覆盆子黄精颗粒保健食品组方配比和功效评价研究

吴 臻,何富乐

(浙江中医药大学 1.第一临床医学院；2.健康管理研究所，浙江 杭州 310053)

畲族药膳是以中医理论为指导，将药物与食物相配合，通过烹调加工而成，具有防病、治病、保健、强身等功效，目前在养生保健领域应用甚广。经团队前期实地调研发现，畲族药膳所采用的药材与101种药食同源物品具有高度的重叠性[1]，其中覆盆子和黄精两味药材作为阴阳双补剂，在畲族药膳中广泛应用[2]，如凤鸟腾飞(黄精炖鸡)、覆盆子饼等[3]。为进一步研究覆盆子和黄精的保健作用，本研究对肾阴阳两虚模型小鼠采用不同配比覆盆子黄精颗粒剂进行干预治疗，现汇报如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取6～8周龄SPF级健康雄性BALB/c小鼠70只，体质量大于16 g，平均体质量(18.91±0.98)g，由浙江中医药大学动物实验中心提供，供应商：上海BK公司，实验动物合格证号：SCXK(沪)2018-0006。实验动物饲养于浙江中医药大学动物实验中心屏障环境中，合格证号：SYXK(浙)2018-0012；饲喂SPF级饲料，自由饮食，玉米芯垫料。

1.2 药物 黄柏防己颗粒(生药含量1∶1)、覆盆子颗粒、黄精颗粒均由浙江景岳堂公司生产。黄柏防己颗粒配成溶液，浓度为1.5 g/mL。

1.3 小鼠肾阴阳两虚模型建立 70只SPF级健康雄性BALB/c小鼠适应性喂养7 d后，称体质量标记(3%～5%苦味酸溶液)，随机选取10只小鼠正常饲养为正常组。其余60只小鼠予以造模药物1.5 g/mL黄柏防己颗粒溶液灌胃0.5 mL/d，灌胃期间每日上午8点至10点、下午2点至4点对小鼠的精神状态、毛发松散程度、活动程度、饮水和进食等一般状态进行观察。以《中医诊断学》[4]肾阴阳两虚证候标准为基础，参照李慧[5]研究结果，自拟小鼠肾阴阳两虚模型判定标准。主症：①饮水增多；②精神不振；③身体消瘦；④生长迟缓蜷缩；⑤尿量增多。次症：①安静时少动，灌药时挣扎微弱；②体毛无光泽、竖立、打绺；③拉尾排便、排尿、遗精、便溏；④舌红。小鼠肾阴阳两虚模型判定标准：同时具备3项以上主症者,或 2项主症 (后3 项必须占1项) +3项次症者可诊断。灌胃2周后，60只造模小鼠死亡6只，余54只均造模成功。

1.4 药物治疗 从造模成功的54只小鼠中随机挑选50只小鼠分成实验组1、实验组2、实验组3、实验组4、对照组，每组10只。实验组小鼠以覆盆子颗粒、黄精颗粒溶液灌胃0.5 mL/d，灌胃21 d。实验组1(覆盆子∶黄精=1∶1)，实验组2(覆盆子∶黄精=1∶2)，实验组3(覆盆子∶黄精=2∶1)，实验组4(覆盆子∶黄精=5∶1)。对照组和正常组小鼠均以生理盐水灌胃0.5 mL/d，灌胃21 d。治疗期间无小鼠死亡，结束后称体质量，观察症状。

1.5 观察指标

1.5.1 行为学指标 对行为学指标采用分级计分法，主、次行为分4级( 正常、轻、中、重) 计分,主要行为分别计 0、2、4、6 分,次要行为分别计 0、1、2、3 分(见表1)。疗效评定采用尼莫地平法: [( 治疗前积分-治疗后积分) ÷治疗前积分]×100%。每日上午8点至10点、下午2点至4点对小鼠进行一般状态观察。记录小鼠的毛色(光泽、枯黄)、毛态(毛少、竖立、柔顺)、精神(萎靡、倦怠、嗜卧)、体形(消瘦、肥胖、正常)、饮食、饮水、粪质(干燥、稀湿、正常)、粪色(黑、黄、正常)、拉尾排便(-、+)、拉尾排尿(-、+)、运动(少动、灵活)、抵抗(剧烈、微弱)、呼吸频率、舌质(淡红、暗红、紫、嫩、癖斑、少津)、舌苔(薄、少、无)、尾色(粉红、淡白、暗)、尾温(正常、热、凉)。

