清火安神汤对气郁质失眠模型大鼠5-羟色胺表达的影响

林 海，任庆萍，李 敏 ，田 兵，陈宇飞，郭 京，曾 一

失眠的病因病机复杂，病情顽固，治疗周期长。中医治疗失眠在改善睡眠质量和其他兼次症状方面具有独特的优势，与西药相比具有无明显成瘾性、副作用少的优点。但仍存在部分失眠病人经辨证治疗后效果不理想，出现难治、易转成慢性失眠等现象，究其原因，可能是与病人自身的体质因素有关，经文献检索并结合多年的临床经验，认为体质影响着失眠的多个方面，郁病是目前我国的常见病、多发病之一[1]，而气郁体质在失眠病人中是较常见的一种体质类型[2]。本研究观察清火安神汤对气郁体质失眠大鼠5-羟色胺(5-HT)表达水平的影响。

1 材料与方法

1.1 研究对象 Sprague-Dawley(SD)成年雄性大鼠60只，体质量180～220 g。

1.2 实验方法

1.2.1 体质模型的建立 将60只SD大鼠随机分为平和质组、气郁质组，每组30只。分组后以平和质、气郁质生存环境为参照饲养1周。平和质组：普通饲料喂养，保证饮食充足，环境适宜，光照及温度适宜，通风良好，及时清扫。气郁质组：参照朱清静等[3]、唐已婷等[4]报道的方法，实验开始时给予束缚法，将大鼠放入束缚盒内，调节前端活动部位到合适的位置，使大鼠不产生强烈反抗的紧张程度，每天6 h(09：00～15：00)，连续7 d。

1.2.2 SD大鼠失眠模型的建立 参考文献[5]，并结合前期预实验的方法和结果，采用现代公认的腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)诱导失眠模型。具体操作方法：于每日08：00～08：30进行，对大鼠腹腔注射PCPA，每天1次，连续注射2 d。即第1次对大鼠腹腔注射药物 24～28 h后，大鼠昼夜节律缺失，白天、晚上均不停活动，整体情况与空白组有明显差异。PCPA使用前，按大鼠0.430 mg/g用量，用弱碱性的生理盐水配制成混悬液备用；除空白组不予任何处理外，其余均腹腔注射PCPA。失眠造模成功后根据体质类型分为气郁质失眠组、平和质失眠组，每组30只。平和质失眠组再随机分为平和质失眠对照组、平和质失眠清火安神汤组，每组15只；气郁质失眠组再随机分为气郁质失眠对照组、气郁质失眠清火安神汤组，每组15只。平和质失眠对照组、气郁质失眠对照组造模成功后第5天开始给予生理盐水灌胃，每次0.2 mL，每日1次；平和质失眠清火安神汤组、气郁质失眠清火安神汤组于造模成功后第5天开始给予清火安神汤灌胃，每次0.2 mL，每日1次。

1.3 观察指标及测定方法 以平和质、气郁质饲养条件饲养1周后，测定大鼠血清5-HT含量。

1.3.1 体质模型建立阶段 ①一般情况：每天观察并记录大鼠的饮食生活起居、有无倦怠乏力、饮食量、饮水量等情况。②体质量变化：在实验开始前及实验结束后分别称量大鼠的体质量，测量时间为07：00～08：00。③行为学观察：称取每日摄食量，每周记录体质量1次，观察模型大鼠精神、活动情况等。1%蔗糖水摄取量测定参照金光亮等[6]报道的方法，在实验前先对所有大鼠进行1%蔗糖水摄取训练，即先用蔗糖水喂养48 h，随后断水24 h，再于08：00～09：00的1 h内测量每只大鼠摄取蔗糖水的量，以此作为每只大鼠蔗糖水摄取量的基线，在实验末于08：00～09：00测1 h内的蔗糖水摄取量。

1.3.2 失眠模型的建立阶段 分别记录大鼠在试验过程中的日常生活有无异常、一般情况、体质量变化。

2 结 果

2.1 体质模型创建阶段平和质组、气郁质组大鼠5-HT含量比较 平和质组、气郁质组造模前5-HT含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。平和质组造模后5-HT含量与造模前相比差异无统计学意义(P>0.0 5)，气郁质组造模后5-HT含量明显低于造模前(P<0.01)；气郁质组造模后5-HT含量明显低于平和质组造模后含量(P<0.01)。详见表1。

表1 平和质组、气郁质组大鼠5-HT含量比较 单位：ng/L

2.2 平和质组、气郁质组失眠造模前后血清5-HT含量比较 气郁质失眠组大鼠血清5-HT含量低于平和质失眠组(P<0.05)；气郁质失眠组大鼠血清5-HT含量明显低于气郁质组和平和质组(P<0.01)；平和质失眠组大鼠血清5-HT含量明显低于气郁质组和平和质组(P<0.01)。详见表2。

