颈动脉狭窄患者支架植入术后认知功能变化与微RNA-24的关系

乐敏莉， 向辉华， 李 飞， 胡家美

颈动脉狭窄发病率呈逐年升高趋势［1-2］。颈动脉狭窄疾病进展易引起患者认知功能下降， 其主要原因是脑组织灌注降低［3］。颈动脉支架植入术是改善颈动脉狭窄患者脑组织灌注量的常用手段，可改善患者认知功能［4］，但其机制尚未完全阐明。 微RNA(miRNA，miR)是一种非编码单链RNA，已证实参与多种疾病病理进程［5-6］。 miR-24 是miRNA 家族成员，细胞试验研究证实其在缺氧条件下可通过抑制SH-SY5Y 细胞中神经递质表达参与神经元损伤过程［7］，而认知功能损伤与神经元受损密切相关［8］。本研究旨在通过分析miR-24 与颈动脉狭窄患者支架植入术后认知功能变化的关系，探讨支架植入术改善患者认知功能的可能机制。

1 材料与方法

1.1 一般资料

前瞻性选取2017 年2 月至2019 年2 月湖北民大医院收治的135 例颈动脉狭窄患者作为研究对象。 颈动脉狭窄诊断符合 《颈动脉狭窄诊治指南》［9］中标准。 患者纳入标准：①DSA 检查证实单侧或双侧颈动脉狭窄＞70%； ②术前未接受对症治疗； ③无凝血功能障碍； ④对治疗药物无禁忌证；⑤接受颈动脉支架植入术；⑥签署手术知情同意书。 排除标准：①伴有认知功能障碍；②存在乙醇依赖史；③术前服用改善认知功能药物；④既往接受颅脑手术或颈动脉内膜切除术； ⑤颈动脉严重钙化；⑥伴有颅内动脉瘤；⑦主动脉弓分支严重扭曲；⑧严重心、肺、肝、肾功能不全；⑨中途退出和不能完成随访。 135 例颈动脉狭窄患者中男97例，女38 例；年龄40～76 岁，平均(68.73±7.03)岁；体质量指数(24.78±3.40) kg/m2；单侧狭窄82 例，双侧狭窄53 例，平均颈动脉狭窄为(82.56±6.60)%；平均受教育年限(8.70±2.61)年。 本研究获得医院医学伦理委员会批准。

1.2 支架植入术

患者入院后接受详细检查，明确基本情况后给予对症治疗。 采用Innova 3100 DSA 机(美国通用公司)完成手术。 利多卡因局部麻醉后，穿刺股动脉并置入6 F/8 F 鞘， 依据血管造影选择合适的球囊和支架；肝素抗凝，将指引导管置入颈总动脉中段，于血管远端放置保护滤器；先行球囊预扩张，后植入自膨式颈动脉支架(图1)，局部缝合加压包。术前3 d始口服氯匹格雷(50 mg/d)和阿司匹林(100 mg/d)，术后长期维持。

图1 颈动脉狭窄患者支架植入术影像

1.3 血清学指标检测

抽取患者术前及术后6 个月外周静脉血10 mL，室温下4 000 r/min 离心15 min，离心半径8 cm，分离上层血清，置于-20℃冰箱，待测。 采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清miR-24 相对表达量，TRIzol 试剂提取血清中总RNA， 将2 ng 总RNA 添加至20 μL 反应液中，采用TaqMan miRNA检测试剂盒逆转录合成cDNA，PCR 扩增， 反应条件：95℃1 min，95℃45 s，15 s 退火，72℃45 s，40个循环。 以β-肌动蛋白(actin)为内参，采用2-ΔΔCt表示miR-24 相对表达量。 引物序列见表1。

表1 引物序列

1.4 认知功能评价

同一神经心理学医师评定患者术前及术后6个月认知功能。 采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估认知功能，总分30 分，≥26 分为正常，＜26 分为认知功能障碍［10］；画钟测试(CDT)评估患者时间、空间定向概念，共10 分，分数越低认知功能越差［11］；额叶功能评定量表(FAB)评估执行功能，共6 个条目，每个条目3 级评分，总分越高，执行功能越好［12］；听觉词语学习测试(AVLT)评估患者记忆力，对15个名词连续5 次学习和回忆，对另15 个“干扰”名词进行学习会议， 并在30 min 后回忆第一组词，前5 次会议正确的总数为记忆得分，＞4 分为正常［13］；符号-数字模式测试(SDMT) 测评患者注意力，90 s内按顺序写相应符号，正确填写一个记1 分，最高90 分［14］；Rey-Osterriech 复杂图形测试(CFT)评 估患者视觉空间感知能力， 将复杂图形分成18 个记分单位，3 级评分法，根据所画图形和相应位置是否正确评分，最高36 分［15］。

1.5 颈动脉狭窄评价

根据北美放射年会超声会议颈动脉内膜切除术协作组制定的标准［16］，评估颈动脉狭窄程度：狭窄率＜50%为轻度狭窄，50%～69%为中度狭窄，70%～99%为重度狭窄，100%为闭塞。

1.6 统计学方法

采用SPSS 23.0 统计学软件进行数据分析。 服从正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，治疗前后比较用配对样本t检验； 计数资料以例（率）表示，用卡方检验。 miR-24 变化值与认知功能变化相关性用Pearson 卡方检验及多元线性回归分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

