APP下载

肝细胞肝癌组织中硫氧还蛋白9 表达水平与经肝动脉化疗栓塞术治疗疗效的关系

2021-05-20潘杨军章喜林陆伟杰郑银元

介入放射学杂志 2021年4期
关键词:灵敏度直径分级

潘杨军, 王 耀, 章喜林, 陆伟杰, 郑银元

肝细胞肝癌(HCC)血供丰富,90%以上血供来自于肝动脉[1]。 TACE 已被公认为治疗HCC 的有效手段之一[2]。 有报道显示,相同肿瘤分期的HCC 患者接受TACE 治疗,但疗效不尽相同[3]。筛选适合接受TACE 治疗的HCC 患者可有效降低医疗成本,达到精准医疗的目的。 因此,探寻灵敏度和特异度均较高的生物标志物评价HCC 患者TACE 疗效具有重要意义。

硫氧还蛋白9(thioredoxin domain containing protein 9,TXNDC9)是一种具有ATP 结合蛋白活性的硫氧还蛋白[4]。 有研究表明敲除TXNDC9 基因可抑制MYC 与染色质结合[5],从而抑制HCC 细胞生长。 此外,TXNDC9 还可通过靶向核因子E2 相关因子2(nuclear factor-E2 related factor2,Nrf2)调节自噬,从而减弱大肠癌细胞对奥沙利铂的灵敏度[6]。从而推测,HCC 组织中TXNDC9 水平能反映TACE 疗效,遂开展本研究,以期为HCC 患者选择合适的治疗方案提供参考。 现报道如下。

1 材料与方法

1.1 入选患者临床资料

选择2013 年1 月至2016 年1 月诊断为HCC的97 例患者作为研究对象。 根据《原发性肝癌规范化诊治专家共识》[7]诊断HCC 并进行治疗。 纳入标准:①年龄18~70 岁;②病理活检确诊为HCC;③接受TACE 治疗;④Child-Pugh 分级A 或B;⑤能配合完成相关检查及随访; ⑥签署了知情同意书;⑦有保存在液氮罐中完好的肿瘤组织(经皮穿刺活检获取)。排除标准:①TACE 治疗禁忌证;②肿瘤分期Ⅲb 期或Ⅳ期患者;③美国东部协作组(ECOG)评分高于2 分;④接受射频消融术、微波消融术或靶向药物治疗等。 收集患者年龄、性别、乙肝表面抗原(HBsAg)、Child-Pugh 分级、肿瘤数目、肿瘤直径、甲胎蛋白(AFP)等临床资料。 97 例HCC 患者中男性66 例,女性31 例,年龄51~70 岁,平均年龄(62.6±5.3)岁。 本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 TACE 治疗 ①术前常规检查患者肝、肾功能、血常规、尿常规、凝血功能及心电图等。 ②根据HCC 患者肿瘤位置确定手术姿势,常规消毒、铺巾,行局部麻醉。 采用Seldinger 改良法经股动脉置入导管鞘, 将其插管至肝总动脉或腹腔动脉处,行肿瘤病灶血管造影,了解其血供情况。了解清楚肿瘤病灶供血情况后将表柔比星、奥沙利铂和超液化碘油的混悬液灌注至肿瘤供血动脉。 术中根据肿瘤病灶血供及大小决定乳化剂的用量,确保完全栓塞肿瘤供血动脉。③术后密切观察患者有无TACE 并发症发生,若出现发热、肝区闷痛、恶心等,则给予对症处理。 针对TACE治疗疗效较差的患者,根据患者病情给予针对性治疗。

1.2.2 HCC 组织中TXNDC9 水平检测 用蛋白质免疫印迹法检测HCC 组织中TXNDC9 水平[8]。实验步骤:①滴加RIPA 裂解液裂解细胞,4℃4 000 r/min离心10 min,离心半径8 cm,提取上层清液;②用BCA 蛋白定量试剂盒进行蛋白定量;③80 V 凝胶电泳15 min,然后增加电压至120 V,直至溴酚蓝跑出胶 面; ④300 mA 转 膜60 min; ⑤滴 加 兔 抗 人TXNDC9 单克隆抗体,4℃孵育过夜, 第2 日滴加二抗,室温孵育1 h;⑥用ELC 电化学发光曝光显影,最后用Image J 软件分析结果。 本实验所用抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.2.3 TACE 治疗疗效评价 用实体瘤疗效评价标准的修订标准(mRECIST)[9]评价首次TACE 治疗的疗效。完全缓解(CR)为CT 或MRI 检查所有目标病灶内动脉期无增强显影;部分缓解(PR)为CT 或MRI检查目标病灶的直径总和降低30%;疾病稳定(SD)为CT 或MRI 检查目标病灶的直径总和降低(未达到PR 标准)或升高程度低于20%;疾病进展(PD)为CT 或MRI 检查目标病灶的直径总和升高20%或有新病灶出现。