表2 平和质组、气郁质组失眠造模前后血清5-HT含量比较 单位：ng/L

2.3 清火安神汤对平和质失眠模型及气郁质失眠模型大鼠5-HT含量的影响 平和质失眠清火安神汤组大鼠血清5-HT含量明显高于平和质失眠对照组(P<0.01)，气郁质失眠清火安神汤组大鼠血清5-HT含量明显高于气郁质失眠对照组(P<0.01)；平和质失眠对照组大鼠血清5-HT含量明显高于气郁质失眠对照组(P<0.01)，气郁质失眠清火安神汤组大鼠血清5-HT含量与平和质失眠清火安神汤组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

表3 清火安神汤对平和质失眠模型及气郁质失眠模型大鼠5-HT含量的影响 单位：ng/L

3 讨 论

清火安神汤是在中医理论的支撑下，结合经典理论基础及大量临床经验提出的经验方，由柴胡、贯叶连翘、合欢皮等十余味中药组成，全方以辨病、辨体、辨证为理念，配伍严谨，诸药同用，以疏肝泻火、养心安神为主，肝心同治，不仅可以改善失眠病人的临床症状，还可改善体质的偏颇，是同时针对失眠病人气郁质与肝火扰心证的三位一体治疗方法。

5-HT是单胺类神经递质受体假说的重要组成部分，5-HT广泛参与人体情感、睡眠与觉醒、认知等活动，研究证实抑郁症、睡眠障碍与5-HT表达异常有关[7]。神经递质与失眠机制关联，已被广大学者认可，研究也十分广泛。觉醒期5-HT神经元放电增加，使5-HT浓度升高，阻断5-HT神经元可诱导睡眠，激活5-HT神经元诱导觉醒，主要由5-HT神经元组成的中缝背核也被证实是与觉醒相关的重要核团[8]。也有研究表明，大鼠抑郁可能与血清中5-HT含量的失衡有关[9]，5-HT作为抑郁症时机体的一个重要改变，其含量在中枢和外周呈现异常，据流行病学调查显示，抑郁症病人表现为中枢5-HT代谢下调[10]，外周循环血液中5-HT含量也多表现为下降[11]。5-HT是睡眠的重要调节递质，与睡眠的发生存在密切关系，而这些神经递质也在抑郁症的发病中起着重要的作用，李雪丽等[12]研究认为抑郁及相关失眠的发生与5-HT神经递质异常有关。

本研究结果显示，体质模型创建阶段，气郁质组造模后血清5-HT含量明显低于造模前和平和质组(P<0.01)；平和质组造模后血清5-HT含量与造模前比较差异无统计学意义(P>0.05)，提示气郁质与平和质大鼠5-HT含量有明显差异。本研究结果还显示，气郁质失眠组大鼠血清5-HT含量低于平和质失眠组(P<0.05)；气郁质失眠组大鼠血清5-HT含量明显低于气郁质组和平和质组(P<0.01)；平和质失眠组大鼠血清5-HT含量明显低于气郁质组和平和质组(P<0.01)，说明气郁体质与失眠均能使大鼠血清5-HT含量降低；气郁质失眠大鼠血清5-HT含量降低更为明显，且失眠大鼠血清5-HT含量比气郁质大鼠更低。本研究结果还显示，经清火安神汤干预后，气郁质失眠清火安神汤组大鼠血清5-HT含量明显高于气郁质失眠对照组(P<0.01)，说明清火安神汤治疗气郁体质失眠有效，其作用机制可能是清火安神汤能增加气郁质失眠组大鼠5-HT的分泌，从而抑制觉醒和兴奋，促进睡眠并且能改善气郁体质。平和质失眠清火安神汤组大鼠血清5-HT含量明显高于平和质失眠对照组(P<0.01)，说明清火安神汤治疗平和质失眠也有效，推测清火安神汤可提高平和质失眠大鼠5-HT的分泌，从而抑制觉醒和兴奋，对促进睡眠有一定的作用。进一步对气郁质失眠清火安神汤组与平和质失眠清火安神汤组大鼠血清5-HT含量进行比较，差异无统计学意义(P>0.05)。因为在治疗前气郁质失眠大鼠血清5-HT含量低于平和质失眠，所以并不能说明清火安神汤治疗气郁质失眠和平和质失眠效果相当，而更进一步说明了清火安神汤治疗气郁质失眠优于平和质失眠。

综上所述，本研究通过观察清火安神汤对气郁质失眠大鼠血清5-HT水平的影响，初步研究表明清火安神汤通过增加5-HT含量不仅可以改善气郁体质，而且可以改善失眠。