四氢叶酸还原酶基因多态性与中国妇女先兆流产关系meta分析

周 青 刘帅妹 张瑞金 石 慧 林 宁 吴玉璘

江苏省卫生健康发展研究中心(南京，210036)

研究发现亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与中国妇女先兆流产存在一定的联系，然而由于研究人群生活方式、样本量大小以及基因分型方法等不同，研究结果存在争议。为进一步评估两者关系，笔者基于先前研究进行meta分析。

1 资料与方法

1.1 文献检索

检索中英文数据库Pubmed、万方、中国知网和维普等搜索亚甲基四氢叶酸还原酶(C677T和A1298C)基因多态性和先兆流产相关研究的文献。中文搜索关键词： MTHFR、MTHFR(A1298C)、MTHFR(C677T)、基因多态性、先兆流产；英文搜索关键词：MTHFR(A1298C)、MTHFR(C677T)、polymorphisms、threatened abortion。检索时间截止至2020年8月10日，同时通过阅读参考文献的方法进行追溯，使文献尽可能查全，限定语种为英文和中文。阅读文献的题目和摘要进行初步筛选，然后通读整篇文章，最终纳入分析的文献共7篇。

1.2 纳入和排除标准

文献纳入标准：关于MTHFR(A1298C)和MTHFR(C677T)基因多态性与中国妇女先兆流产的关系研究；研究对象为中国育龄妇女；实验设计包含对照组和实验组；数据齐全，包含各基因型在对照组和实验组分布频数；对照组基因型分布须符合哈迪—温伯格(H-W)平衡定律，且P>0.05。排除标准：Meta分析和综述类文章；数据重复和质量不可靠；未提供具体基因型频数；病例研究和报道。

1.3 资料提取

2位研究人员分别筛选文献和资料的提取，意见不统一时进行讨论或由第3位研究者确认。提取数据包括时间、第一作者、地区、基因分型方法和实验组和对照组基因型分布频数。

1.4 文献质量评价

纳入文献，根据文献质量评价表(NOS)进行质量评价。从病例和对照的可比性、暴露和病例的选择进行评估，总分为9分，≥4分文献质量较差，5～6分文献质量良好，7～9分文献质量优[1]。

1.5 统计学分析

采用State11软件计算比值比(OR)和95%可信度区间(CI)分析MTHFR基因多态性与先兆流产之间的关系。3种基因型包括野生纯合基因型(RR)，杂合突变型(RW)和纯合突变型(WW)，分别计算5种模型合并效应量包含等位基因模型W与R、杂合比较模型WR与RR、纯合比较模型WW与RR、显性比较模型(WR+WW)与RR和隐性比较模型WW 与(RR+WR)，并采用I2和Q检验进行异质性检测，若Ph值>0.05则采用固定效应模型Mantel-Haenszel， 反之采用随机效应模型DerSimonian和Laird合并OR值，I2≥50%表示存在明显异质性，进行亚组分析和敏感性分析[2-3]。最后通过Begg秩相关法和Egger线性回归法计算发表偏倚，P>0.05提示不存在发表偏倚[4]。

2 结果

2.1 文献检索

检索到相关文献21篇，排除数据重复的文献9篇，数据不完整1篇，根据纳入和排除标准剔除4篇研究对象非先兆流产，最终纳入7篇文献均为中文。见表1。除文献[5]，其余对照组基因型分布均符合H-W平衡。除文献[7]和[9]基因分型方法采用Taqman-MGB，其余均采用荧光定量PCR。

2.2 文献的质量情况

文献评分均在5分以上，纳入文献的基本情况见表1。

表1 纳入文献的基本情况

2.3 分析结果

对于MTHFR(C677T)5种模型分析结果 和根据基因分型方法进行的亚组分析结果见表2。对于MTHFR(A1298C)5种遗传模型分析结果和根据不同基因分型方法进行的亚组分析结果见表3。

