口腔鳞状细胞癌患者唾液中癌胚抗原、过氧化氢酶及细胞角质蛋白19片段抗原21-1的表达水平及临床意义

李永华，郭静华，王想

驻马店市中心医院口腔科，河南 驻马店 463000

口腔癌是位于头颈部的恶性肿瘤，主要组织类型是鳞状细胞癌，具有复发率高、预后差、生存率低的特点[1]。在口腔鳞状细胞癌早期，肿瘤细胞浸润周围组织并发生扩散，进入晚期使得临床治疗困难，因此早期诊断和治疗尤为重要[2]。肿瘤标志物检测在口腔恶性肿瘤的辅助诊断中，尤其是在深部肿瘤和肿瘤复发的诊断中具有潜在的临床应用价值[3]。研究发现，唾液中含有多种肿瘤标志物，与其他体液相比，唾液更新速度更快，并且可以在较少干扰因素的情况下及时反映局部环境的变化，具有取样方便、操作简单、可重复采样的特点[4]。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、过氧化氢酶（catalase，CAT）及细胞角质蛋白19片段抗原21-1（cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）是口腔鳞状细胞癌早期检测的标志物[5]。本研究探讨了口腔鳞状细胞癌患者唾液中CEA、CAT、CYFRA21-1表达水平及临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2019年12月于驻马店市中心医院就诊的口腔鳞状细胞癌患者。纳入标准：①经病理学检查确诊为口腔鳞状细胞癌；②未接受过放化疗治疗；③年龄＞18岁。排除标准：①合并其他系统恶性肿瘤；②合并心、肝、肾等重要脏器疾病、免疫系统疾病、血液系统疾病等。依据纳入和排除标准，本研究共纳入84例口腔鳞状细胞癌患者作为口腔鳞状细胞癌组。同时选取口腔良性肿瘤患者50例（牙龈瘤20例，血管瘤30例）和体检健康者50例，分别作为良性肿瘤组和健康对照组。3组研究对象的性别、年龄、体重指数比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）（表1），具有可比性。

表1 3组研究对象的临床特征

1.2 检测方法

收集全部患者清晨空腹状态下4 ml无刺激性混合唾液，取样前不进行局部或全身药物治疗和放疗，收集方法是患者每30 s将唾液吐到收集器中，持续5～10 min，然后立即在4℃条件下3000 r/min离心20 min，提取2 ml上清液，并保存在-80℃低温冰箱中。采用酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunoadsordent assay，ELISA）检测 CEA、CAT和CYFRA21-1水平。检测试剂盒购自天津新传生物技术有限公司，所有操作步骤均严格按照说明书进行。密封袋中取出实验所需板条，空白孔中加入样品或者稀释液，每孔100 μl，检测孔中加入标本，每孔100 μl，36℃条件下孵育60～90 min，磷酸盐缓冲液清洗5次，空白对照孔中加入生物素抗体稀释液 100 μl，检测孔中加入生物素抗体检测液 100 μl，36℃条件下孵育30～60 min，空白对照孔中加入酶结合稀释液100 μl，检测孔中加入酶结合检测液100 μl，磷酸盐缓冲液清洗5次，加入四甲基联苯胺（tetramethylbenzidine，TMB）显色液，避光36℃孵育15 min，加入终止液100 μl，3 min内检测450 nm处的光密度（optical density，OD）值，BioTek酶标仪购自美国伯腾仪器有限公司。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用方差分析，两组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析CEA、CAT及CYFRA21-1对口腔鳞状细胞癌的诊断价值。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组别研究对象唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平的比较

口腔鳞状细胞癌组、良性肿瘤组、健康对照组唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。口腔鳞状细胞癌组、良性肿瘤组患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均高于健康对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；口腔鳞状细胞癌组患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均高于良性肿瘤组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表2）

表2 不同组别研-究对象唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平的比较（±s）

表2 不同组别研-究对象唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平的比较（±s）

注：a与健康对照组比较，P＜0.05；b与良性肿瘤组比较，P＜0.05

组别口腔鳞状细胞癌组（n=84）良性肿瘤组（n=50）健康对照组（n=50）F值P值CEA（ng/ml）45.50±14.43a b 28.39±11.02a 12.80±5.22 20.201 0.000 CAT（U/ml）50.40±11.02a b 42.50±10.04a 30.21±9.88 16.603 0.000 CYFRA21-1（μg/L）60.34±19.29a b 33.31±12.04a 14.50±4.43 17.113 0.000

2.2 不同临床特征口腔鳞状细胞癌患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平的比较

不同性别、年龄、体重指数、分化程度、肿瘤部位的口腔鳞状细胞癌患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；不同临床分期、淋巴结转移情况的口腔鳞状细胞癌患者唾液中CAT水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的口腔鳞状细胞癌患者唾液中CEA水平分别明显高于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（t=2.894、3.971，P＜0.01）；临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的口腔鳞状细胞癌患者唾液中CYFRA21-1水平分别明显高于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（t=5.443、5.024，P＜0.01）。（表3）