1.2.4 随访 于出院后1 个月复查CT 或MRI,了解HCC 患者碘油沉积情况、 肿块体积变化及有无新肿瘤病灶等。 第2 次及以后随访采用电话方式了解HCC 患者5 年生存预后情况。 每月随访1 次,末次随访时间为2020 年2 月16 日,平均随访时间为43.74(6~60)个月。

1.3 统计学分析

用SPSS 22.0 软件进行统计学分析。 正态分布的计量资料用均数±标准差(±s)表示,四组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用S-N-K 检验。 计数资料用例或率[n(%)]表示,组间比较采用χ2检验。用Spearman 相关分析TXNDC9 水平与TACE治疗疗效的关系。 用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评价TXNDC9 诊断HCC 预后的效能。 用Kaplan-Meier 绘制TXNDC9≥0.94 和TXNDC9<0.94的HCC 患者生存曲线,用Log-Rank 法比较差异。用Cox 回归分析影响HCC 患者预后的因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组基线资料

97 例HCC 患者首次接受TACE 治疗后,17 例(17.53%)CR,30 例(30.93%)PR,21 例(21.65%)SD,29 例(29.90%)PD。四组在年龄、性别、HBsAg、Child-Pugh 分级、肿瘤数目、肿瘤直径和AFP 方面比较,差异均无统计学意义(P均>0.05),见表1。

表1 各组基线资料比较 n(%)

2.2 HCC 患者TACE 疗效与TXNDC9 的关系

CR 组、PR 组、SD 组 和PD 组HCC 组 织 中TXNDC9 水平分别为0.66±0.09、0.75±0.09、0.94±0.12 和1.08±0.11,差异有显著统计学意义(F=77.815,P<0.001)。CR 组TXNDC9 水平低于PR 组、SD 组和PD 组,差异均有统计学意义(q=3.933、11.655、18.501,P<0.05)。PR 组TXNDC9 水平低于SD 组和PD 组,差异均有统计学意义(q=9.167、17.117,P<0.05)。 SD 组TXNDC9水平低于PD 组,差异有统计学意义(q=6.453,P<0.05)。HCC 组织中TXNDC9 水平与TACE 治疗疗效呈负相关关系(rs=-0.849,P<0.001)。

2.3 HCC 预后与TXNDC9 的关系

97 例HCC 患者1 年、3 年和5 年生存率分别为84.5%(82/97)、68.0%(66/97)和52.6%(51/97)。TXNDC9 诊断HCC 预后的ROC AUC 为0.930(95%CI:0.859~0.972),最大约登指数为0.700,其 所对应的最佳截断点、灵敏度和特异度分别为0.9、73.9%和96.1%,见图1。以TXNDC9 诊断HCC 预后的最佳截断点为界,将HCC 患者分为两组:TXNDC9≥0.94 组(n=37)和TXNDC9<0.94 组(n=60)。TXNDC9≥0.94 组中位生存时间低于TXNDC9<0.94 组(24个月比60 个月),差异有显著统计学意义(Log-Rank Chi-square=64.538,P<0.001),见图2。

图1 TXNDC9 诊断HCC 预后的ROC 曲线

2.4 影响HCC 预后的因素分析

将HCC 患者预后(生存=0,死亡=1)作为因变量,将年龄、性别(女=0,男=1)、HBsAg(-=0,+=1)、Child-Pugh 分级(A=0,B=1)、肿瘤数目(1 个=0,≥2个=1)、肿瘤直径、AFP 和TXNDC9 作为自变量纳入单因素Cox 回归分析, 结果显示肿瘤直径、Child-Pugh 分级和TXNDC9 与HCC 预后有关(P<0.05)。将年龄、肿瘤直径、Child-Pugh 分级和TXNDC9 作为自变量(纳入标准P≤0.1),将HCC 患者预后作为因变量纳入多因素Cox 回归分析,结果显示肿瘤直径、Child-Pugh 分级和TXNDC9 是HCC 患者预后的独立危险因素(P<0.05),见表2。

