA，采用反转录试剂盒，以实时荧光定量PCR 法检测血浆miR-499-5p表达水平。以U6 为内参基因，miR-499-5p 引物为上游：5’-CG TGTCGACCAAGTCTGGGGTGAAAGAGAAG-3’；下游：5’-TGTGTCGACGGTCATGAGCTTGTTGAGG TTC-3’。病例组及两亚组均以对照组为对照，采用2-△△Ct方法计算miR-499-5p 相对表达水平。

1.3.2 一般临床资料收集：包括年龄、性别、体质指数（body mass index，BMI）、吸烟史、饮酒史、高血压病史、糖尿病病史、血脂异常病史、再灌注治疗情况、入院时收缩压及舒张压等。对于病例组患者还需记录Killip 分级评估情况，并采集患者cTnI，肌酸激酶-MB 同工酶（creatine kinase-MB，CK-MB）和脑钠肽（B-type natriuretic peptide，BNP）的动态监测结果，本研究均取入院24 h 内的峰值作为结果进行统计。

1.4 统计学分析 本研究采用SPSS19.0 统计软件分析处理，对于同时符合正态分布和方差齐性检验的计量资料，其结果以均数±标准差（x±s）表示，两组间均数比较采用t检验；对于不符合正态分布和（或）方差齐性检验的计量资料，其结果采用四分位数法表示，两组间比较采用Mann-Whithey 检验。计数资料结果以构成百分比表示，组间比较采用χ2检验。相关性分析采用Pearson 相关分析法或Spearman 相关分析法。多因素分析采用二分类Logisitic 回归分析法。绘制ROC 曲线评价miRR-499-5p 和BNP 对AHF 的预测价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组一般临床特征比较 见表1，病例组与对照组在BMI，吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、收缩压、舒张压等方面差异均无统计学意义（均P＞0.05）。病例组患者血脂异常比例及cTnI，CK-MB，BNP血清水平均显著高于对照组，差异均具有统计学意义（均P＜0.05）。AHF 亚组与非AHF 亚组在BMI，吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、血脂异常、再灌注治疗、收缩压、舒张压等方面差异均无统计学意义（均P＞0.05）。AHF 亚组患者cTnI，CKMB，BNP 血清水平均显著高于非AHF 亚组，差异均具有统计学意义（均P＜0.05）。

2.2 各组血浆miR-499-5p 相对表达水平比较 见表1。病例组血浆miR-499-5p 相对表达水平显著高于对照组，AHF 亚组显著高于非AHF 亚组，差异均具有统计学意义（Z=10.434，5.817，均P＜0.001）。

2.3 病例组血浆miR-499-5p 相对表达水平与cTnI，CK-MB 及BNP 的相关性分析 Pearson 相关性分析结果显示病例组患者血浆miR-499-5p 相对表达水平与cTnI，CK-MB 及BNP 均呈正相关关系（r=0.339，0.243，0.477，均P＜0.01）。

2.4 病例组血浆miR-499-5p 相对表达水平与Killip分级的相关性分析 Spearman 相关性分析结果显示病例组患者血浆miR-499-5p 相对表达水平与Killip分级呈正相关关系（r=0.581，P＜0.001）。

2.5 老年急性STEMI 患者并发AHF 的危险因素分析 见表2。以是否并发AHF 为因变量，以表1 中单因素分析P＜0.05 的参数为自变量，包括年龄、cTnI，CK-MB，BNP 和miR-499-5p 等，采用二分类Logistic 回归分析法，结果显示老年急性STEMI患者血浆miR-499-5p表达水平增高是并发AHF 的独立危险因素（OR=3.192,95%CI 1.308～7.791，P=0.011）。

表1 各组一般临床特征比较

表2 二分类Logistic 回归分析结果

2.6 miR-499-5p 和BNP 对老年急性STEMI 患者并发AHF 的预测价值分析 见图1。绘制血浆miR-499-5p，BNP 及两者的联合因子预测AHF 的ROC 曲线，曲线下面积（area under curve，AUC）分别为0.797（0.725，0.869），0.864（0.805，0.922）和0.895（0.844，0.945）。血浆miR-499-5p 预测AHF 的cut-off值为80.56，敏感度和特异度分别为52.4%和100%。

