β-连环蛋白和CD146在胃癌组织中的表达及临床意义△

谢军，周磊

复旦大学附属华山医院静安分院消化内科，上海 200040

胃癌起源于胃黏膜上皮，是消化道最常见的恶性肿瘤，为多种因素（如遗传因素、饮食因素、幽门螺杆菌感染）作用于胃黏膜致使其病变并逐步演变而来，至2018年全球胃癌发病率居恶性肿瘤第5位，病死率为8.2%，仅次于肺癌、结直肠癌，国内胃癌发病率高居第2位，仅次于肺癌，好发于50岁以上人群，以男性居多[1-3]。目前许多国家已建立胃癌早期筛查、诊断和治疗制度，在一定程度上显著延长了患者的生存期，但依然无法扭转胃癌进展的趋势，胃癌患者常因肿瘤复发和转移而死亡[4-5]。探寻恶性肿瘤标志物或治疗靶点是目前医学界研究的热点，肿瘤标志物或治疗靶点在早期筛查、肿瘤进展评估和治疗方法中发挥了重要作用[6-7]。β-连环蛋白（β-catenin）是一种多功能蛋白，主要介导细胞间黏附和参与基因的表达，广泛分布于内皮细胞、成骨细胞、成纤维细胞等多种类型的细胞内并参与这些细胞的增殖、分化和凋亡等过程[8]。CD146属于免疫球蛋白超家族成员，是一种具有跨膜结构的黏附分子，可参与肿瘤细胞的黏附、转移和新生血管的形成[9]。本研究通过观察β-catenin、CD146在胃癌组织中的表达情况，分析其与胃癌之间的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年10月至2018年10月复旦大学附属华山医院静安分院收治的胃癌患者的病历资料。纳入标准：①符合胃癌的诊断标准[10]；②术前未行放疗、化疗；③组织标本保存完好；④临床资料完整。排除标准：①合并其他胃部疾病；②合并其他恶性肿瘤。根据纳入、排除标准，共纳入108例胃癌患者（胃癌组），男性68例，女性40例；年龄36～68岁，平均（51.97±8.86）岁；取108例胃癌组织标本。另选取40例因胃部疾病就诊的非胃癌患者（对照组），男性25例，女性15例；年龄35～69岁，平均（52.31±9.36）岁；取40例胃组织标本。两组患者年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫组织化学法

采用免疫组织化学法检测胃组织中β-catenin、CD146的表达情况。将筛选入组的石蜡包埋组织标本连续4 μm切片，完成切片后经二甲苯脱蜡处理，梯度酒精水化处理，使用3%过氧化氢消除内源性过氧化酶活性，在柠檬酸钠溶液（pH值为6.0）中进行微波抗原修复，封闭。加入兔抗人β-catenin单克隆抗体、CD146抗体，4℃过夜，磷酸盐缓冲液冲洗2～3次，加入二抗，室温孵育，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色液显色，苏木素复染，脱水，中性树胶封片，显微镜下观察结果。按照免疫组织化学SP法试剂盒说明书由同一病理科人员严格进行操作。

1.3 结果判定

随机取10个高倍视野应用半定量积分法对染色细胞进行判读。β-catenin阳性为细胞膜、细胞质、细胞核出现棕黄色颗粒。阳性细胞比例：1分，0%＜阳性细胞比例≤10%；2分，10%＜阳性细胞比例≤50%；3分，阳性细胞比例＞50%。染色强度：未着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将二者得分相乘计算总积分：0～4分为阴性，＞4分为阳性[11]。CD146为细胞膜或细胞质内出现弥漫性棕黄色颗粒。阳性细胞比例：0分，阳性细胞比例＜5%；1分，5%≤阳性细胞比例＜10%；2分，10%≤阳性细胞比例＜20%；3分，20%≤阳性细胞比例＜50%；4分，阳性细胞比例≥50%。染色强度：未着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分。二者相乘积分≥3分为阳性[12]。

1.4 病历资料收集

收集入组患者临床资料，包括性别、年龄、浸润深度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移等，由专人统计和录入，并核查原始数据。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理，计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；相关分析采用Spearman相关性分析；多因素分析采用Logistic多因素回归分析；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 β-catenin、CD146表达情况的比较

胃癌组组织中β-catenin、CD146阳性表达率均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 两组组织 β-catenin、CD146表达情况的比较[n（%）]

2.2 β-catenin、CD146阳性表达与胃癌的相关性

Spearman相关性分析显示，β-catenin、CD146阳性表达与胃癌的发生均呈正相关（r=0.568、0.587，P＜0.01）。

2.3 不同临床特征胃癌患者的胃癌组织中β-catenin、CD146表达情况的比较

不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况胃癌患者的胃癌组织中β-catenin阳性表达率比较，差异均有统计学意义（χ2=5.334、4.426、4.964，P＜0.05）；不同TNM分期、淋巴结转移情况胃癌患者的胃癌组织中CD146阳性表达率比较，差异均有统计学意义（χ2=5.939、5.791，P＜0.05）。（表2）

