糖尿病患者血清microRNA-152表达水平与血脂代谢、胰岛素抵抗的相关性*

朱宗国，杨洪余，黄澜，谭旭斌，卞西杰，钟铠璟

（攀枝花市中西医结合医院 检验科，四川 攀枝花617023）

糖尿病是一种以慢性高血糖为主要特征的代谢性疾病，糖尿病患者长期处于高血糖状态，会出现血管受损，进而引发肾脏、心脏、心血管等器官功能退化[1]。随着人们生活水平的提高，饮食搭配不合理，全球糖尿病发病率不断上升，预计2030年患病人数达到5.78 亿[2]。临床上以2 型糖尿病（type-2 diabetic mellitus,T2DM）最常见，占糖尿病患者的85%以上[3]。有研究发现，T2DM 发病因素与机体胰岛素分泌障碍有关，因为肝脏脂质储存异常会导致血糖水平持续升高，引起胰岛细胞功能衰退，最终导致T2DM[4]。也有研究发现，合并高血糖和高血脂的T2DM 患者容易发生动脉粥样硬化或动脉血管破裂[5]。LI 等[6]发现妊娠糖尿病小鼠microRNA-152（miR-152）表达水平较高，猜想miR-152 在T2DM 的发生中可能发挥着潜在作用。重症T2DM 患者容易发生并发症，心脑血管疾病是T2DM 患者最早期的主要并发症，其临床特征是血脂异常[7]。本研究拟探讨miR-152 表达水平及T2DM 患者血脂、血糖代谢情况，并分析miR-152 与T2DM 患者血脂水平的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月—2018年11月在攀枝花市中西医结合医院就诊的血糖异常患者109例，根据2019年美国糖尿病学会（ADA）发布的《糖尿病诊疗指南》[8-9]分为T2DM 前期组（Pre-T2DM 组）45 例和T2DM 组64 例。Pre-T2DM组男性24例，女性21例；年龄42～60 岁，平均（54.80±9.45）岁。T2DM 组男性35 例，女性29例；年龄45岁～64岁，平均（54.10±9.80）岁。另取同期本院门诊部健康体检者70 例为对照组。对照组男性37 例，女性33 例；年龄45～66 岁，平均（54.80±9.30）岁。两组性别构成、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究获得医院伦理委员会批准，符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准①符合2019年ADA 发布的《糖尿病诊疗指南》[8-9]，签署临床研究协议书。②糖尿病前期患者符合空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）6.1～7.0 mmol/L；饭后2 h 血糖≥7.8 mmol/L[10]。

1.2.2 排除标准①服用糖皮质激素类药物者；②心脑血管疾病患者；③严重肝、肾功能障碍患者；④自身免疫疾病患者。

1.3 主要试剂与仪器

胰岛素定量测定试剂盒购自北京源德生物医学工程有限公司，高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol, HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol, LDLC）、总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（Triglyceride, TG）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）试剂盒购自北京九强生物科技有限公司，RNA 提取试剂盒、cDNA 逆转录试剂盒、SYBR Premix Ex TapTM购自日本TaKaRa 公司，e401 电化学发光仪、ACCU-CHEK 血糖仪购自德国罗氏公司，S1000 梯度PCR 仪、CFX96 实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）仪购自德国Bio-Rad 公司。

1.4 标本采集和处理

清晨取所有受试者空腹时静脉血5 ml于试管中，静置10 min，4℃、12 000 r/min 离心8 min。收集上清液，保存于-80℃超低温冰箱，用于后续实验。

1.5 指标检测

所有受试者禁食12 h 后检测生物指标。采用e401 电化学发光仪检测血清空腹胰岛素（fasting insulin, FINS）水平，酶联免疫吸附试验检测TC、TG、HDL-C 和LDL-C 水平，血糖仪检测FBG 水平。采用稳态模型评估稳态胰岛素评价指数（homeostasis modeall assessment of insulin resistance, HOMA-IR）与胰岛β细胞功能指数（homeostasis modeall assessment-β, HOMA-β）。计算公式HOMA-β =20×FINS/（FBG-3.5），HOMA-IR=（FBG×FINS）/22.5。