图1 miR-499-5p 和BNP 预测老年急性STEMI 患者并发AHF 的ROC 曲线

3 讨论

多项临床研究指出年龄是急性心肌梗死患者并发AHF 的独立危险因素，年龄愈大，并发AHF 的风险愈高[2]。因此，对于老年心肌梗死患者，早期预测AHF 发生风险，及时进行干预尤为关键。BNP 是目前临床应用最为广泛的心力衰竭预测和预后评估指标之一，有研究报道BNP 对AHF 的阴性预测值可达到95%左右，但也有研究发现其阳性预测值相对较低[10]。因此，继续寻找其他可预测AHF，且准确性高，检测方便，并能稳定表达的生物学标志物具有重要临床意义。

MiRNAs 是近年来备受关注的一类非编码小RNA，广泛参与机体各类生理病理活动，已有大量研究报道多个miRNAs 可能与高血压、冠心病、心律失常等心血管疾病的发生发展密切相关[3-4]。MiR-499-5p 亦是其中之一，多项临床研究证实血浆miR-499-5p 水平可用于急性心肌梗死诊断及预后评估[7,13-15]。GIDLÖF 等[13]研究结果显示血浆miR-499-5p水平诊断急性心肌梗死的AUC可高达0.989，敏感度和特异度均大于90%。文献[9]以中国人为研究对象，检测结果显示血浆miR-499-5p 水平诊断急性心肌梗死的AUC 为0.852。肖蕾等[14]对1 091例患者进行荟萃分析，结果显示血浆miR-499-5p水平诊断急性心肌梗死的敏感度为0.83，特异度为0.88，AUC 为0.84。本研究结果显示病例组患者血浆miR-499-5p表达水平显著增高，且与外周血cTnI，CK-MB 呈正相关关系，与蔡新宇等[15]研究结论一致，进一步验证了血浆miR-499-5p 水平对急性心肌梗死具有较高的诊断价值，同时也表明血浆miR-499-5p 水平可一定程度反映心肌梗死患者心肌损伤状态，可能对AHF 发生具有潜在的预测价值。

相对而言，目前关于miR-499 与心力衰竭的相关性研究开展较少。SHIEH 等[16]在转基因小鼠模型中发现miR-499 过表达能损伤对压力负荷的应激反应，加重心功能障碍，加剧心力衰竭。TIJSEN等[17]采用基因芯片技术进行筛查，并通过实时荧光定量PCR 法检测进行验证，确认了包括miR-499 在内的6 个miRNAs 可能成为心力衰竭的诊断标记。CORSTEN 等[18]研究发现AHF 患者血浆miR-499表达水平显著升高，并发现其机制可能与miR-499可平衡快慢心肌纤维比例调节心肌细胞功能有关。本研究发现AHF 亚组血浆miR-499-5p 显著高于非AHF 亚组，多因素分析结果显示血浆miR-499-5p表达水平升高是急性STEMI 患者合并AHF 的独立危险因素。此外，本研究还发现病例组患者血浆miR-499-5p 水平与BNP 及Killip 分级均呈正相关关系，提示血浆miR-499-5p 不仅能预测AHF 发生风险，还可用于评估病情严重程度。最后，本研究ROC 曲线分析结果显示血浆miR-499-5p 预测AHF的AUC 为0.797（0.725，0.869），cut-off值对应的敏感度和特异度分别为52.4%和100%，虽与BNP比较其AUC 稍低，且诊断敏感度偏弱，但其预测特异度较强，且与BNP 联合时AUC 最高，提示血浆miR-499-5p 检测有利于提高AHF 预测准确性，尤其对于血浆miR-499-5p表达水平显著升高患者更具意义。

综上所述，老年急性STEMI 患者血浆miR-499-5p表达水平显著升高，可能是并发AHF 的独立危险因素。本研究的不足之处在于：首先，本研究纳入样本例数相对较少，可能存在选择偏倚；其次，本研究纳入的研究对象均为年龄≥60 岁的老年人，一定程度限制了本研究结果的适用性；最后，本研究未就miR-499-5p 预测AHF 的直接分子机制进行探讨，未对AHF 相关的可能靶基因进行筛查和验证。