基于南方医院健康查体人群脂蛋白相关磷脂酶A2活性参考区间的建立

赖可元，黄凯月，周忠江，张 鹏

（1.南方医科大学检验与生物技术学院，广州 510000；2.南方医院输血科，广州 510000；3.南方医院心内科，广州 510000；4.南方医院检验科，广州 510000）

脂蛋白相关磷脂酶A2（lipoprotein-associated ph⁃ospholipase A2，Lp-PLA2）是一个具有重大临床应用价值的崭新生物学标志物。作为冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）和缺血性脑卒中的独立风险因素［1-2］，Lp-PLA2已被国内外多家权威协会与相关组织写入专家建议与临床指南［3-5］，成为临床常规检测的指标。但由于性别与种族等因素的差异，试剂厂商说明书设定的参考区间与文献报道的参考区间并不适用于所有人群。本研究以美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）的C28-A3文件［6］为指导，基于南方医院健康查体人群，建立本实验室健康人群血清Lp-PLA2活性的参考区间，以便于进一步探讨广州地区乃至全国的活性参考区间，同时有益于预测、诊断及监测心脑血管病变。

1 资料和方法

1.1 一般资料

从2019年9月至12月于南方医科大学南方医院体检中心进行体检健康人群中筛选研究对象。筛选标准如下：肝、肾、肺功能指标正常；三系血细胞正常；无高血脂、糖尿病、肿瘤、心脑血管疾病。筛选得417例符合纳入标准的参考个体，其中男性纳入204例，年龄18～75岁；女性纳入213例，年龄18～72岁。再将男性与女性两组参考个体以年龄段（18～29岁、30～39岁、40～49岁、50岁及以上）分别划分为4个亚组进行统计学分析。

1.2 主要仪器与试剂

AU5800型全自动生化分析仪（美国贝克曼库尔特公司），Lp-PLA2速率法试剂盒及其配套校准品、质控品（重庆中元生物技术有限公司）。

1.3 方 法

1.3.1 标本采集 采集对象前一天避免饮酒、剧烈运动、高糖高脂饮食，采血前需空腹8 h或以上。自肘静脉采集静脉血3 mL，于采血1 h以内离心处理（3 000 r/min，离心10 min），分离出500 μL血清于-20 ℃存放。室温复溶至少40 min，轻轻颠倒混匀后完成检测。标本均无溶血、黄疸和脂浊。

1.3.2 检测方法 按照本实验室全自动生化分析仪标准操作规程（SOP）进行操作。检测原理：标本中的Lp-PLA2与试剂中的底物发生水解反应，水解释出的4-硝基苯酚引起激发波长405 nm处吸光度变化，经过测量一定时间内吸光度变化速率，计算标本中Lp-PLA2的活性。

1.4 统计学分析

使用SPSS 21.0软件对数据进行分析处理。以CLSI的C28-A3文件为指导，用Dixon法剔除离群值。用Kolmogorov-Smironov法进行正态性检验，P＞0.05表示数据呈正态分布。用两两独立样本t检验判断不同性别间差异是否存在统计学意义。加以用Z检验法计算判断是否需要以性别分组。用单因素方差分析（ANOVA）分别判断不同性别各年龄段间差异是否存在统计学意义。用百分位数法以P2.5、P97.5为双侧界限建立参考区间。以P＜0.05表示差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 脂蛋白相关磷脂酶A2活性结果离群值检验及正态性检验

本次研究除去离群值后，得参考个体417例。总体数据经检验为正态分布，且男女分组资料均为正态分布（P＞0.05）。

2.2 不同性别人群脂蛋白相关磷脂酶A2活性分布情况

男性Lp-PLA2活性明显高于女性，且两性别组间差异存在统计学意义（t=9.33，P＜0.01）。计算得Z值9.32，Z*值3.96，Z值＞Z*值，应按性别分组建立参考区间，见表1。

