胸腺基质淋巴细胞生成素在脓毒症患者血清中的表达及临床意义

陈晶莹 罗惠君 何文成 张卫星 罗华 张声

【摘要】 目的：探討胸腺基质淋巴细胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin，TSLP）在脓毒症患者血清中的表达及临床意义。方法：收集2017年1月-2019年10月在本院ICU住院治疗的患者80例为研究对象，共分三组，对照组（C组，n=30），脓毒症组（S组，n=30），脓毒症休克组（SS组，n=20）。采集所有研究对象入ICU后24 h内的临床资料、检查结果及空腹静脉血5 mL，用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清TSLP，IL-6的浓度，分析两者在脓毒症患者中的表达及相关性。结果：与C组

患者相比，S组及SS组患者在性别构成、年龄、APACHEⅡ评分、白细胞计数上差异均无统计学意义（P>0.05）;S组患者血清PCT浓度与C组比较，差异无统计学意义（P>0.05）;SS组患者血清PCT浓度显著高于C组及S组，差异均有统计学意义（P<0.000 1）。S组患者血清TSLP的浓度显著高于C组（P<0.000 1），

IL-6的浓度高于C组（P=0.030）。SS组患者血清TSLP高于S组（P=0.010），IL-6的浓度显著高于S组（P<0.000 1）。S组患者血清中TSLP的浓度与IL-6的浓度呈明显正相关（r=0.61，P<0.01）。结论：TSLP在脓毒症患者血清中表达增高，且与脓毒症的严重程度相关，提示TSLP参与脓毒症的发病机制。

【关键词】 脓毒症 脓毒症休克 胸腺基质淋巴细胞生成素

Expression and Clinical Significance of Thymic Stromal Lymphopoietin in Serum of Patients with Sepsis/CHEN Jingying， LUO Huijun， HE Wencheng， ZHANG Weixing， LUO Hua， ZHANG Sheng. //Medical Innovation of China， 2021， 18（07）： -118

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of thymic stromal Lymphopoietin （TSLP） in serum of patients with sepsis. Method： Eighty patients admitted to ICU of our hospital from January 2017 to October 2019 were selected and divided into three groups： control group （group C， n=30）， septic group （group S， n=30） and septic shock group （group SS， n=20）. Clinical and examination data and 5 mL venous blood of the patients were collected within 24 hours after be admitted to ICU. The serum levels of TSLP and IL-6 were measured by double antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. The expressions and correlation of TSLP and IL-6 in septic patients were analyzed. Result： Compared with group C， there were no significant differences in gender composition， age， APACHEⅡ score and white blood cell count between group S and group SS （P>0.05）; there was no significant difference in serum PCT concentration between group S and group C （P>0.05）; the serum PCT concentration in group SS was significantly higher than that in group C and group S （P<0.000 1）. The concentration of serum TSLP in group S was significantly higher than that in group C （P<0.000 1），

and the concentration of IL-6 in group S was higher than that in group C （P=0.030）. The serum TSLP of group SS was higher than that of group S （P=0.010）， and the concentration of IL-6 was significantly higher than that of group S （P<0.000 1）. There was a positive correlation between TSLP and IL-6 in group S （r=0.61， P<0.01）. Conclusion： The expression of TSLP in the serum of patients with sepsis is increased and related to the severity of sepsis， which suggests that TSLP may be involved in the pathogenesis of sepsis.

[Key words] Sepsis Septic shock Thymic stromal lymphopoietin

First-authors address： Peking University Shenzhen Hospital， Shenzhen 518035， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.07.028

