反相高效液相色谱法测定参芪降糖胶囊中梓醇含量*

冯光军，罗 丹，冉凤英，杨 洋，杨光义，梅全喜，陈琴华△

（1. 广东省深圳市宝安纯中医治疗医院药学部，广东 深圳 518101； 2. 湖北医药学院附属东风医院医学实验中心，湖北 十堰 442008）

参芪降糖胶囊是由人参茎叶皂苷、五味子、黄芪、山药、地黄、覆盆子、麦冬、茯苓、天花粉、泽泻、枸杞子11 味中药材组方的复方制剂［1］，具有益气养阴、滋脾补肾功效，主要用于治疗消渴症及2 型糖尿病。现代研究表明，参芪降糖胶囊能降低糖尿病周围神经病变患者血清内皮素1（ET－1）、白细胞介素6（IL－6）及肿瘤坏死因子－α（TNF－α）水平，疗效显著［2－4］，能显著降低血糖，调节血脂水平，预防糖耐量异常向糖尿病转化［5－8］。目前对参芪降糖胶囊的质量控制主要针对人参和黄芪的活性成分，采用薄层色谱法和高效液相色谱（HPLC）法进行含量测定［9］。地黄为常用补益中药，具有调节心血管、免疫、中枢等系统功能，以及降糖、降压等生物活性［10－11］。以梓醇为代表的环烯醚萜苷类是地黄最主要的活性成分，具有降血糖、利尿、缓和泻下等作用［12－13］，同为参芪降糖胶囊的主要有效成分。本研究中建立了梓醇的含量测定方法，为参芪降糖胶囊的质量控制提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Shimadzu LC－9A 型高效液相色谱仪（日本岛津有限公司），配有紫外检测器和浙江大学开发的N2000 型色谱工作站；KQ－100DB 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率为100 W，频率为40 kHz）；AEU－210 型电子天平（日本岛津有限公司，精度为百万分之一）。

1.2 试药

梓醇对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110808－201711，规格为每瓶20 mg，纯度≥98%，供含量测定用）；参芪降糖胶囊（五O 五药业有限公司，批号分别为1712025，1805102，1808065，规格为每粒0.35 g）；乙腈（色谱纯，十堰市化学试剂厂）；水为微孔滤膜过滤纯化水，其余试剂均为分析纯。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Linksil HPLC Column ODS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈－0.1%磷酸溶液（2 ∶98，V／ V）；流速：0.8 mL／min；柱温：30 ℃；检测波长：205 nm；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

取梓醇对照品10 mg，精密称定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇，超声溶解，并用甲醇定容，制成含梓醇100 μg／mL的对照品溶液。取样品10 粒，倾出内容物，研细，取2.5 g，精密称定，置25 mL 容量瓶中，加甲醇20 mL，称定质量，超声提取30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方工艺制备缺地黄的阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL，按2.1 项下色谱条件进样测定。色谱图见图1。结果理论板数按梓醇峰计均大于9 000，分离度均大于1.5，基线分离良好。

线性关系考察：分别精密吸取2.2 项下对照品溶液（100 μg／mL）适量，置10 mL 容量瓶中，以甲醇定容，分别制成含梓醇质量浓度为1，5，10，20，50，100 μg／mL的系列对照品溶液。吸取上述溶液各10 μL，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，以对照品溶液质量浓度（X，μg／mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y ＝7 170 X－7 671，R2＝0.998 1（n ＝6）。结果表明，梓醇质量浓度在1 ～100 μg／mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：吸取梓醇对照品溶液（20 μg／mL），按2.1 项下色谱条件进样10 μL，连续进样6 次，记录峰面积。结果的RSD 为0.98%（n ＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取样品（批号为1805102）适量，研细，依法制备供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h 时进样测定，记录峰面积。结果的RSD 为1.02%（n ＝6），表明供试品溶液在12 h 内稳定。

重复性试验：取样品（批号为1805102）适量，研细，依法制备供试品溶液6 份，按2.1 项下色谱条件进样测定6次，记录峰面积，并计算含量。结果平均含量为110 μg／g，RSD 为1.96%（n ＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取样品（批号为1805102，梓醇含量为110 μg／g）1.0 g，研细，精密称定，依法制备供试品溶液6 份，各加入梓醇对照品溶液（100 μg／mL）1 mL，按2.1 项下色谱条件进样10 μL，测定峰面积，并计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n ＝6）Tab.1 Reuslts of the recovery test（n ＝6）

2.4 样品含量测定

取3 批（批号分别为1712025，1805102，1808065）样品，取出内容物，研细，依法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样10 μL。结果3 批样品中梓醇含量分别为110，105，108 μg／g。

3 讨论

本试验中采用反相高效液相色谱法测定参芪降糖胶囊中梓醇的含量，前期处理简便，结果准确。对梓醇对照品溶液进行了全波长扫描，最大波长为205 nm。考察了甲醇－0.1%磷酸溶液、乙腈－0.1%磷酸溶液，结果发现，以乙腈－0.1%磷酸溶液（2 ∶98，V／ V）为流动相时，梓醇与其他成分分离良好，保留时间适中。考察了水－甲醇、甲醇、乙醇超声提取对梓醇含量测定的影响，结果发现，用甲醇超声提取，样品杂质量少，提取效率较高，故选择甲醇为提取溶剂。考察了超声提取时间，结果超声提取30 min 后，提取效率并未提高，故选择甲醇超声提取30 min。

本研究结果表明，本方法分离效果和重复性均良好，测定结果准确，回收率高，可用于参芪降糖胶囊中梓醇的含量测定。