表2 不同临床特征胃癌患者的胃癌组织中 β-catenin、CD146的表达情况（n=108）

2.4 β-catenin、CD146阳性表达影响因素的Logistic多因素回归分析

Logistic多因素回归分析显示，低分化，TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期，淋巴结转移均是胃癌患者胃癌组织中β-catenin阳性表达的危险因素（P＜0.05）；TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期和淋巴结转移均是胃癌患者胃癌组织中CD146阳性表达的危险因素（P＜0.05）。（表3、表4）

表3 β-catenin阳性表达影响因素的Logistic多因素回归分析

表4 CD146阳性表达影响因素的Logistic多因素回归分析

3 讨论

恶性肿瘤的分子生物学和基因诊断及治疗是目前研究的热点，并已取得了较大的进展，对临床肿瘤早期诊断、进展评估和治疗意义重大。近年来与胃癌相关的分子靶向治疗研究也取得不少进展，包括表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）通路、抗血管生成、细胞周期素激酶等，与传统手术及放化疗相比，分子靶向治疗具有分子特异性和高选择性，能精准杀伤肿瘤细胞，减少机体正常组织不必要的损伤[13]。在肿瘤细胞侵袭、转移的过程中，细胞黏附分子发挥了重要作用，该类细胞分子可以使细胞间及细胞与细胞外基质发生黏附，并参与细胞识别、细胞活化、细胞增殖与分化、细胞伸展与移动、信号转导等过程。β-catenin基因定位于3p22-3p21.3，含781个氨基酸，是WNT/β-catenin信号通路的关键蛋白，参与由钙黏蛋白介导的上皮细胞黏附和信号转导功能，在正常状态下起着维持机体生理平衡的作用，其异常表达、基因突变、转位与多种肿瘤的发生密切相关[14]。CD146是位于人11号染色体长臂的单拷贝基因，具有细胞骨架重组、局部粘连聚集、细胞形态维持、细胞游走和增殖调控的作用，参与肿瘤转移和肿瘤血管的形成，是继血管内皮生长因子之后的又一种肿瘤血管新靶标。

本文通过数据分析后发现胃癌组患者胃癌组织中β-catenin、CD146阳性表达率均明显高于对照组，Spearman相关性分析显示，β-catenin、CD146阳性表达与胃癌的发生均呈正相关，这表明β-catenin、CD146阳性表达与胃癌的发生密切相关。程玉等[15]研究中表明，β-catenin在正常胃组织中表达定位于细胞膜，被固定在粘合连接处，与α-catenin相互作用调节激动蛋白细胞骨架，释放后被破坏复合体磷酸化降解，但是部分β-catenin可在抗原呈递细胞（antigen-presenting cell，APC）的保护下蓄积，出现细胞质、细胞核或质/核异位表达，在细胞质内WNT信号能阻碍破坏复合体的激活导致β-catenin水平升高，到达细胞核后与转录因子T细胞因子/淋巴增强因子（T cell factor/lymphatic enhancement factor，TCF/LEF）家族结合驱动 WNT/β-catenin 信号通过靶基因转录，该信号通路异常可导致肿瘤的发生。CD146可同时表达于正常细胞和肿瘤细胞，在肿瘤组织中参与新生血管的形成，为肿瘤血管形成和转移提供必要的营养，其机制可能与激活基质金属蛋白酶2有关。胃癌患者胃癌组织中β-catenin阳性表达与胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关，CD146阳性表达与胃癌的TNM分期、淋巴结转移有关。Logistic多因素回归分析显示，低分化，TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期，淋巴结转移均是胃癌患者胃癌组织中β-catenin阳性表达的危险因素；TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期和淋巴结转移均是胃癌患者胃癌组织中CD146阳性表达的危险因素。这与刘婷和齐然[16]、戚红霞和潘晓燕[17]研究结果类似。在尹磊等[18]研究中认为，WNT/β-catenin信号通路活化可促进肿瘤细胞增殖和迁移，导致胃癌进展。CD146能促进肿瘤细胞同型黏附，使肿瘤细胞聚集成簇，利于肿瘤生长，同时还可与表达CD146的肿瘤血管内皮细胞结合，使内皮细胞活化，上调内皮细胞其他黏附分子表达，产生黏附分子介导的级联反应，随后肿瘤细胞通过损伤的血管外渗进而发生转移[19]。

综上所述，β-catenin、CD146阳性表达与胃癌的发生、发展密切相关，可作为胃癌筛查、评估胃癌进展和治疗的靶点。