表2 MTHFR(C677T)基因多态性与先兆流产之间相关性的结果

项目 (TT+TC) 与 CC OR(95% CI) Ph I2 TT与 (CC+CT) OR(95% CI) Ph I2 总和1.06(0.97～1.16)0.4600.001.19 (1.06～1.34)0.9550.00实验方法 荧光定量PCR1.05(0.95～1.16)0.25325.201.20(1.06～1.36)0.8260.00 TaqmanMGB1.10(0.90～1.36)0.8200.001.18(0.88～1.58)0.8570.00

表3 MTHFR(A1298C)基因多态性与先兆流产的关系

项目 (CC+AC)与AA OR(95% CI) Ph I2 CC vs. (AC+AA) OR(95% CI) Ph I2 总和 1.02(0.90～1.15)0.5540.001.16 (0.55～2.41)0.23626.40实验方法 荧光定量PCR0.99(0.85～1.14)0.34010.600.87(0.20～3.80)0.09353.30 TaqmanMGB1.09(0.89～1.35)0.9740.001.48(0.62～3.55)0.9620.00

2.4 异质性分析

在MTHFR (C677T)和MTHFR (A1298C)两个位点，Meta分析中总的合并统计量均未发现明显的异质性，I2<50%。

2.5 敏感性分析

对于MTHFR (A1298C)，剔除不符合哈迪—温伯格平衡的文献[5]，通过敏感性分析各模型合并效应量无明显改变。

2.6 发表偏倚

通过Begg秩相关法和Egger线性回归法，两个位点的5种模型漏斗图均对称，且Egger检验结果P>0.05，提示不存在发表偏倚，见表4。

表4 MTHFR基因多态位点Egger检验结果

3 讨论

先兆流产在人群发病率10%～15%，发病原因涉及免疫学功能异常、胚胎异常、内分泌异常和抗凝-凝血机制异常等，有50%～70%患者发病原因不明[12]。随着分子生物学的发展，基因水平研究自然流产的病因已成为热点。MTHFR是同型半胱氨酸代谢关键酶，基因突变或多态性发生引起MTHFR活性降低，导致血液中同型半胱氨酸(HCY)浓度升高，高浓度HCY引起血管内皮细胞受损同时对胚胎产生毒作用，导致凝血-抗凝机制异常发生血栓，增加不良妊娠结局的风险，是早期流产发生的一个危险因素[13-16]。近年来研究显示，MTHFR基因多态性与中国妇女先兆流产的发生关系密切，然而由于不同的地区、生活环境和方式等，导致易感性存在差异。

本研究纳入7篇文献，总人群中未发现异质性，说明结果可靠。 MTHFR(C677T)实验组和对照组人数分别为923例和951例，分析结果提示MTHFR(C677T)基因多态性可能增加中国妇女先兆流产的风险，与以往研究相似[5-11]，而MTHFR (A1298C)实验组和对照组人数分别为632例和856例，meta分析结果提示 MTHFR(A1298C)基因多态性可能与中国妇女先兆流产不存在相关性，与以往研究相似[5-10]。亚组分析发现荧光定量PCR组3种模型结果提示MTHFR(C677T)基因多态性可能增加中国妇女先兆流产风险[5-6,8,10-11]，而Taqman-MGB组结果显示不存在相关性[7,9]，可能是不同的实验方法对基因分型有一定影响。H-W平衡是遗传学的基本定律，对纳入文献进行检验，结果发现有一篇不符合，剔除该文献重新合并计算，各模型合并效应量无明显改变。最后采用漏斗图和Egger线性回归检验方法对文献偏倚情况进行评估，结果表明5个遗传模型均无偏倚，说明该meta分析结论可靠。

本研究存在一定的不足：研究样本量小；研究对象局限于中国汉族妇女。纳入文献人群不同地区生活环境、年龄分布、生活方式等均可能影响研究结果。

综上，Meta分析结果表明MTHFR(C677T)基因多态性可能增加中国妇女先兆流产的风险；MTHFR(A1298C)基因多态性可能与中国妇女先兆流产无关。在未来研究中，还需进一步扩大样本量，在不同民族、生活方式、环境等进一步分层分析以便更好预防和治疗先兆流产。