非小细胞肺癌中转录因子SOX2 的表达及其临床意义

杨 芳 李鹏程 刘 薇 周艳刚 王晓燕 任 涛

1.成都医学院第一附属医院肿瘤科，四川成都 610500；2.成都医学院第一附属医院病理科，四川成都 610500

美国癌症协会2020 年1 月发布的癌症统计数据显示，不管男性还是女性，死亡人数最多的均为肺癌[1]。而非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌最常见的病理类型，占80%～85%。虽然近年来靶向药物及免疫治疗的使用提高了NSCLC 的生存率，但其5 年生存率仅约16%[2]。因此，探索新的生物标志物与NSCLC 临床病理特征及预后之间关系具有重要意义。既往研究结果显示，卵巢癌[3]、乳腺癌[4]及头颈部鳞癌[5]等肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移均受SOX2 影响。故本实验采用免疫组织化学法检测SOX2蛋白在NSCLC 组织和癌旁组织中的表达情况，探讨SOX2 蛋白与NSCLC 临床病理特征和预后之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017 年1 月—2019 年5 月成都医学院第一附属医院（以下简称“我院”）行手术切除并经病理科确诊的NSCLC 标本74 例。所有病例术前未接受任何治疗，且临床数据齐全。其中男40 例，女34 例；年龄39～83 岁，平均（63.8±10.6）岁；≤60 岁23 例，>60 岁51 例。腺癌43 例，鳞癌31 例；Ⅰ期39 例，Ⅱ期+Ⅲ期35 例；有淋巴结转移30 例，无淋巴结转移44 例。本研究纳入患者均知情同意，通过我院医学伦理委员会审查，符合医学伦理学标准。

1.2 方法

兔抗人SOX2 多克隆抗体（美国Abcam 公司，货号：ab97959）为一抗，按MaxVision/HRP 试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司，货号：1808060014）说明书进行免疫组织化学染色。步骤如下：石蜡切片脱蜡和水化，修复，使用3%的过氧化氢阻断内源性过氧化物酶的活性，加一抗（1∶400），4℃过夜。PBS 洗涤后，加聚合物增强剂，室温孵育20 min，孵二抗（酶标抗鼠/兔聚合物，福州迈新生物技术开发有限公司，货号：200526S407g）15 min。加新配制的DAB 溶液5 min，水洗，苏木精复染，最后脱水干燥，用中性树胶封片。镜下观察并照像。

1.3 观察指标

SOX2 蛋白阳性表达在镜下表现为细胞核内出现黄色颗粒。每张切片选取5 个高倍镜（200×）视野。染色强度计分标准：无着色0 分；淡黄色1 分；黄色或深黄色2 分；褐色或棕褐色3 分。阳性细胞所占百分比计分标准：<5%为0 分；5%～25%为1 分；﹥25%～50%为2 分；＞50%～75%为3 分；＞75%为4 分。总分=阳性细胞得分×染色强度得分，0 分为阴性（-）；1～4 分为弱阳性（+）；5～8 分为阳性（++）；9～12 分为强阳性（+++）。为便于统计，人为将阴性和弱阳性定义为阴性（-），阳性和强阳性定义为阳性（+）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0 统计学软件进行数据分析，计数资料用例数表示，组间比较采用χ2检验；预后分析使用Kaplan-Meier 曲线和Log-rank test 分子检验，最后使用COX 模型对预后因素行多因素回归分析。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC 组织及癌旁组织中SOX2 的表达情况

NSCLC 组织SOX2 阳性表达率为47.3%（35/74），高于癌旁组织的9.5%（7/74），差异有高度统计学意义（χ2=26.063，P <0.01）。阳性染色主要在细胞核，偶有细胞质同时染色，见图1。

图1 NSCLC 组织及癌旁组织中SOX2 的表达情况(免疫组织化学染色，200×)

2.2 SOX2 表达与NSCLC 患者临床病理特征间的关系

不同组织学类型、有无淋巴结转移、不同临床分期SOX2 阳性率比较，差异有统计学意义（P <0.05 或P <0.01）。见表1。

表1 SOX2 表达与NSCLC 患者临床病理特征的关系[例（%）]