表3 不同临床特征口腔鳞状细胞癌患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1的水平（n=84）

2.3 唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平对口腔鳞状细胞癌的诊断价值

唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平诊断口腔鳞状细胞癌的ROC曲线下面积分别为0.790、0.750和0.896，P＜0.05，截断值分别为38.50 ng/ml、46.50 U/ml和 50.20 μg/L，灵敏度分别为 72.20%、64.50%和80.00%，特异度分别为65.50%、61.00%和78.50%。（图1）

图1 唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平诊断口腔鳞状细胞癌的ROC曲线

3 讨论

口腔癌是指发生于口腔黏膜的恶性肿瘤，侵袭性和扩散性强[6]。准确地进行口腔癌早期诊断是提高患者生存率和生活质量的关键。探索新的或更多的标志物对口腔癌的特异性诊断或预后评估具有重要意义。尽管病理学检查是诊断口腔癌的公认金标准，但它是一种有创操作，患者在早期筛查中的依从性不高[7-8]。唾液样品获取简单且无创，可以重复采集。当口腔黏膜发生癌变时，肿瘤部位的组织细胞及其代谢物进入唾液，导致唾液中某些指标发生变化，通过某些方法检测肿瘤患者唾液中相关肿瘤标志物的变化可为口腔鳞状细胞癌的诊断提供依据[9]。

CEA是一种位于细胞表面的糖蛋白，在胎儿早期由胃肠道、肝脏和胰腺合成，成年人消化道上皮组织和肝脏、胰腺也可以合成少量的CEA并将其分泌到消化道中，正常情况下含量较低[10-11]。目前已经有许多关于CEA作为口腔颌面部恶性肿瘤标志物的研究[12]。已有研究发现CEA在头颈部鳞状细胞癌患者的肿瘤组织中高表达。随着检测技术的发展，有关血清和唾液中CEA检测的研究逐渐开展[13-14]。CYFRA21-1是细胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）的可溶性片段，而CK19是构成细胞骨架的酸性肽，在正常情况下，CK19通常以寡聚链的形式出现，含量较少，CYFRA21-1的含量也较低，但口腔黏膜细胞发生癌变时，肿瘤细胞会将大量的CYFRA21-1释放到细胞外，表现为唾液中CYFRA21-1和CK19水平异常增加[15]。肿瘤的发生、发展和转移是一个复杂的过程。研究表明，口腔癌组织中CAT表达的增加和黏附分子表达的减少会导致肿瘤细胞脱落，从而增加唾液中CAT的含量[16]。CAT可以去除体内的活性氧，并在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用[17]。

口腔鳞状细胞癌细胞分泌的肿瘤标志物可直接进入唾液，灵敏度高，肿瘤标志物可从细胞外基质转移至血液或侵入肿瘤周围血管，导致其血清水平发生改变[18-19]。本研究结果显示，口腔鳞状细胞癌组、良性肿瘤组患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均高于健康对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；口腔鳞状细胞癌组患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均高于良性肿瘤组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。表明以上指标在口腔鳞状细胞癌的诊断及良恶性肿瘤的鉴别中具有一定的临床应用价值，可作为辅助诊断和鉴别诊断手段。临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的口腔鳞状细胞癌患者唾液中CEA、CYFRA21-1水平均明显高于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。同时，尽管Ⅲ～Ⅳ期口腔鳞状细胞癌患者唾液中CAT水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者，但差异无统计学意义（P＞0.05），可能由于本研究样本量较小，两者之间的关系需要进一步确认，CAT检测可能对口腔癌具有辅助诊断价值。唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1诊断口腔鳞状细胞癌的灵敏度和特异度均较高，在临床工作中，通过获取唾液并检测肿瘤标志物水平可以为进一步诊断和治疗口腔鳞状细胞癌提供依据。

目前临床研究中尚无特异性口腔鳞状细胞癌标志物，因此筛选具有较高特异度和灵敏度的口腔鳞状细胞癌标志物具有重要意义。本研究通过对唾液中的肿瘤标志物CEA、CAT及CYFRA21-1进行检测，发现其对口腔鳞状细胞癌患者具有早期诊断价值，并分析其与患者临床特征的关系，明确了其在口腔鳞状细胞癌发生和发展的不同阶段具有重要的临床意义。目前，口腔鳞状细胞癌患者唾液中肿瘤标志物变化的机制尚不清楚，需要进行更深入的研究，并在遗传水平上进一步探讨引起这种变化的机制。

综上所述，口腔鳞状细胞癌患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均升高，上述指标对口腔鳞状细胞癌具有一定的诊断价值，CEA和CYFRA21-1水平与患者的临床分期及淋巴结转移情况有关。