GATA3 在乳腺非特殊类型浸润性导管癌中的表达及临床意义

仲竹娟，戚玉琴，时潇洋

(江苏省宿迁市第一人民医院病理科，宿迁 223800)

GATA 结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)是锌指结构转录因子GATA 家族中的一员，通过DNA 序列(A/T)GATA(A/G)结合，调控T 细胞的发育、分化和胸腺发育[1]。研究[2-3]表明，GATA3 主要表达于尿路上皮癌和乳腺癌中，在其他肿瘤中很少表达，可用于与其他肿瘤的鉴别诊断。也有研究[4]认为，GATA3 的表达情况与尿路上皮癌患者的预后密切相关。但在临床病理工作中，乳腺癌常为GATA3 阴性，这一现象是否具有和尿路上皮癌相似的意义，尚未明确。本研究利用免疫组织化学方法检测乳腺非特殊类型浸润性导管癌中转录因子GATA3 的表达情况，进而分析其表达与乳腺癌的病理分级、肿块大小、淋巴结转移、分子分型的相关性，并探讨其预后价值。

1 材料与方法

1.1 材料来源 收集宿迁市第一人民医院病理科自2015 年10 月—2019 年12 月手术切除的乳腺非特殊类型浸润性导管癌石蜡组织归档标本264 例，乳腺良性肿瘤组织58 例，癌旁正常乳腺组织70 例。所有乳腺非特殊类型浸润性导管癌组织标本均经苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色并由本院2位高年资病理诊断医师确诊。

1.2 主要试剂及实验方法 一抗包括抗GATA3(L50-823,福州迈新公司)、抗雌激素受体(estrogenreceptor,ER,SP1,Roche)、抗孕激素受体(progesterone receptor,PR,1E2,Roche)及抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal -growth -factor receptor 2,Her -2,4B5,Roche)。HRP 标记的羊抗小鼠/兔IgG 聚合物(即用型)及二氨基联苯胺(3,3′-diaminobenzidine,DAB)显色液均购自福州迈新公司。

应用免疫组织化学Envision 两步法染色：切片经脱蜡，入水，高温高压抗原修复(柠檬酸抗原修复法，pH 为6.0±0.1)；每张切片滴加50～100 μL 一抗，4 ℃孵育过夜，磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)冲洗后，每张切片滴加酶标羊抗小鼠/兔IgG 聚合物(二抗)50 μL，37 ℃孵育20 min；PBS 冲洗，DAB 显色5 min，苏木精复染，流水返蓝，过梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。

1.3 结果判读 GATA3、ER 和PR 等阳性定位于细胞核，Her-2 阳性定位于细胞膜。针对GATA3，计数10 个高倍视野，以细胞核显示棕黄色及棕褐色判为阳性细胞，计算平均阳性细胞数，按阳性细胞所占比例分为：＜1%(-)、1%～25%(+)、＞25%～50%(++)、＞50%～100%(+++)；+～+++均按阳性统计。按照乳腺癌Her-2检测指南(2019 版)[5]对Her-2 进行判读。

1.4 统计学方法 采用Stata 12.0 软件进行处理，GATA3 与各临床病理指标之间的相关性采用χ2检验；利用GraphPad Prism 8 软件绘制生存曲线，组间差异采用Log-rank 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 GATA3在乳腺癌、乳腺良性肿瘤和癌旁正常乳腺组织中的表达 GATA3 在正常乳腺组织及乳腺良性病变的导管上皮细胞中阳性表达率为100.0%，在乳腺非特殊类型浸润性导管癌中表达阳性率为76.5%，GATA3 在正常乳腺组织、乳腺良性病变及浸润性导管癌中的表达差异有统计学意义(P＜0.05)(图1)。

图1 GATA3 免疫组化染色(Envision 法,200×)

2.2 乳腺癌GATA3 的表达与临床病理特征的相关性 结果显示，GATA3 的表达与乳腺癌的病理分级(诺丁汉联合病理分级)和分子分型有关，与患者的年龄、肿瘤组织大小和淋巴结转移状态无关。GATA3在Luminal A 型和Luminal B 型乳腺癌中的阳性率分别为95.7%和92.7%，Her-2 过表达型乳腺癌中阳性率为59.6%，而三阴性乳腺癌中阳性率为46.4%，差异有统计学意义(P＜0.001)(表1)。

