MAP混悬洗涤红细胞质控指标确认*

许 茜，彭 楷，秦伟斐，廖玉英，骆展鹏

(重庆市血液中心，重庆 400052)

洗涤红细胞是采用特定方法将保存期内全血及悬浮红细胞用大量等渗溶液洗涤，去除几乎所有血浆成分和部分非红细胞成分，并将红细胞悬浮在氯化钠注射液或红细胞悬液中所制成的红细胞成分[1]。《血站技术操作规程(2019版)》(简称《规程2019版》)规定，如果是在密闭无菌环境中制备且最后以红细胞保存液混悬，洗涤红细胞保存期与洗涤前红细胞悬液相同。但在前期抽检悬浮红细胞过程中发现，储存期末大多数悬浮红细胞上清液外观均有偏红现象，与悬浮红细胞外观质量标准不符，且红细胞在反复洗涤过程中经多次振摇和离心后储存期损伤必然加剧[2-3]。因此，在满足制备工艺流程要求下确定洗涤红细胞的最佳保存期限及相关质量标准尤为重要。本研究探讨了本中心制备的红细胞保养液(MAP)混悬洗涤红细胞的最佳保存期限及相关质量指标，旨在为MAP混悬洗涤红细胞制备流程的规范化管理提供依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1样本 选取2019年6月至2020年3月本中心制备的MAP混悬洗涤红细胞107袋，其中符合国家质量要求的1 U悬浮红细胞77袋、2 U去白悬浮红细胞30袋作为起始血液。

1.1.2仪器 韦氏比重仪、电子秤、SYSMEXXS-500i全自动血细胞计数仪、OLYMPUS AU400全自动生化仪、瑞尔达4040半自动生化分析仪、BacT/Alert微生物监测系统、BacT/Aler培养瓶等。

1.1.3试剂 SYSMEX血细胞计数仪配套试剂、伊普诺康脑脊液/尿微量蛋白检测试剂、瑞尔达血浆游离血红蛋白试剂等。

1.2方法

1.2.1样本留取 将采集的样本称重后垂直悬挂于4 ℃冰箱中，于第7、14、21、35天分别观察样本外观，同时，留取上清液测定溶血率。第35天检测样本血红蛋白含量、比重、上清蛋白含量，以及进行无菌试验。

1.2.2样本检测

1.2.2.1外观检查 肉眼观察样本色泽是否出现异常、溶血、凝块、气泡等情况。

1.2.2.2比重测定 参照《中华人民共和国药典》四部通则的相对密度测定法，采用韦氏比重秤测定样本比重[4]。

1.2.2.3容量测定 采用电子秤称取样本重量，根据空袋重量和样本比重，按容量计算公式[容量=(血液重量-空袋重量)/血液比重][1]计算样本容量。

1.2.2.4血红蛋白含量测定 采用SYSMEXXS-500i全自动血细胞计数仪测定样本血红蛋白含量。

1.2.2.5上清蛋白含量测定 采用OLYMPUS AU400全自动生化仪检测样本上清蛋白含量。

1.2.2.6溶血率 采用瑞尔达4040半自动生化仪检测样本血浆游离血红蛋白水平，计算溶血率。

1.2.2.7无菌试验 采用BacT/Alert微生物监测系统取样进行需(厌)氧菌培养[1]。

2 结 果

2.1MAP混悬洗涤红细胞比重及容量 107袋MAP混悬洗涤红细胞比重为1.048～1.063，平均1.058±0.003；1 U洗涤红细胞容量为133～160 mL，2 U洗涤红细胞容量为260～312 mL。见表1。

表1 洗涤红细胞容量实测结果

2.2不同储存时间溶血率、外观比较 储存第7天MAP混悬洗涤红细胞上清液均为淡黄透明的；第14天95%的上清液为淡黄透明的；第21天70%的上清液出现轻度溶血；第35天10%的上清液出现轻度溶血，70%的上清液出现中度溶血，20%的上清液出现重度溶血。21 d溶血率明显高于14 d，35 d溶血率明显高于21 d，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同储存时间溶血率、外观比较(n=107)