135 例颈动脉狭窄患者支架植入术均获成功。所有患者完成随访，无失访。

2.1 不同狭窄程度miR-24 相对表达量

轻度狭窄(n=31)、中度狭窄(n=48)、重度狭窄(n=53)、闭塞(n=3)患者miR- 24 相对表达分别为(0.99±0.23)%、(0.76±0.20)%、(0.61±0.17)%、(0.29±0.14)%,4 组患者间miR-24 相对表达量差异均有统计学意义(F=30.04,P＜0.001)，闭塞患者miR-24 相对表达量最低。

2.2 手术前后认知功能比较

颈动脉支架植入术后患者总体认知功能较术前有明显改善，主要体现在时间、空间定向概念、注意力、记忆力、执行功能等方面，见表2。

2.3 手术前后miR-24 相对表达量比较

颈动脉支架植入术后患者血清miR-24 相对表达量为(1.15±0.36)%，显著高于术前(0.74±0.18)%(t=-7.023,P＜0.001)。

表2 颈动脉支架植入前后患者认知功能评分比较 分

2.4 认知功能变化与△miR-24 相关性分析

颈动脉支架植入术前后患者MoCA 变化值（△MoCA）、CDT 变 化 值（△CDT）、SDMT 变 化 值（△SDMT）、AVLT 变化值（△AVLT）、CFT 变化值（△CFT)、FAB 变 化 值（△FAB）、miR- 24 变 化 值（△miR-24），分别为（0.83±0.21）分、（0.25±0.05）分、（1.73±0.36）分、（0.75±0.24）分、（0.91±0.25）分、（0.66±0.19）分、（0.37±0.06）%；△miR-24 与△CDT、△SDMT、△CFT、△FAB 均呈正相关(r=0.582，P＜0.001；r=0.563，P＜0.001；r=400，P＜0.001；r=0.452，P＜0.001)(图2)，与△MoCA、△AVLT 呈负相关(r=0.208，P=0.102；r=0.178，P=0.146)。

图2 颈动脉狭窄患者认知功能变化与△miR-24 相关性散点图分析

2.5 认知功能变化与△miR-24 多元线性回归分析

将△CDT、△SDMT、△CFT、△FAB 作为自变量，α入=0.05，α入=0.1，纳入多元线性回归分析，结果显示△miR-24 与△CDT、△SDMT、△CFT 呈正相关(P＜0.05)，与△FAB 呈负相关(P＞0.05)，见表3。

表3 认知功能变化与△miR-24 多元线性回归分析

3 讨论

颈动脉狭窄作为动脉粥样硬化发展的严重阶段，是导致患者认知功能损伤的主要原因之一。 有研究显示，解除颈动脉狭窄可有效改善患者认知功能，颈动脉支架植入术是临床常用方法［17］。 颈动脉支架植入术改善认知功能损伤的机制尚未完全明确。 miR-24 是miRNA 家族成员， 相关研究证实miR-24 在神经元损伤中发挥重要作用［7］。 本研究实验分析miR-24 与颈动脉狭窄患者认知功能的关系，探讨支架植入术改善患者认知功能的可能机制。

本研究通过对不同狭窄程度患者miR-24 相对表达量进行比较，结果显示随着颈动脉狭窄程度升高，miR-24 相对表达量降低， 提示miR-24 与颈动脉狭窄患者病情存在联系；通过比较颈动脉狭窄患者支架植入术前后认知功能变化，发现支架植入术后患者总体认知功能明显改善， 主要体现在时间、空间定向概念、注意力、记忆力、执行功能等方面，其原因可能与支架植入术改善脑血液循环、减轻缺血缺氧对脑组织损伤有关；进一步比较支架植入术前后颈动脉狭窄患者miR-24 相对表达量， 结果显示支架植入术后患者血清miR-24 相对表达量升高。 基于以上结果，推测血清miR-24 可能与颈动脉狭窄患者认知功能存在联系。 为验证推测，采用多元线性回归分析miR-24 与认知功能变化的关系，结果发现△miR-24 与△CDT、△SDMT、△CFT 均呈正相关， 表明miR-24 相对表达量越高， 对患者时间、空间定向力、注意力及视觉空间感知能力的改善越有利。

miR-24 可抑制X-染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)表达［18］，而XIAP 通过调节半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-3 水平参与认知功能损伤过程［19］。caspase-3 受到线粒体依赖的信号传导通路激活，引起神经细胞凋亡，造成海马区功能受损，破坏海马区结构完整性，进而影响空间学习及记忆能力等认知功能［20］。 因此，本研究推测支架植入术可能是通过促进miR-24 表达改善颈动脉狭窄患者认知功能。

本研究存在一定局限性， 如未将患者细分为单、双侧亚组进行分析，随访时间为6 个月虽避免了短期复查对学习和记忆造成的影响，但时间较短无法评估支架植入术对认知功能的远期作用。 下一步将延长随访时间并进行基础研究， 分析miR-24影响颈动脉狭窄患者认知功能的病理生理机制。

综上所述，颈动脉狭窄患者支架植入术后患者认知功能明显改善，主要体现在时间、空间定向力、注意力及视觉空间感知能力等方面，其机制可能与促进miR-24 表达有关。