表1 行为学指标量化评分表Table 1 Quantitative scoring table of behavioral indicators

1.5.2 血磷、血钙检测 小鼠眶静脉取血，收集血浆。采用日立3100全自动化分析仪检测血磷、血钙水平。

1.5.3 肾脏干湿度检测 拉尾处死小鼠，取出双肾，观察肾脏是否受损并称取湿质量。肾脏置入70℃恒温烘干24 h，称取干质量。

1.6 统计学分析 采用SPSS23.0软件进行统计，2组间计量资料比较采用t检验，3组及3组以上组间计量资料比较采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 行为观察 治疗前，各实验组和对照组小鼠的行为学积分均高于正常组，差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后，实验组2与对照组小鼠的行为学积分均高于正常组，实验组1、实验组3、实验组4和正常组小鼠的行为指标积分均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。治疗后，各实验组小鼠阴阳两虚症状均有改善：体毛渐趋光泽、柔顺，体形渐趋正常，粪质、粪色渐趋正常，拉尾排便、排尿减少，运动灵活，舌质淡红，舌苔薄，尾色粉红，尾温正常。

表2 小鼠行为学积分比较 (分)Table 2 Comparison of behavioral scores in mice (points)

2.2 血磷和血钙水平 治疗前，各实验组和对照组的血钙水平均低于正常组，各实验组和对照组的血磷水平均低于正常组，差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后，对照组和各实验组血钙水平均增高、血磷水平均下降，差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后，各实验组和对照组的血钙水平均高于正常组，实验组4的血钙水平高于对照组，正常组、实验组2、实验组4的血磷水平均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 小鼠血磷和血钙水平比较Table 3 Comparison of blood phosphorus and blood calcium levels in mice

2.3 肾脏干湿质量差值 正常组肾脏干湿质量差值为(0.341 8±0.021 9)g，对照组为(0.331 0±0.028 9)g，实验组1为(0.224 3±0.015 5)g，实验组2为(0.321 9±0.032 9)g，实验组3为(0.276 0±0.017 6)g，实验组4为(0.266 1±0.026 2)g。单因素ANOVA检验结果显示，各组的肾干湿度差值比较有统计学意义(F=28.153，P<0.001)。实验组1、实验组3、实验组4与正常组和对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

《素问·阴阳应象大论》云：“阴阳者，天地之道也，万物之纲纪，变化之父母，生杀之本始，神明之府也”。阴阳为人体之本，阴阳两虚是阴阳互根互用关系失调所呈现出的一种病理变化，肾为先天之本，为全身阴阳之本，所谓“五脏之阴气，非此不能滋；五脏之阳气，非此不能发”。肾阴阳两虚临床主要表现为畏寒肢冷、肌瘦乏力、肢体酸疼且沉重、面足浮肿、口渴多饮、咽干舌燥、面白无华、阳瘘早泄、小便清长、夜尿频多、大便溏薄、舌淡红胖嫩、苔薄白或白腻、脉沉细或沉迟无力等症状，严重的甚至影响人们的日常生活。

本研究采用防己黄柏颗粒对正常小鼠进行14 d造模干预，经行为学积分表评分，符合肾阴阳两虚症状。予以不同配比的覆盆子黄精颗粒剂干预治疗21 d。治疗后，实验组1、实验组3、实验组4小鼠的行为指标积分均明显低于对照组，提示覆盆子黄精颗粒除配比为2∶1外，均能显著改善小鼠行为学。为进一步探讨覆盆子黄精颗粒对模型小鼠体内微量元素代谢的影响，本研究对治疗前后模型小鼠的血钙、血磷水平进行检测，治疗前的阴阳两虚模型小鼠表现为“低钙高磷”状态，与吴欣莉等[6]认为肾阴阳两虚证存在低钙高磷状态相一致。治疗后，实验组4的血钙水平明显高于对照组，实验组2、实验组4的血磷水平明显低于对照组，提示实验组4(覆盆子∶黄精=5∶1)对血钙、血磷的代谢影响最大，表明覆盆子可以促进机体对钙离子、磷离子的吸收[7]，可显著改善“肾阴阳两虚证低钙高磷”状态，为机体阴阳平衡提供客观物质基础。

综上所述，覆盆子黄精颗粒比例为5∶1时对肾阴阳两虚模型小鼠行为学、肾干湿度、机体微量元素的疗效最为显著，在后续研究中需进一步研究药食同源食品改善临床症状虚实状态的最佳配比，探寻中医证候与客观物质间的相关性。