低水平HBsAg血清学模式及其临床价值*

安 哲，屈 梦，卢 洁，张 婷，秦瑞鸿，董 炜

西安交通大学第二附属医院检验科，陕西西安 710004

定量检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)对乙型肝炎病毒(HBV)感染者具有诊断、疗效监控、预后判断等临床价值[1-2]。HBsAg低水平(HBsAg<100.00 IU/mL)时，发生HBsAg血清学免疫应答的概率可达52%[3]。因此，HBsAg低水平对慢性HBV感染者预后判断具有重要意义。本文主要从临床实验室角度对HBsAg低水平时HBV血清标志物的变化进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2019年1—12月在西安交通大学第二附属医院临床实验室进行HBV-M定量检测且HBsAg≥0.05 IU/mL的阳性标本9 972例为研究对象。

1.2仪器与试剂 所有标本均为空腹采集外周静脉血，3 500 r/min离心分离血清，当日或次日完成检测。HBV-M定量检测试剂盒(CMIA)购自美国雅培公司。检测仪器采用美国雅培公司的Alinity化学发光免疫分析仪。HBV DNA检测采用PE5700核酸扩增仪，试剂采用中山大学达安基因股份有限公司生产的HBV核酸定量检测试剂盒；高速离心机采用上海安亭科学仪器厂生产的高速冷冻台式离心机(型号TGL-16G)。

1.3方法 采用化学发光法检测HBV-M，PCR法检测HBV DNA。初检HBsAg<0.50 IU/mL时，对标本进行高速离心后复检，以复检结果为最终结果。HBV-M的阳性判断标准：HBsAg≥0.05 IU/mL，抗HBs≥10.0 mIU/mL，HBeAg≥1.0 S/CO，抗HBe≤1.0 S/CO，抗HBc≥1.0 S/CO。模式的表达采用惯用模式：即以数字1、2、3、4、5分别代表HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc，模式名称以阳性结果所对应的数字进行描述，如单独抗HBs阳性模式描述为单“2”模式。以HBsAg<100.00 IU/mL(2 log IU/mL)为低水平，分为HBsAg<0 log IU/mL、0～<1 log IU/mL、1～<2 log IU/mL 3个亚组；以HBsAg≥100.00 IU/mL(2 log IU/mL)为高水平，分为2～<3 log IU/mL、3～<4 log IU/mL、≥4 log IU/mL 3个亚组。

1.4统计学处理 所有数据采用SPSS16.0进行统计学分析，计数资料以率或构成比(%)表示，不同标本率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HBsAg低水平标本的HBV-M模式 9 972例HBsAg阳性标本中，HBsAg高水平(≥2 log IU/mL)8 021例，占80.44%；HBsAg低水平(<2 log IU/mL)1 951例，占19.56%。1 951例HBsAg低水平标本检出HBV-M模式11种；各模式及其构成比见图1。

图1 HBsAg低水平标本的HBV-M模式

2.2HBsAg不同水平组的HBV-M表达结果分析 HBsAg低水平组标本抗HBc阴性率为0.82%(16/1 951)，HBeAg阳性率为6.00%(117/1 951)，抗HBs阳性率为8.97%(175/1 951)；HBsAg高水平组标本抗HBc阴性率为0.37%(30/8 021)，HBeAg阳性率为34.42%(2 761/8 021)，抗HBs阳性率为2.29%(184/8 021)。两组HBV-M表达比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 HBsAg不同水平组HBV-M表达的差异[n(%)]

按HBsAg水平由低到高，6个亚组的抗HBc阴性率分别为3.69%、0.21%、0.18%、0.08%、0.12%、1.70%，在低水平组呈下降趋势，在高水平组呈增高趋势，见图2。6个亚组的HBeAg阳性率分别为2.56%、5.10%、7.45%、18.12%、32.67%、70.41%，呈逐渐升高趋势，见图3。6个亚组的抗HBs阳性率分别为13.35%、11.68%、6.47%、3.10%、2.09%、1.40%，呈逐渐下降趋势，见图4。