表1 男性与女性Lp-PLA2活性分布情况

2.3 不同年龄段人群脂蛋白相关磷脂酶A2活性分布情况及比较

男性组Lp-PLA2活性较稳定，单因素方差分析得男性亚组之间差异不存在统计学意义（F=1.48，P=0.22），因此男性组可合并建立参考区间。而女性Lp-PLA2活性随着年龄增加显著上升，单因素方差分析得女性4个亚组间差异存在统计学意义（F=5.52，P＜0.05）。经两两比较得女性相邻年龄段间（18～29岁与30～39岁、30～39岁与40～49岁、40～49岁与50～72岁）差异无统计学意义（P＞0.05）。但40～72岁女性LP-PLA2活性明显高于18～39岁女性，经t检验得差异存在统计学意义（t=4.07，P＜0.01）。因此女性按年龄分为18～40岁与40～72岁两组建立参考区间。见表2，图1。

表2 不同年龄段血清Lp-PLA2活性分布情况

图1 男性与女性各年龄段血清Lp-PLA2活性结果比较

2.4 建立脂蛋白相关磷脂酶A2活性参考区间

根据C28-A3文件，以百分位数法（P2.5、P97.5为双侧限）得到本实验室健康人群Lp-PLA2活性参考区间：男性为316.03～687.70 U/L，18～39岁与40～72岁女性分别为230.64～574.39 U/L、269.18～637.87 U/L。

3 讨论

Lp-PLA2主要由血管内膜中的巨噬细胞和肥大细胞合成与分泌，与低密度脂蛋白（LDL）或高密度脂蛋白（HDL）结合存在，参与动脉粥样硬化的形成并诱导粥样斑块不稳定性增加［7］。作为目前唯一紧密反映血管内壁炎症的生物标志物，LP-PLA2不仅能预测、诊断心脑血管病变，还可以作为治疗相关疾病的主要靶点［8］，具有极为重要的临床意义。

由此，为了更快速更准确地预测及诊断心血管疾病，建立正确且适用的LP-PLA2活性参考区间不失为研究着手点。参考区间是临床工作者们分析检验结果的重要参考，并以此指导临床工作。但是由于不同种族、年龄、性别、居住地等因素的影响［9］，试剂说明书中的参考区间并不一定适合本地人群。所以各临床实验室不能套用文献或说明书中的参考区间，而是要通过验证后确定参考区间的适用性，更要在条件允许下建立适合于本实验室乃至本地区的参考区间。

本研究于南方医院收集417例符合筛选标准的广州地区健康人群标本，进行数据对比分析后由此建立LP-PLA2活性参考区间。检测结果显示，男性Lp-PLA2活性较稳定，且各年龄段间差异无统计学意义，因此可合并建立参考区间。女性Lp-PLA2活性随着年龄增长呈升高趋势，40～72岁女性Lp-PLA2活性显著高于18～40岁女性。该现象提示LP-PLA2活性可能与内分泌相关，需要进一步研究。根据CLSI C28-A3指导，本次实验建立了本实验室Lp-PLA2活性参考区间：男性为316.03～687.70 U/L，18～39岁、40～72岁女性分别为230.64～574.39U/L与269.18～637.87 U/L。

根据报道，我国多个实验室已调查了适用于当地的LP-PLA2活性参考区间。如上海［10］地区（男性为219～694 U/L，18～49岁、50～89岁女性分别为204～651 U/L、217～686 U/L）、长沙［11］地区（男性为217～761 U/L，18～39岁、40～86岁女性分别为168～566 U/L、为203～702 U/L）。研究结果间存在差异，可能是由于参考个体所处地区不同，由此气候等生活环境不同。也有可能是饮食等生活作息习惯不同的影响，需要进一步探究各地区参考区间能否转换。已有文献表明LP-PLA2活性与人体总能量摄入（如吸烟年限）有关［12］，应作相关研究进一步讨论。根据调查，本研究中纳入的参考个体多为广州地区企业的务工人员，具有一定生活时限性，即使无法确认其籍贯，但能代表本地区的表观健康人群。体检人员应照本院要求进行体检准备，并在采样前进行二次确认，但难以确保所有受检个体严格遵循要求操作，具有局限性。本研究得到的参考区间适用于本实验室，但是否适用于广州地区其余实验室或全国实验室，需要进一步的验证。且由于本研究样本量较少，还应扩大样本收集数量与范围，增加研究数据。

对于无症状高危人群的筛查，目前常用传统危险因素模型进行心脑血管疾病风险预测，但由于个体差异，模型预测存在固有缺陷。在此之上结合LP-PLA2活性检验结果，筛查结果将会更为准确。对于发生了血栓事件的患者，LP-PLA2的检测有助于再发风险评估与危险分级，有利于个性化治疗。