饲料中蛋白质水平对澳洲淡水龙虾生长、肉质及免疫力的影响

张宝龙，曲木，赵子续，唐子鹏，侯树旺，翟胜利

（天津现代晨辉科技集团有限公司 天津市水族动物功能性饲料企业重点实验室，天津 301800）

澳洲淡水龙虾（Cherax quadricarinatus）是一种原产于澳大利亚外形酷似龙虾、个体较大的淡水养殖经济品种，因其营养丰富、肉质细腻滑脆、味道鲜美香甜、风味独特等优势成为目前世界上的名贵经济虾种之一[1]。王广军等人[2]发现澳洲淡水龙虾的出肉率及肌肉中所含的氨基酸及Ca、Fe等元素显著高于克氏原螯虾。目前，澳洲淡水龙虾在我国的养殖范围已经逐步扩大，在其养殖成本中，饲料占据将近50%。饲料中适当的蛋白含量对水产动物可以起到一定的促进作用，盲目升高蛋白含量会造成饲料成本的上升，对养殖动物的生长起抑制作用，同时也会加大养殖水体的环境负担；而饲料蛋白质含量过低，会使水产动物生长缓慢、抗病力差，进而延误生产时机[3]。因此，确定澳洲淡水龙虾饲料中适宜的蛋白水平对研制低成本、高营养澳洲淡水龙虾饲料具有一定的参考意义。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

本试验所用指标测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

GZX-9070MBE电热恒温鼓风干燥箱，上海博迅实业有限公司；HH-2水浴锅，上海力辰仪器科技有限公司；HKL-220环模颗粒机，滕州三浓机械厂；JP-020超声波清洗器，深圳市洁盟清洗设备有限公司；JW-3021HR低温高速离心机，安徽嘉文仪器装备有限公司；WH-2微型旋涡混合仪，上海沪西分析仪器厂有限公司；FSH-2A可调高速均质机，青岛致仕工业技术有限公司；UV-1800紫外分光光度计，翱艺仪器(上海)有限公司；BSM电子分析天平，上海卓精电子科技有限公司；SKY全波长酶标仪，Thermo。

1.2 饲料配方

以全虾粉10.00%、豆粕23.00%、啤酒酵母4.00%、花生粕8.00%、豆油1.50%、鱼油1.50%、大豆卵磷脂0.50%、胆固醇0.50%、膨润土1.00%、乳酸钙2.00%、粘合剂0.50%、氯化胆碱0.50%、1.00%虾用预混料1.00%、4.00%虾用预混料4.00%为不变量，通过改变鱼粉、面粉、苜蓿草粉、细麸皮、米糠的含量来配置蛋白含量（CP%）分别为29.48%、30.50%、32.61%、34.64%、36.70%、38.75%、40.80%的饲料配方（表1），用制粒机制成配合饲料，在阴凉干燥处风干后，测定其营养成分。

表1 不同蛋白含量的饲料配方及饲料营养成分

1.3 试验材料与养殖管理

试验所用虾购自苏州傲龙生态水产养殖有限公司，每个处理3个平行，每个平行放置70尾虾，试验虾养殖于水泥池中（水泥池面积2 m×2 m）。试验初期，称其总重，选择20尾虾测定其腹长、全长、体长、体宽、体重、螯足长等指标。每天记录投喂量用于生长指标计算。每隔3 d测定1次水质，养殖过程中水体氨氮含量≤0.1 mg/L，亚硝酸盐含量≤0.2 mg/L，溶解氧含量为10 mg/L，pH为8.4，总硬度为120 mg/L。

1.4 指标测定

1.4.1 样品采集

养殖试验结束后，每个池子分别取15尾虾，取其血浆，保存于2 mL离心管中，之后取其肝胰脏、肌肉组织，将组织（g）、0.85%生理盐水（mL）按1∶4的比例用匀浆机（FSH-2A）匀浆，之后在4 ℃、4 000 r/min条件下离心15 min，然后取上清制成20%匀浆液，保存于-20 ℃冰箱中待测。

1.4.2 指标测定

1.4.2.1 生长指标测定

分别于养殖初始和养殖56 d用数显游标卡尺和直尺测定龙虾的腹长、全长、体长、体宽及螯足长，并根据公式（1）～（4）计算增重率（WGR）、特定生长率（SGR）、饵料系数（FCR）以及蛋白质效率（PER）。

式（1）～（4）中，Wt为最终体重，g；W0为初始体重，g；t为试验天数，d；F为饲料摄入量干重，g；CP为饲料粗蛋白质含量，%。

1.4.2.2 肉质测定

（1）肌肉滴水损失率测定

取澳洲淡水龙虾肌肉，干纱布擦干表面水分，称重记录，放于10 mL离心管中，离心管底部放有适当的吸水纸，在4 ℃、4 000 r/min条件下离心20 min后取出，擦干背肌表面水分，称重记录，并根据公式（5）计算滴水损失率（DL）。

（2）肌肉蒸煮损失率测定

取澳洲淡水龙虾肌肉，干纱布擦干表面水分，称重记录，装入密封袋中，放入70 ℃的恒温水浴锅中蒸煮15 min，取出冷却至室温，擦干背部肌肉表面水分，称重记录，根据公式（6）计算蒸煮损失率（CL）。