2.3HBsAg低水平时抗HBs和HBeAg之间的关系 比较亚组内不同HBeAg水平抗HBs阳性率，<0 log IU/mL、0～<1 log IU/mL、1～<2 log IU/mL、2～<3 log IU/mL、3～<4 log IU/mL 5个亚组内不同HBeAg水平抗HBs阳性率差异有统计学意义(P<0.05)；≥4.00 log IU/mL亚组内不同HBeAg水平抗HBs阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.4HBsAg阳性且抗HBc阴性病例的HBV-M特征 HBsAg阳性且抗HBc阴性病例46例，其中HBsAg低水平组16例，HBsAg高水平组30例。16例HBsAg低水平标本中“13”模式1例，其HBsAg为54.16 IU/mL；“1”模式11例，“12”模式4例；HBV DNA阳性1例(6.25%)。30例HBsAg高水平标本中“13”模式29例，“14”模式1例；HBV DNA阳性30例(100.00%)。两组HBV DNA阳性率比较，差异有统计学意义(χ2=-6.39,P=0.000)。

图2 不同HBsAg水平的抗HBc阴性率

图3 不同HBsAg水平的HBeAg阳性率

图4 不同HBsAg水平的抗HBs阳性率

表2 同一HBsAg水平组不同HBeAg水平对抗HBs阳性率的影响

3 讨 论

慢性乙型肝炎是威胁人类健康的一种常见传染性疾病，据世界卫生组织统计，全球目前约有2.5亿HBV感染者，我国是HBV高流行区，约有9 000多万HBV感染者，其中2 000万为慢性乙型肝炎患者[2]。

HBsAg是HBV最重要的血清标志物。目前，以化学发光发原理为基础的自动化免疫分析仪可以实现HBsAg定量检测。HBsAg<100.00 IU/mL判断为HBsAg低水平，是基于以HBV DNA<1×102IU/mL且HBsAg<100.00 IU/mL为慢性HBsAg携带者的诊断临界值时，具有良好的阴性预测值，3年随访，发生HBsAg血清学免疫应答的概率可达52%[3]。但临床发现少数HBsAg低水平的HBV感染者表现出明显的病毒复制状态。以S基因突变逃逸为最主要原因的HBsAg/抗HBs共存现象也多见于HBsAg低水平特别是极低水平的HBV感染者[4]。本研究旨在探讨HBV感染者HBsAg低水平的血清学模式和临床价值。

本研究中HBsAg低水平标本1 951例，占19.56%；HBsAg低水平检出HBV-M模式11种，其中检出率≥1.00%的有5种，依次为“145”模式(76.47%)、“15”模式(9.99%)、“1245”模式(6.00%)、“135”模式(3.28%)、“1235”模式(1.85%)，其余6种模式共计2.41%。

抗HBc是HBV感染的一个重要指标，大多数现症HBV感染者和既往感染者均呈抗HBc阳性，极少数HBV早期感染者和免疫缺陷患者可能出现HBsAg阳性而抗HBc阴性情况。研究发现,HBsAg低水平组的抗HBc阴性率明显高于HBsAg低水平组的抗HBc阴性率(0.82%vs.0.37%)，HBsAg高水平组的抗HBc阴性率随HBsAg水平增高而增高，但在HBsAg低水平病例中，抗HBc阴性率随HBsAg水平降低而增高；探索其中原因可能与下列因素有关：(1)HBV早期感染大多呈“13”模式且HBsAg多为高水平，此时抗HBc尚未产生或水平较低尚未达到检测限；(2)HBsAg低水平时抗HBc阴性可能与HBsAg假阳性有关[5]。

HBeAg可以间接反映HBV DNA的复制水平。HBeAg阳性率随HBsAg水平下降而下降，在HBsAg低水平组明显低于在HBsAg高水平组(6.00%vs.34.42%)。无论HBsAg多低都存在HBeAg阳性病例；与之密切关联的是抗HBs水平，在HBsAg低水平病例中抗HBs≥100.00 mIU/mL多提示发生HBV-S区突变或表型变异[4,6-7]。本次研究显示，HBsAg低水平组抗HBs阳性率明显高于HBsAg高水平组的抗HBs阳性率(8.97%vs.2.29%),且在HBsAg同一水平组内，HBeAg阳性病例的抗HBs阳性率明显高于HBeAg阴性病例的抗HBs阳性率。在HBsAg低水平时，HBeAg阳性病例的抗HBs阳性率高达66.67%。

HBV DNA是反映病毒复制的直接指标，检测抗HBc阴性病例的HBV DNA水平，结果显示HBsAg高水平组HBV DNA阳性率明显高于HBsAg低水平组。当抗HBc阴性时HBsAg低水平应更多考虑HBsAg假阳性问题，如设立灰区[8-9]，或者对初检HBsAg低水平可通过高速离心降低假阳性率[10]，也可采用第2种检测平台或检测试剂进行复检[11]。当抗HBc阳性时HBsAg低水平除获得有效治疗患者外，应考虑HBV-S区突变或表型变异[12-13]。