脓毒症是由宿主对感染的反应失调，引起的一系列病理、生理和生化异常，导致危及生命的器官功能障碍[1]，全世界每年约有530万人死于脓毒症[2]，是一个严重危及公共健康的问题，其患病率及死亡率极高，是一种异质性综合征[3]，发病机制尚未明确。胸腺基质淋巴细胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin，TSLP）是白介素-2细胞因子家族的一员，1994年由Friend等[4]在小鼠胸腺基质细胞中发现的，是IL-7中的细胞因子，可以刺激Th2细胞反应，参与炎症反应过程。近年TSLP在感染、变态反应性疾病及肿瘤等多种疾病中受到广泛关注，有研究发现在大鼠脓毒症的发生发展过程中，TSLP可以介导宿主骨髓细胞产生前炎细胞因子引起全身炎症反应失调，下调TSLP作用可以改善脓毒症的急性炎症反应，减少继发的多器官衰竭[5-7]。人外周血CD14+CD1c+细胞亚群培养中发现在LPS刺激下表达TSLPR水平升高[8]，但TSLP在脓毒症患者中的具体表达情况报道较少。本研究通过检测脓毒症患者血清中TSLP的表达情况，进一步探讨TSLP与脓毒症发病的相关性，为脓毒症临床诊治提供更多的参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月-2019年10月在本院ICU住院治疗的患者80例为研究对象，其中男48例，女32例，共分三组，对照组（C组，n=30），脓毒症组（S组，n=30）、脓毒症休克组（SS组，n=20）。脓毒症及脓毒症休克诊断标准符合《第三届国际脓毒症与脓毒症休克定义共识Sepsis 3.0》关于脓毒症及脓毒症休克的最新诊断标准。排除标准：（1）自身免疫性疾病;（2）过敏性疾病;（3）自身炎症性疾病;（4）恶性肿瘤;（5）AIDS;（6）近期接受免疫抑制治疗的患者。本研究通过本院伦理委员会批准，所有入组患者或授权家属签署知情同意书。

1.2 方法 采集所有研究对象入ICU 24 h内的临床资料及空腹静脉血。（1）一般资料：性别、年龄、基础疾病、意识状态、生命体征（体温、脉搏、呼吸、血压）等。（2）辅助检查：血气分析、生化检查（血细胞分析、离子、肝肾功能、PCT）及影像学检查，根据临床资料及检查结果计算APACHE Ⅱ评分。（3）采集患者空腹静脉血5 mL，离心后留取血清，置于-80 ℃冰箱备用。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清TSLP、IL-6的浓度，试剂盒购自PeproTech及Mabtech公司，所有试验步骤严格按照试剂说明书进行。

1.3 统计学处理 采用Graphpad软件进行分析及作图，计量数据符合正态分布用（x±s）表示，比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），多组间两两比较用LSD检验;非正态分布用中位数M（P25，P75）表示，比较采用非参数Kruskal-Wallis秩和检验，组间有统计学差异进一步用Dunn法进行多重比较;采用Spearman相关进行相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组临床资料比较 与C组患者相比，S组及SS组患者在性别构成、年龄、APACHEⅡ评分、白细胞计数上差异均无统计学意义（P>0.05）;S组患者血清PCT浓度与C组比较，差异无统计学意义（P>0.05）;SS组患者血清PCT浓度显著高于C组及S组，差异均有统计学意义（P<0.000 1）。见表1。

2.2 各组患者血清中TSLP、IL-6的浓度水平比较 S组患者血清TSLP的浓度显著高于C组（P<0.000 1），IL-6的浓度高于C组（P=0.030）。SS组患者血清TSLP高于S组（P=0.010），IL-6的浓度显著高于脓毒症组（P<0.000 1）。见表2、图1。

2.3 S组患者血清中TSLP、IL-6浓度的相关性分析 采用Spearman相关分析，结果显示，在脓毒症组患者血清中TSLP的浓度与IL-6的浓度呈明显正相关（r=0.61，P<0.01）。见图2。

3 讨论

脓毒症是宿主对感染的反应失调而致的危及生命的器官功能障碍，是重要的世界性公共卫生问题，伴有严重的循环障碍、细胞代谢紊乱的脓毒症休克使其病死率及致残率进一步升高，再次住院的风险率也显著增加[9]。其具体发病机制不十分清楚，与机体的炎症反应失调有关，目前认为在脓毒症早期即存在促炎因子与抗炎因子的反应失衡，进而引发序贯的器官功能障礙。