2.3MAP洗涤红细胞质量检测情况 MAP洗涤红细胞在制备、洗涤中各项指标均符合国家质量标准。见表3。

表3 MAP洗涤红细胞质量检测情况

3 讨 论

洗涤红细胞属常用红细胞制品之一，可降低患者输血后产生的不适应，是提高部分疾病救治率和提高患者生活质量的重要方式。主要用于自身免疫性溶血性贫血、高钾血症、血浆蛋白过敏及阵发性睡眠性血红蛋白尿患者。近年来，临床对洗涤红细胞的需求呈明显增多趋势[5-7]。本中心以往制备洗涤红细胞时使用0.9%氯化钠溶液悬浮，其保存期仅为24 h，医院需提前预约后再进行制备，不能满足临床急诊患者的需求，从而极大地限制了洗涤红细胞的应用。MAP为红细胞代谢提供了所需的能量物质，可使红细胞保存期延长至35 d[8]。利用MAP悬浮，可延长洗涤红细胞保存期，从而建立洗涤红细胞储备库，及时为临床应用提供血液资源，满足患者治疗需求[9]。

《规程2019版》规定，每单位洗涤完毕后的红细胞中可加入MAP 50 mL或适量生理盐水，混匀保存。有研究表明，以MAP作为保养液的洗涤红细胞容量均高于国家标准[10]。若以国家标准作为洗涤红细胞容量的判断依据，不可避免会丢弃一些红细胞，造成血液资源浪费。容量主要与血液比重相关，不同制备工艺流程，其血液比重也会产生差异。为确保洗涤红细胞容量标准相对精确，须测定MAP混悬洗涤红细胞比重。本研究测定的比重为1.048～1.063，平均1.058±0.003，并以此作为洗涤红细胞比重标准，通过计算得出1 U洗涤红细胞容量为133～160 mL，2 U洗涤红细胞容量为260～312 mL，与《全血及成分血质量要求》(GB18469-2012)的洗涤红细胞容量(1 U为112.5～137.5 mL，2 U为225～275 mL)相比，下限增高，容量范围增大，更加适合本中心实际工作。

《规程2019版》规定，如果在密闭无菌环境中制备且最后以红细胞保存液混悬，洗涤红细胞保存期与洗涤前红细胞悬液相同。据文献报道，悬浮红细胞[11]及去白悬浮红细胞[12]在制备时需要进行离心及过滤等处理，与同期全血比较，其溶血率明显偏高。然而，洗涤红细胞在制备过程中还要经过盐水洗涤等机械性损伤，其溶血率变化更加显著。本研究对储存第7、14、21、35天溶血率和其他质控指标进行了检测，结果显示，随着保存时间的延长溶血率逐渐提高，21 d溶血率明显高于14 d，35 d溶血率明显高于21 d，差异均有统计学意义(P<0.05)。储存期第1～14天MAP混悬洗涤红细胞上清液外观均正常；第21天大多数MAP混悬洗涤红细胞上清液呈轻度溶血；第35天大多数MAP混悬洗涤红细胞上清液呈中度溶血。虽然MAP混悬洗涤红细胞在保存期(35 d)内血红蛋白含量、上清蛋白含量、溶血率及无菌试验均符合国家标准，但考虑到血液制品外观要求和血液输注后效果，本中心将MAP混悬洗涤红细胞的最佳保存期确定为14 d，与相关文献报道结果相似[13]。

综上所述，随着近年来输血医疗技术的不断提高，为更好地满足临床需求，本研究按规程及标准要求并结合本中心实际确定了MAP混悬洗涤红细胞的内控质量标准和最佳保存期限。既为工作人员提供了实际可行的数据，又为临床提供了便利。开展MAP混悬洗涤红细胞的制备具有重要的临床意义，值得推广应用。