（3）水分

剪取澳洲淡水龙虾肌肉1 g左右，用吸水纸吸干表面水分，将肌肉放入水分皿中，于60 ℃电热鼓风干燥箱中烘干至恒重，根据公式（7）计算水分含量。

式（7）中，M1为烘干前水分皿及肌肉总质量，g；M2为烘干后水分皿及肌肉总质量，g；M0：水分皿质量，g。

（4）总氨基酸含量测定

肌肉总氨基酸含量采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。

1.4.2.3 免疫指标测定

养殖试验结束后，测定澳洲淡水龙虾血浆及组织中酸性磷酸酶（Acid Phosphatase，ACP）、过氧化氢酶（Catalase，CAT）、谷草转氨酶（Glutamic Oxalacetic Transaminase，GOT）、谷丙转氨酶（Glutamic-Pyruvic Transaminase，GPT）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathion Peroxidase，GSH-PX）、谷胱甘肽-S转移酶（Glutathione S-Transferase，GSHST）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）的酶活以及丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量、总抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity，T-AOC）。血浆室温融化后直接测定，组织根据试剂盒需要在20%匀浆液基础上进行稀释。

2 结果与分析

2.1 饲料蛋白水平对生长性能的影响

由表2可知，澳洲淡水龙虾的增重率及特定生长率在饲料蛋白质含量为34.64%时最高且显著高于其他各组（P＜0.05）；蛋白质效率随饲料蛋白质水平的提高呈先上升后下降的趋势，最大值仍出现在34.64%水平组，与29.48%、32.61%两组差异不显著（P＞0.05）；饵料系数变化趋势与其他生长指标相反，呈先下降后上升趋势，最低值出现在34.64%水平组，与29.48%、32.61%、40.80%三组无显著差异（P＞0.05）。

表2 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾生长性能的影响

由表3可知，不同饲料蛋白质水平下，澳洲淡水龙虾的体长及腰宽无显著变化（P＞0.05）；全长、螯长最大值均出现在34.64%蛋白组，分别显著高于30.50%、38.75%蛋白组（P＜0.05），但与其他各组无显著差异（P＞0.05）；腹长最大值出现在34.64%蛋白组，显著高于30.50%、38.75%蛋白组（P＜0.05）；澳洲淡水龙虾体重在饲料蛋白含量为34.64%时最高，且显著高于其他蛋白组（P＜0.05）。

表3 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾形体指标的影响

2.2 饲料蛋白水平对肌肉成分及出肉率的影响

由下表知：饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾肌肉蒸煮损失率无显著影响（P＞0.05），最低值出现在34.64%蛋白组，且在同组，肌肉滴水损失率也达到最低，显著低于29.48%蛋白组（P＜0.05）。肌肉水分在34.64%蛋白组最低，与30.50%、36.70%、38.75%蛋白组差异不显著（P＞0.05），但显著低于其他组（P＜0.05）；出肉率及肌肉中总氨基酸含量最大值均出现在34.64%蛋白组，与32.61%蛋白组没有显著差异（P＞0.05）。

表4 饲料蛋白水平对淡水澳洲龙虾肉质及出肉率的影响

2.3 饲料蛋白水平对组织和血浆中免疫力的影响

2.3.1 ACP活性

由表5可知，澳洲淡水龙虾组织及血浆中ACP活性最小值均出现在34.64%蛋白组。肌肉中34.64%蛋白组与29.48%、30.50%、32.61%蛋白组无显著差异（P＞0.05），但显著低于其他组（P＜0.05）；肝脏中34.64%蛋白组显著低于其他各组（P＜0.05）；血浆中34.64%蛋白组与29.48%、32.61%蛋白组差异不显著（P＞0.05）。

表5 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾组织和血浆中ACP活性的影响

2.3.2 CAT活性

由表6可知，澳洲淡水龙虾组织及血浆中CAT活性随饲料蛋白质含量的上升呈先升高再降低趋势，最大值出现在34.64%蛋白组。肌肉中34.64%蛋白组与32.61%蛋白组差异不显著（P＞0.05），但显著高于其他组（P＜0.05）；肝脏、血浆中34.64%蛋白组显著高于其他组（P＜0.05）。

表6 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾组织和血浆中CAT活性的影响

2.3.3 GOT、GPT活性

由表7可知，澳洲淡水龙虾组织及血浆中GOT、GPT活性最小值均出现在34.64%蛋白组。肝脏中34.64%蛋白组GOT、GPT活性均显著低于36.70%、38.75%蛋白组（P＜0.05），但与其他组无显著差异（P＞0.05）。血浆中34.64%蛋白组GOT活性与29.48%、30.50%、32.61%蛋白组差异不显著（P＞0.05），GPT活性与29.48%、36.70%、38.75%蛋白质组无显著差异（P＞0.05），但显著低于其他各组（P＜0.05）。