2.3 Kaplan-Meier 生存分析

本研究从2017 年4 月开始随访，随访截至2020 年4 月，中位随访14 个月。结果显示，SOX2 阳性表达的NSCLC 患者生存期长于SOX2 阴性表达者，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）。见图2。

图2 Kaplan-Meier 生存分析

2.4 COX 多元回归分析

具体赋值如下：SOX2 表达（0=阴性，1=阳性），年龄（0=＞60 岁，1=≤60 岁），性别（0=女性，1=男性），病理类型（0=鳞癌，1=腺癌），临床分期（0=Ⅱ期+Ⅲ期，1=Ⅰ期），吸烟史（0=无，1=有），淋巴结转移（0=无，1=有）。结果显示，SOX2 阳性表达及淋巴结转移是NSCLC 患者预后的独立影响因素（RR >1，P <0.05）。见表2。

表2 COX 多元回归分析

3 讨论

SOX2 为SOX 基因家族的成员之一，在维持干细胞的自我更新、多向分化和重编程中发挥重要作用[6-7]。目前关于SOX2 表达与NSCLC 预后的相关性缺乏共识。Sholl 等[8]认为SOX2 过表达是Ⅰ期肺腺癌患者的不良预后因素。Sasaki 等[9]认为SOX2 过表达与肺鳞癌预后无明显相关性，而Wilbertz 等[10]认为SOX2 的表达与肺鳞癌的预后改善有关。Ying 等[11]研究提示SOX2 表达上调主要发生在肺鳞癌中，且SOX2 高表达者预后优于低表达者。荟萃分析显示[12]，无论是SOX2基因DNA 拷贝数的增加还是SOX2 蛋白的高表达，都有利于NSCLC 的整体生存。本研究结果显示，SOX2 表达与性别、年龄、是否吸烟无明显相关性（P >0.05），癌组织SOX2 阳性表达率高于癌旁组织（P <0.01），其阳性表达主要发生在肺鳞癌中，研究结果与欧洲和日本学者的研究一致[9,13]，提示SOX2 可作为诊断肺鳞癌的潜在分子标志物[14]。本研究结果显示，SOX2 阳性表达的NSCLC 患者生存期长于SOX2 阴性表达者；COX 多元回归分析显示，SOX2 表达是NSCLC 患者的独立预后因素，这一结果与Sholl 等[8]研究结果相反。分析其原因，考虑本研究中Ⅱ期及Ⅲ期患者约占一半比例，大部分患者术后接受化疗和/或放疗，而Sholl 等[8]研究中，纳入的为Ⅰ期患者，得出相反的结论，提示SOX2 阳性表达导致更好的预后可能与癌细胞对化疗和/或放疗的敏感性有关。但本研究为回顾性研究，术后辅助方案不统一，并且患者驱动基因表达情况等信息不完整，不排除治疗方案及驱动基因表达情况对预后的影响。因此，SOX2 阳性表达与肺癌细胞对化疗和/或放疗的敏感性尚待进一步研究。

目前有不少将SOX2 作为治疗靶点的研究正在进行[15-17]。SOX2 通过其下游信号传导介质AKT 激酶在NSCLC 疾病进展过程中促进肿瘤的生长和耐药，因此，SOX2 可能成为NSCLC 的治疗靶点[18-19]。另有研究显示[20-21]，上皮间质转化增强了肿瘤细胞的侵袭和转移能力，最终促进肿瘤细胞向机体各个部位扩散。Chang[22]观察到SOX2 下调增加了肿瘤上皮标志物的表达，而间质标志物及其相关基因下调，提示SOX2 可能促进NSCLC 的上皮间质转化。miRNA 参与了细胞的发育、增殖、分化及凋亡等多种生物学过程，包括肺癌在内的多种癌症中也发现了异常的miRNA 表达模式[23-24]。有证据表明，miRNA 可能通过调控其靶基因在NSCLC 中的表达来调节多种细胞功能，包括上皮间质转化，而SOX2 表达受miR-590-5p 调控。因此，miR-590-5p/SOX2 轴可能作为NSCLC 的上皮间质转化调节因子，可作为NSCLC 治疗的靶点[22,25]。相信随着SOX2 基础研究的不断深入，其与NSCLC 发生发展之间的关系将会更加明朗，未来可能成为治疗靶点改善患者预后。