表1 乳腺癌组织中GATA3 的表达与临床病理指标的相关性

2.3 GATA3 的表达和无病生存期的关系 以乳腺癌确诊时间为起点统计患者的无复发生存期，以复发或由乳腺癌进展导致患者死亡的时间为终点。对66 例患者随访4 年，GATA3 阳性表达的乳腺癌患者术后无复发生存率高于GATA3 阴性表达者(P＜0.05)(图2)。

3 讨论

图2 乳腺非特殊类型浸润性导管癌中GATA3 阳性和阴性患者的生存曲线图

乳腺癌的发病率位居我国女性恶性肿瘤首位，并呈逐年上升趋势。研究[6]表明，乳腺癌患者的预后与多种因素有关，包括肿瘤大小、病理分级、分子分型、转移情况、确诊早晚和治疗方案等。近年来，各种分子生物学技术的广泛应用，不仅细化了乳腺癌的分类，同时为临床治疗提供了新的靶点和策略[7]。而临床病理诊断工作也已经从传统的形态学判读转变为形态学与多种检测结果(如免疫组织化学染色、荧光原位杂交等)相结合的综合分析。相关的科研工作也需要发现新的标志物和基因靶点，以提供更精准的诊疗方案。

GATA3 转录因子在乳腺上皮细胞的生长调节及促进分化过程中起重要作用。H.KOUROS-MEHR等[8]认为，GATA3 敲除的小鼠会出现严重的乳腺发育缺陷。J.CHOU 等[9]发现，GATA3 通过调节microRNA(miR-29b)促进乳腺细胞分化，抑制乳腺癌转移，并调控乳腺癌的肿瘤微环境。本研究结果显示，GATA3 表达在正常乳腺组织和良性乳腺病变的乳腺导管上皮细胞，而肌上皮细胞未见表达。故可将乳腺导管上皮细胞作为GATA3 检测的阳性对照。进一步分析发现，乳腺非特殊类型浸润性导管癌GATA3的总阳性率为76.5%，显著低于正常乳腺组织及乳腺良性病变中GATA3 的阳性率。可见，GATA3 在乳腺癌发展过程中起到抑癌基因的作用。

分析GATA3 的表达与乳腺非特殊类型浸润性导管癌临床病理特征间相关性，发现GATA3 的表达与乳腺癌的病理分级(诺丁汉联合病理分级)和分子分型有关，与患者的年龄、肿瘤组织大小和淋巴结转移情况无关。乳腺癌的分子分型直接决定乳腺癌的治疗方式。目前，乳腺癌分子分型主要依据是ER、PR、Her-2 及Ki-67 蛋白的表达[10]。本研究中，GATA3在4 种分子分型中的阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.001)。其中，Luminal A 型和Luminal B 型预后较好，Her-2 过表达型预后稍差，三阴性型预后最差。H.E.GULBAHCE 等[11-12]均认为GATA3 阳性表达更易于出现在ER 阳性乳腺癌样本中，且与患者预后相关。本研究结果也提示，GATA3 更易表达在Luminal 型乳腺癌中。

GATA3 在乳腺癌预后分析是当前的研究热点之一，但目前尚存分歧。J.JACQUEMIER 等[13]发现，接受激素治疗的ER 阳性乳腺癌患者中，阳性患者较GATA3 阴性患者具有较高无复发生存率。R.MEHRA 等[14]发现GATA3 低表达的乳腺癌患者生存期明显短于高表达者。但V.CIOCCA 等[15]发现，GATA3 阳性和阴性的乳腺癌之间复发率和生存率差异无统计学意义。本研究发现，GATA3 阳性表达乳腺癌患者术后无复发生存率高于GATA3 阴性表达者。因此，GATA3 表达在患者预后中也有一定的临床价值。

综上所述，GATA3 在乳腺癌中发挥抑癌基因的作用，其表达结果与乳腺癌的预后有关，GATA3 阳性表达者预后较好，阴性表达者预后较差。此外，GATA3 可作为乳腺癌鉴别诊断的标志物[16]。但本实验未检测乳腺特殊类型肿瘤样本，如乳腺特殊类型浸润性癌、乳腺梭形细胞肿瘤、乳腺淋巴瘤等。因此，在以后的研究中需完善标本类型，以进一步明确GATA3 在乳腺恶性肿瘤中的应用价值。