1.6 qRT-PCR检测血清miR-152

在无菌超净工作台上按照RNA 提取试剂盒操作步骤提取血清总RNA，并参照逆转录试剂盒说明书在梯度PCR 仪器上逆转录RNA，合成cDNA。采用qRT-PCR 检测受试者血清miR-152 相对表达量。qRT-PCR 反应体系25.0 μl：2×SYBR®Premix Ex TapTM12.5 μl，cDNA 底物（50 ng/μl）2.0 μl，正反向引物（10 μmol/L）各1.0 μl，ddH2O 8.5 μl。反应条件：95℃预变性95 s，95℃变性30 s，64℃退火25 s，72℃延伸20 s，共循环39 次。miR-152 及内参U6 的引物序列见表1。

表1 miR-152及内参U6的引物序列

1.7 统计学方法

数据分析采用SPSS 19.0 统计软件。计数资料以构成比表示，比较用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用方差分析，进一步两两比较用SNK- q法；相关性分析用Pearson 法，影响因素的分析采用多因素一般Logistic 回归模型。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组临床资料比较

对照组、Pre-T2DM 组、T2DM 组的性别构成、年龄比较，经χ2检验或单因素方差分析，差异无统计学意义（P＜0.05）。对照组、Pre-T2DM 组、T2DM 组FBG、FINS、TG、TC、HDL-C、LDL-C、HOMA- β、HOMA-IR 比较，经单因素方差分析，差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较，Pre-T2DM组和T2DM组患者血清FBG、FINS、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR 较高（P＜0.05），HDL-C、HOMA-β 较低（P＜0.05）；与Pre-T2DM 组 比较，T2DM 组患者 血清FBG、FINS、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR 较高（P＜0.05），HDL-C、HOMA-β 较低（P＜0.05）。见表2。

表2 3组临床资料比较

2.2 3组血清miR-152相对表达量比较

对照组、Pre-T2DM 组、T2DM 组血清miR-152 相对表达量分别为（0.92±0.16）、（1.18±0.34）和（1.57±0.43），经方差分析，差异有统计学意义（F=67.593，P=0.000）。与对照组相比，Pre-T2DM 组和T2DM 组患者血清miR-152 相对表达量较高（P＜0.05）；与Pre-T2DM 组比较，T2DM 组患者血清miR-152 相对表达量较高（P＜0.05）。

2.3 T2DM患者血清miR-152与血脂水平相关

T2DM 患者血清miR-152 与TG、TC 和LDL-C 水平呈正相关（r=0.844、0.755 和0.833，均P=0.000），与HDL-C 呈负相关（r=-0.655，P=0.000）。见图1。

续表2

图1 T2DM患者血清miR-152与血脂水平的相关性

2.4 T2DM患者血清miR-152与FINS、HOMA-β、HOMA-IR、FBG的相关性

T2DM 患者血清miR-152 与FBG、FINS、HOMAIR 呈正相关（P＜0.05），与HOMA-β 呈负相关（P＜0.05）。见表3。

表3 T2DM患者血清miR-152与FINS、HOMA-β、HOMA-IR、FBG的相关性

2.5 影响糖尿病患者胰岛素抵抗的多因素一般Logistic回归分析结果

将是否发生胰岛素抵抗为因变量，以表1中差异有统计学意义的指标（FBG、FINS、TG、TC、LDL-C、HDL-C、HOMA-β、HOMA-IR、miR-152）为自变量，进行多因素一般Logistic 回归分析，结果显示FBG[=2.305（95% CI：1.369，3.882）]和miR-152 [=2.831（95% CI：1.736，4.618）]升高是影响胰岛素抵抗的危险因素。见表4。

