B群链球菌显色培养基性能评价

王晓娜，丛桂敏，曹作伟

（沈阳市妇婴医院检验科，辽宁 沈阳 110011）

B群链球菌（group B streptococcus，GBS）又称无乳链球菌，可引起新生儿败血症、脑膜炎，甚至导致新生儿死亡[1]。因此，及时准确的筛查围产期孕妇生殖道中定植的GBS至关重要。传统使用普通血琼脂培养基（bood agar plate，BAP）进行筛查，但仍存在一定程度的漏检率。GBS筛查的新型选择性显色培养基（chromogenic medium chromID Strepto B agar，STRB）原理为通过生化反应使培养基上的菌落呈现粉紫色，不通过鉴定即可直接筛查出GBS。本研究比较STRB与BAP鉴定GBS的敏感性、特异性及选择性能，旨在为实验室快速准确鉴定GBS提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 样本制备 选取2019年1月至2019年6月在本院产科门诊就诊的35～37 周孕妇阴道拭子标本1 500 例，已知GBS菌株10例。

1.2 仪器与试剂 成品BAP购自郑州安图生物技术有限公司，STRB购自郑州安图生物技术有限公司，CO2孵育箱购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司，DL-96Ⅱ细菌测定系统购自珠海迪尔生物工程有限公司。

1.3 质控菌株 金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌标准菌株ATCC25922、白念珠菌ATCC6258均购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.4 检测方法 采用3 区划线方法将标本接种于BAP 和STRB，置（35±2）℃、CO2孵育箱孵育18～24 h。对BAP上乳白色、湿润、ß溶血的疑似GBS菌落进行触酶试验、CAMP试验，同时，采用DL-96Ⅱ细菌测定系统进行鉴定。对STRB上粉紫色、湿润的典型菌落，用DL-96Ⅱ细菌测定系统测定，同时，使用CAMP试验辅助判定。采用阴性培养基继续孵育至48 h，疑似GBS菌落采用上述方法再进行鉴定。

1.5 观察指标 比较直接接种血琼脂培养基和显色培养基筛查GBS的敏感性、特异性及选择性能。

1.6 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 BAP与STRB阳性率、敏感性、特异性比较 在BAP和STRB上接种的已知10例GBS菌株均检出，检出率为100.0%。孕产妇标本共筛查出125例GBS，阳性率为8.3%（125/1 500）。其中培养24 h后，BAP与STRB阳性率分别为6.2%（94/1 500）和8.1%（122/1 500）；培养48 h后，BAP与STRB阳性率均为8.3%（125/1 500），高于24 h阳性率。STRB与BAP筛查GBS阳性率比较差异具有统计学意义（χ2=3.911，P＜0.05）。STRB筛查GBS敏感性为97.60%、特异性为99.35%，见表1。

表1 BAP与STRB阳性率、敏感性、特异性比较Table 1 Comparison of the positive rate,sensitivity and specificity between BAP and STRB

2.2 BAP 与STRB 性能比较 BAP 上接种24 h 及48 h 后，分别有32.3%及31.8%的非目标菌群被完全抑制。STRB 上接种24 h 及48 h 后，分别有72.6%及70.9%的非目标菌群被完全抑制。孵育24 h后，BAP与STRB非目标菌群生长密度比较差异有统计学意义（χ2=32.684，P＜0.05），见表2。

表2 BAP与STRB非目标菌生长密度比较Table2 Comparison of growth density of non-target bacteria between BAP and STRB

3 讨论

GBS是一种有荚膜的革兰阳性链球菌，主要寄居在女性直肠和阴道，妊娠晚期感染GBS可导致新生儿感染、脑膜炎、甚至死亡[1]。因此，妊娠晚期及时筛查出携带GBS对降低围产期GBS感染具有重要意义，而合采用适的筛查方法尤为重要。

3.1 不同地区GBS 定植率 相关数据表明[2]，不同种族、不同地区妊娠晚期孕妇GBS带菌率也存在差异，且呈现上升趋势。如非洲为22.4%，欧洲为19.0%[3]，东南亚地区略低，如日本为8.2%、韩国为8.0%[4]。而国内近几年才对GBS感染引起的母儿危害才有所了解，仅2011 年《孕前及孕期保健指南》[5]、2015年《胎膜早破的诊断与处理指南》[6]中提到GBS筛查。因此，国内关于GBS感染以及对孕产妇及胎儿影响的相关研究较少。各地区GBS 阳性率差异较大，如澳门地区为17.1%[7]、银川地区为5.09%[8]、北京地区为8.1%[9]。本研究阳性率为8.3%，低于澳门地区的数据，但高于银川地区数据，与北京地区相当。分析原因可能与地域分布、人群构成比例、生活方式、经济发展程度等因素有关。而检出率则与多种因素有关，首先是临床对GBS 的重视程度。目前，我国很多地区即使是经济发达城市均未开展妊娠晚期GBS筛查。其次为实验室检测水平，包括高水平的质控水平、专业的检验人员等，均在GBS 筛查中起到至关重要的作用。此外，取材部位、筛查时间、检测方法等均会影响检出率。

3.2 不同GBS 培养方法比较 目前，临床上应用最普遍的GBS的检测方法为细菌培养法，也是目前检测的金标准。主要通过形态学观察、CAMP试验做出初步的判断，然后上机鉴定，但该方法需纯培养菌落3～5 d，耗时较长，此外，操作复杂，且在血琼脂培养基上易受到其他菌群如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等细菌的抑制，易受到检测环境、送检时间、储存条件等多种因素影响。而原位杂交、PCR等方法虽然灵敏度较高，但特异性较低，且均需专业的仪器和技术人员，成本高、耗时长，较难在基层医疗机构推广[10]；凝胶电泳法特异性较高，但由于GBS 具有多种血清型，易造成漏检。本研究应用的STRB 是一种新型的选择性显色培养基，基本原理为在培养基中加入抗生素来抑制其他细菌的生长，再加入相应的反应底物使GBS菌落显颜色，典型GBS菌落为粉紫色，其他细菌则可被抗生素抑制或少量生长而不产生典型菌落。本研究结果显示，培养24 h 后，STRB 上阳性率为8.1%（122/1 500），高于BAP的6.2%（94/1 500），且增加培养时间后，检出率均有所提高。同时，STRB上接种24 h及48 h后，非目标菌群完全抑制率（72.6%、70.9%）也高于BAP（32.3%、31.8%）。STRB对70%以上的样本均可完全抑制非目标菌群的生长，选择性能较好，结果易于判断。与传统方法相比，无需检测仪器，肉眼即可观察，省去GBS 鉴定步骤，操作简便，降低培养时间。

综上所述，B 群链球菌显色培养基对于临床GBS 筛查有良好的敏感性和特异性，可较好的抑制非目标菌群，选择性能良好，结果易于判断。与直接使用普通血琼脂培养基相比可降低漏检率，值得临床推广运用。