2013-2020年广西东兴市禽流感病毒的监测和分析

曹显永,邓佩文,童 彬,曹国敏

（1.广西壮族自治区东兴市动物疫病预防控制中心，广西 东兴 538100；2.广西壮族自治区防城港市畜牧站，广西 防城港 538001）

东兴市位于广西壮族自治区南部，与越南的芒街口岸经济特区仅一河之隔。东兴市沿边、沿江又沿海，中越边境贸易与民间交往非常频繁，动物及动物产品流通给边境动物疫病防控带来隐患。东兴市境内的北仑河口国家级自然保护区是国际间候鸟迁徙的重要通道，是候鸟的重要繁殖地和迁徙停歇地，这也给东兴市的禽流感防控带来了压力。

多年来，东兴市一直是中越边境重大动物疫病防控阻截带建设项目实施地，从2013年开始，国家和自治区就在东兴市的养殖场、活禽销售市场和候鸟栖息地开展禽流感监测和流行学调查。现将监测和流行病学调查结果进行分析，以期掌握东兴市的禽流感流行状况。

1 材料与方法

1.1 材料

H1—H16亚型禽流感标准阳性血清由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供；RNA提取试剂盒TaKaRa MiniBEST ViralRNA/DNA Extraction KitVer.5.0：购自大连宝生物工程有限公司；禽流感病毒H1～H16亚型核酸检测试剂盒（荧光PCR 法）：购自上海之江生物科技股份有限公司；SPF鸡胚：购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。

1.2 样品采集

2013年12月～2020年10月，在东兴市的6个活禽交易市场、10个鸭场和9个鸡场以及北仑河口自然保护区，共采集样品 6161份，其中包括4830份家禽拭子，1331份环境拭子(包含饮水、笼具、地面、污水、野鸟粪便等)。

1.3 病原分离和鉴定

病毒分离和鉴定：在哈尔滨国家禽流感参考试验室进行。将拭子样品接种SPF鸡胚进行增毒，再用血凝试验（HA）、血凝抑制试验（HI）和荧光RT-PCR 方法鉴定流感病毒及亚型。

1.4 统计分析方法

利用 Microsoft Excel软件对病毒分离率分别按照样品来源地区、样品采集时间、样品采集地点和样品来源禽类等进行分类统计和分析。

2 结果

2.1 禽流感病毒监测总体情况

从2013年10月到2020年10月份，共进行了25次采样，共采集样品6161份，共分离到禽流感病毒796株，阳性率为12.92%，分离到病毒亚型有H1、H3、H4、H6、H7、H9、H10 和 H11 等多种亚型，其中以 H3、H6和H9亚型最多。

2.2 禽流病毒的分布特征

2.2.1 时间分布。东兴市一年四季都有病毒循环，10-12月份样品的阳性率处在一个较高的水平，5-6月份样品的阳性率较低。详见图1。

图1 东兴市AIV时间分布情况

如果按季节区分，春季（1～3月）病毒分离率为9.78%（125/1278），夏季（4～6 月）为 7.77%（126/1622），秋季（7～9 月）为 13.56%（61/450），冬季（10～12 月）为17.22%（484/2811）。夏季的病毒分离率最低，显著低于冬季。

2.2.2 空间分布。在禽流感监测中，只有在活禽交易和养殖环节检测到AIV，而在候鸟栖息地没有检测到AIV。

在活禽市场分离到763株AIV病毒，阳性率为21.72%，市场场间阳性率为100%(6/6)。市场环境AIV阳性率（30.82%）显著高于市场中家禽AIV阳性率（20.77%），表明AIV在市场环境中的循环蓄积严重。

在养殖场分离到33株病毒，阳性率为2.00%。其中，鸡场阳性率为0.13%（1/751），鸡场场间阳性率为11.11%（1/9）；鸭场阳性率为 3.56%（32/899），鸭场场间阳性率为60.00%(6/10)。

2.2.3 群间分布。分离出病毒的阳性样品来源包括：鸡、鸭、鹅和环境，水禽样品的阳性率显著高于鸡(见图2)，不同种类的家禽分离出禽流感病毒亚型及阳性率有所不同。鸡样品分离到的病毒亚型：H3、H4、H6、H9、H10，阳性率为 7.12%（157/2206）；鸭样品分离到的病毒亚型：H1、H3、H6、H7、H9、H11 等， 阳性率为32.13%（440/2168）；鹅样品分离到的病毒亚型：H3、H6、H9 等，阳性率为 21.27%（97/456）。

图2 东兴市AIV群间分布情况

3 讨论

根据东兴市的禽流感监测结果显示，活禽销售市场禽流感病毒阳性率 （21.72%）显著高于养殖场(2.00%)，这说明活禽销售市场流感病毒污染严重,是禽流感传播的高风险点。而候鸟栖息地没有检出病毒，这是因为采样偏差，还是如雷富民、赵德龙等[1-2]提出的很难断定候鸟在禽流感传播过程中的作用，这需要继续跟踪监测和调查。

水禽样品禽流感样品阳性率（20.46%）显著高于鸡的阳性率(7.12%),养殖环节分离的AIV几乎都来源于水禽，而且一些亚型禽流感病毒(如H3、H6)也以水禽来源为主，这表明一些亚型AIV对宿主有一定的偏嗜性，也揭示水禽是流感病毒的重要宿主[3-4]。另外，我们的监测调查结果表明水禽免疫率都相对较低，抗体水平不高，所以水禽在禽流感的传播过程中是较为主要的传播宿主[5]，水禽的免疫工作不容忽视。

根据东兴市历年气象统计数据显示，12月至次年2月是一年中温度较低的时期，其中1月份的平均气温最低，低温有利于禽流感病毒的生存。但监测结果显示，10月和11月份的病毒分离率最高，而且在4月份和9月份也有一个不小的升幅。这几个月病毒分离率的升高都发生在活禽市场，原因有以下几点：一是家禽的集中上市。东兴市的小规模养殖场（户）一般都是在4-5月份期间进苗饲养，肉鸡养殖150天左右上市，而蛋鸭一般在产蛋期结束后销往市场；二是节假日消费需求量增大，4月前后有清明节和劳动节，9月份过后有国庆节和中秋节。节日前，百姓往往准备大量的食材，以备欢庆聚餐食用，使得家禽的流通量大增[4]。这几个月气温较低，加之市场不休市、清洗消毒，节日过后市场里的病毒依然存在。这说明气温不是决定AIV分布的唯一因素，需要综合考虑社会、环境和经济等多方面因素。

4 结论

经过长期系统的监测发现，东兴市活禽市场和养殖场均有禽流感病毒循环，多种亚型病毒共存。活禽市场污染严重，水禽隐性带毒现象严重，因此活禽市场和水禽养殖场是东兴市禽流感防控的关键。同时东兴市处于边境和候鸟迁徙线上，地理位置特殊。因此需要对东兴市的禽流感防控多加重视，加强针对禽流感的监测力度，提高市场的动物卫生监管，加强水禽的免疫力度。