本研究的临床资料分析发现，与对照组相比，脓毒症组及脓毒症休克组患者在性别、年龄、APACHEⅡ评分、白细胞计数及PCT水平上比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。与文献[10]结论不同，既往研究显示年龄、白细胞计数、APACHEⅡ评分及PCT水平在脓毒症组明显高于对照组，结论的差异考虑与对照组的选择有关。既往研究的对照组选择为同期体检中心的健康体检者，而本研究的对照组皆为ICU的住院患者，显而易见ICU的患者无论在年龄、感染及病情的严重程度上都会明显高于健康对照组。且本研究所选的对照组患者大多为脑出血患者，其应激反应及昏迷程度高，亦包括部分未达到脓毒症诊断标准的轻度感染患者，由于其他危重情况入住ICU，如急性心功能不全、AECOPD等。因此本研究的对照组患者在白细胞计数及APACHEⅡ评分方面整体偏高，与脓毒症组及脓毒症休克组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。APACHEⅡ评分于1985年制定，用于危重症患者病情严重程度的评估，与患者预后直接相关，评分越高预后越差，死亡率也越高，至今仍是ICU患者危重程度的重要评分之一[11]。PCT是降钙素的前体，轻微或局限性的感染PCT正常或轻微升高，在严重的细菌性感染、脓毒症的早期可急剧升高[12]，在脓毒症的诊断上有一定的参考价值，准确性和特异性均高于CRP[13]，在指导危重症患者的抗生素治疗及降低死亡率方面有重要作用[14]。但本研究结果显示，APACHEⅡ评分和PCT在脓毒症患者组并不高于对照组即入住ICU的非脓毒症患者，也进一步说明作为患者危重程度的重要评分之一的APACHEⅡ评分，并非是脓毒症患者的特异性评分，同时提示PCT虽然在感染性疾病的诊疗中具有重要意义，但其影响因素较多，在重症患者中会有相应的升高，在脓毒症的早期诊断中可能具有一定的局限性。本研究发现脓毒症休克组患者APACHEⅡ评分显著高于对照组及脓毒症组也进一步证明了脓毒症休克患者的危重程度进一步增加，预后更差，死亡风险亦会相应上升，在诊治上也给临床带来了更大的困难和挑战。脓毒症休克组患者血清PCT的浓度亦显著高于对照组和脓毒症组，甚至高于100 ng/mL，与患者严重的全身细菌性感染及脓毒症休克一致，也进一步证明PCT的浓度与脓毒症的轻重程度相关，是评估脓毒症严重程度的一个重要指标。

本研究采集的是入ICU患者24 h內的空腹静脉血，发现脓毒症组患者血清TSLP的浓度显著高于对照组，IL-6的浓度高于对照组，说明TSLP和IL-6在脓毒症的早期浓度即明显升高，且TSLP升高较IL-6更加显著。TSLP是IL-2细胞因子家族成员之一，可以刺激Th2细胞反应，引起反应失调和多器官系统功能不全。脓毒症早期TSLP在微生物、促炎细胞因子以及损伤等多种刺激因素作用下由上皮细胞大量产生。笔者既往研究发现脓毒症早期患者血清中TSLP的浓度升高，且与脓毒症患者的预后呈正相关，是预后不良的独立因素之一[15]。Kuethe等[16]发现大鼠盲肠结扎穿孔（CLP）后6 h TSLP迅速升高，预先抗TSLP抗体中和TSLP可以增加TNF-α的浓度及中性粒细胞的数量，降低大鼠体内的细菌负荷及死亡率，说明TSLP可能通过钝化中性粒细胞的反应性导致脓毒症的发生发展。IL-6在机体受到炎症刺激时可由T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等多种细胞产生，是急性炎症反应的重要因子之一。文献[17]发现脂多糖（LPS）诱导的脓毒症大鼠IL-6水平增高，提前给予淀粉样蛋白后IL-6水平下降，可以减轻脓毒症大鼠的临床严重程度，提高生存率。IL-6有助于宿主防御感染和组织损伤，但过度合成会加重全身炎症反应，是细胞因子风暴中重要因子之一，有研究发现白细胞介素-6阻断法可治疗脓毒症、巨噬细胞活化综合征和噬血细胞性淋巴组织增多症[18]。本研究亦发现脓毒症休克组患者血清TSLP、IL-6的浓度均高于脓毒症组，说明TSLP、IL-6的浓度与脓毒症的严重程度相关。

以往在胶原蛋白诱导的关节炎大鼠模型中，TSLP受体缺失型大鼠局部的促炎因子及分解代谢介质浓度均减低，包括IL-1β、IL-6、BFGF等，说明TSLP及其受体通过T细胞介导的炎症反应参与了关节炎的发病机制[19]。本研究亦发现脓毒症患者血清TSLP的浓度升高与IL-6浓度升高呈正相关，提示TSLP与IL-6协同促进T细胞增殖，参与脓毒症的炎症反应。但同时近年研究也发现，由于有关IL-6的临床研究在诊断阈值、脓毒症的诊断标准、感染源等诸多方面存在差异，使其在成人危重患者脓毒症诊断中的意义具有一定的局限性，TSLP可能成为早期诊断脓毒症的重要指标[20]。

综上所述，本研究发现TSLP在脓毒症患者早期血清中表达增高，且与脓毒症的严重程度相关，提示TSLP参与脓毒症的发病机制，可能成为脓毒症早期诊断的敏感指标之一。

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（收稿日期：2020-06-15） （本文編辑：周亚杰）