图2 不同TXNDC9 水平HCC 患者生存曲线

3 讨论

目前,临床多采用CT 或MRI 等影像学检查手段了解TACE 治疗后碘油沉积及肿瘤体积变化等情况评价TACE 治疗效果。 但CT 或MRI 等影像学检查费用较贵, 多次复查了解HCC 病灶变化会增加患者辐射和经济负担,需探寻一种准确率高且检查费用低的生物标志物评价TACE 治疗疗效。 有学者用平均血小板容积评价TACE 治疗HCC 的疗效,结果显示TACE 术前及术后平均血小板容积值的变化在TACE 术后疗效评估方面有一定价值[10]。 但对于骨髓造血功能异常的HCC 患者而言, 平均血小板容积值异常,用其评价TACE 术后疗效的准确度会大大降低。 此外,化疗药物也会对骨髓造血功能有一定影响,进而影响平均血小板容积值,因此,单纯用平均血小板容积评价TACE 治疗疗效不适用于合并全身化疗或有造血功能异常的HCC 患者。 此外,还有学者用血清白细胞介素-6 和γ 谷氨酰转移酶评价TACE 治疗疗效,结果显示二者联合对TACE 治疗疗效及预后评价的价值较高[11]。 白细胞介素-6 在炎症性疾病中高表达,γ 谷氨酰转移酶在肝纤维化中表达异常,因此,对于合并炎症性疾病或肝纤维化的HCC 患者, 采用白细胞介素-6 和γ 谷氨酰转移酶评价TACE 治疗疗效, 其准确性有待考证。

表2 影响HCC 患者预后的因素分析

TXNDC9是硫氧还蛋白家族中成员, 在抗氧化应激损伤中具有重要作用[12]。 目前,已有研究证实TXNDC9 在 前 列 腺 癌[13]、肝 细 胞 癌[5]和 大 肠 癌[14]中高表达,并参与肿瘤进展。 癌细胞自噬水平已被证实与化疗耐药密切相关[15-17]。干扰TXNDC9 表达,大肠癌细胞中Nrf2 水平也随之降低,进而阻断了细胞自噬过程,同时细胞凋亡蛋白表达水平升高,在奥沙利铂诱导下凋亡[6]。 笔者推测HCC 细胞也通过TXNDC9/Nrf2 通路调控自噬水平,进而下调对化疗药物的灵敏度。 检测HCC 组织中TXNDC9 可反映TACE 治疗疗效。

本研究通过比较CR 组、PR 组、SD 组和PD 组HCC 组织中TXNDC9 水平,结果显示其水平依次升高, 此外,HCC 组织中TXNDC9 水平与TACE 治疗疗效呈负相关关系。 上述结果证实了课题组推测,HCC 组织中TXNDC9 水平能反映TACE 治疗疗效。为进一步分析HCC 组织中TXNDC9 水平与TACE治疗远期疗效的关系, 本课题对接受TACE 治疗的HCC 患者进行了随访,结果显示其1 年、3 年和5 年生存率分别为84.54%、68.04%和52.58%,与伏旭等[18]随访结果接近。 构建TXNDC9 诊断HCC预后的ROC 曲线,结果显示其ROC AUC、灵敏度和特异度分别为0.930、73.91%和96.08%,该结果提示TXNDC9 对HCC 预后评估有极高价值,但灵敏度较低,可辅助评价HCC 患者预后。 进一步采用单因素和多因素Cox 回归分析影响HCC 患者预后的因素,结果显示肿瘤直径、Child-Pugh 分级和TXNDC9是HCC 患者预后的独立预测因素。 张长坤等[19]、刘光华等[20]研究表明,伴随HCC 肿瘤直径增加和Child-Pugh 分级增高, 患者预后不良风险也随之增加。 推测HCC 组织中TXNDC9 水平高,表明癌细胞调节自噬的能力强, 进而对化疗药物灵敏度降低,检测HCC 组织中TXNDC9 水平可反映癌细胞自噬水平,进而反映TACE 治疗疗效。

综上所述,HCC 组织中TXNDC9 水平高, 提示患者接受TACE 治疗疗效较差,获益较低。 此外,高TXNDC9 水平还表明HCC 患者预后不良风险较高。检测HCC 组织中TXNDC9 水平可辅助评价TACE治疗疗效及远期预后。 课题组下一步将开展基础研究,阐明TXNDC9 与化疗灵敏度的关系。

猜你喜欢

灵敏度直径分级
各显神通测直径
山水(直径40cm)
导磁环对LVDT线性度和灵敏度的影响
爱虚张声势的水
预爆破法处理大直径嵌岩桩桩底倾斜岩面问题
地下水非稳定流的灵敏度分析
分级诊疗路难行?
分级诊疗的“分”与“整”
穿甲爆破弹引信对薄弱目标的灵敏度分析
分级诊疗的强、引、合