表4 影响糖尿病患者胰岛素抵抗的多因素一般Logistic回归分析参数

3 讨论

目前糖尿病发病机制尚不清楚，也是造成糖尿病难以治愈的原因之一。胰岛素抵抗是糖尿病患者发病的基础。T2DM 与血脂异常、胰岛功能关系密切。丁玉兰等[11]发现与健康人群比较，T2DM患者血清FBG、FINS、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR 较高，血清HDL-C 较低，表明血脂代谢异常可能与T2DM 病情相关，且HOMA-IR 较高可能说明机体细胞葡萄糖利用率较低。孙宇焱等[12]发现T2DM 患者血清TG、TC、LDL-C 水平显著高于健康对照组，HDL-C 水平显著低于健康对照组。也有数据证实，HOMA-IR 较高患者，糖尿病发病风险增加[13]。本研究结果表明，与对照组比较，Pre-T2DM 组和T2DM组患者血清FINS、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR 较高，血清HDL-C、HOMA-β 较低，提示血脂水平和HOMA-IR、HOMA-β 异常，可能与T2DM 发生有关。与Pre-T2DM 组比较，T2DM 组患者血清FINS、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR 较高，HDL-C、HOMA-β 较低，提示T2DM 病情严重程度可能与血脂水平、HOMAIR、HOMA-β 密切相关。

有研究表明，miRNAs 参与糖尿病、高血压和心血管疾病的发生和发展[14]。胰岛激素分泌是维持血糖稳态的核心。有研究发现，处于压力下的胰岛β 细胞将释放更多的胰岛素，以补偿胰岛素抵抗的增加；胰岛β 细胞无法分泌足够的胰岛素会导致T2DM，miRNAs 参与调控胰岛β 细胞，与胰岛β 细胞功能障碍关系密切[15]。ESGUERRA 等[15]发现，高血糖Goto-Kakizaki 大鼠胰岛细胞中miR-152 表达水平较高，miR-152 通过靶向调节编码线粒体多酶复合丙酮酸脱氢酶的Gck基因和Pdha1基因，调节葡萄糖，从而降低葡萄糖对胰岛素分泌的刺激。FU等[16]发现，miR-152 过表达可通过靶向LIN-28 同系物B，调节人视网膜内皮细胞中的血管生成，有助于糖尿病性视网膜病的治疗。ROUX 等[17]发现，T2DM 患者血浆miR-152 表达水平显著低于T2DM 合并糖尿病肾病患者。本研究结果表明，与对照组比较，Pre-T2DM 组和T2DM 组患者血清miR-152 相对表达量较高，提示miR-152 表达异常可能与T2DM 发生相关。T2DM 组患者血清miR-152 相对表达量高于Pre-T2DM 组，提示miR-152 可能与T2DM病情进展有关。进一步研究发现，miR-152 与TG、TC 和LDL-C 呈正相关，与HDL-C 呈负相关，提示miR-152 可能通过调节血脂代谢，影响T2DM 病情发展。血脂存在于血浆中，如果血管血脂含量过高，脂质代谢紊乱，血液黏稠度升高，影响T2DM病情，miR-152 可通过调节WNT 信号通路影响脂质合成代谢[18]。miR-152 与FINS、FBG、HOMA-IR 呈正相关，与HOMA-β 呈负相关，提示miR-152 可能通过影响胰岛素分泌影响T2DM 病情发展。多因素一般Logistic 回归分析结果显示，血清FBG、miR-152 升高是影响胰岛素抵抗的危险因素，提示miR-152 升高可能与糖尿病胰岛素抵抗病程进展有关。

综上所述，T2DM 患者血清miR-152 水平上调，可能通过调节血脂代谢影响T2DM病情发展。本研究将进一步扩大样本量和区域，继续探索miR-152 对T2DM患者血脂代谢的影响。