表7 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾组织和血浆中GOT、GPT活性的影响

2.3.4 GSH-PX活性

由表8可知，34.64%蛋白组澳洲淡水龙虾肌肉及肝脏中GSH-PX与32.61%蛋白组差异不显著（P＞0.05）；血浆中34.64%蛋白组与32.61%、29.48%蛋白组差异不显著（P＞0.05），但显著高于其他组（P＜0.05）。

表8 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾组织和血浆中GSH-PX活性的影响

2.3.5 GSH-ST活性

由表9可知，澳洲淡水龙虾组织和血浆中GSH-ST最大值出现在34.64%蛋白组。肌肉及肝脏中34.64%蛋白组与36.70%蛋白组差异不显著（P＞0.05），但显著高于其他组（P＜0.05）。饲料蛋白水平的变化对血浆中GSH-ST活性无显著影响（P＞0.05）。

表9 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾组织和血浆中GSH-ST活性的影响

2.3.6 MDA含量

由表10可知，澳洲淡水龙虾组织和血浆中MDA最小值出现在34.64%蛋白组。肌肉中34.64%蛋白组显著低于其他组（P＜0.05）。肝脏中34.64%蛋白组与32.61%蛋白组差异不显著（P＞0.05），但显著低于其他组（P＜0.05）。血浆中34.64%蛋白组显著低于其他组（P＜0.05）。

表10 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾组织和血浆中MDA含量的影响

2.3.7 SOD活性

由表11可知，澳洲淡水龙虾肌肉中34.64%蛋白组SOD活性显著高于其他各组（P＜0.05）；肝脏中34.64%蛋白组与29.48%、32.61%蛋白组无显著差异（P＞0.05）；血浆中34.64%蛋白组显著高于36.70%、38.75%组（P＜0.05），与其他饲料组差异不显著（P＞0.05）。

表11 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾组织和血浆中SOD活性的影响

2.3.8 T-AOC含量

由表12可知，澳洲淡水龙虾肌肉、肝脏及血浆中T-AOC最大值均出现在34.64%蛋白组，32.61%蛋白组无显著差异（P＞0.05），但显著高于其他饲料组组（P＜0.05）。

表12 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾组织和血浆中T-AOC的影响

2.4 讨论

2.4.1 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾生长性能的影响

生长性能是衡量经济水产动物可获得价值的重要指标，本试验测定了澳洲淡水龙虾生长指标及体长、体宽等形体指标，发现饲料蛋白水平会显著影响其生长，当蛋白含量为34.64%时生长指标达到最佳，这与张佳润等人[4]和姜松等人[5]对斑节对虾及苟妮娜等人[6]对淡水养殖凡纳滨对虾的研究结果一致。刘永涛等[7]研究发现在稻田养虾模式下用添加复方黄芪多糖蛋白质含量≥26%的饲料投喂克氏原螯虾可得到较好的促生长效果。卢耀鹏等[8]研究发现红螯螯虾幼虾饲料最适宜的蛋白质水平为36.98%。索帅等[9]研究发现脊尾白虾饲料蛋白水平为39%、脂肪水平为5%时相对增重率较高，且饵料系数最低，这与本试验结果略有不同，可能是因为虾的规格不同导致，幼虾时期需要较高的蛋白含量来供给自身营养需求，但饲料蛋白水平的升高会提升虾的生长性能这点结论是一致的。

2.4.2 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾肉质的影响

滴水损失率、蒸煮损失率及总氨基酸含量是衡量可食动物肉质是否鲜嫩、风味好坏的重要指标，出肉率可用来衡量其经济价值。凌俊等[10]认为饲料的蛋白水平对克氏原螯虾的出肉率没有显著性影响，倪静静等[11]比较了不同的饲料对克氏原螯虾肉质的影响，结果发现不同的饲料对其出肉率和滴水损失率有显著影响，但对蒸煮损失率没有显著影响。本试验结果表明，饲料蛋白含量为34.64%时澳洲淡水龙虾的蒸煮损失率、滴水损失率和肌肉水分显著降低，出肉率最高，这与吴东等[12]研究结果相似。

2.4.3 饲料蛋白水平对澳洲淡水龙虾免疫力的影响

本试验测定了澳洲淡水龙虾SOD、CAT、MDA、T-AOC、GOT、GPT、ACP、GSH-PX、GSH-ST 九个免疫相关指标，结果表明饲料蛋白水平在34.64%时各组织及血浆中SOD、CAT、T-AOC、GSH-PX、GSH-ST活性显著升高，而MDA含量及GOT、GPT、ACP活性有所降低。范陈伟等[13]对脊尾白虾的研究结果表明，在水泥池养殖条件下饲喂34%蛋白水平饲料的白虾GOT活力最低而SOD的活力显著升高，范斌[14]研究发现日本沼虾的SOD、CAT活性随所投喂的饲料蛋白含量的升高而上升，最适蛋白水平为48%。这与本研究结果基本相同，但目前针对饲料蛋白水平对虾类免疫力影响的研究较少，其更多作用机理仍需进一步研究。

3 结论

综合澳洲淡水龙虾生长、肉质及免疫相关指标，水泥池养殖澳洲淡水龙虾（养殖密度为17.5尾/m2）时，饲料中最适宜的蛋白水平为34.64%。