p53及bcl-2蛋白在乳腺癌中的表达及与c-erbB-2表达的相关性

李清苗 谷国梅 师晨阳

乳腺癌是全球范围内严重危害女性生命健康的恶性肿瘤性疾病，且其发病率逐年升高，并趋于年轻化，发病率约占女性恶性肿瘤的25%。研究[1-2]报道，乳腺癌属于一种高度异质性肿瘤，其病程演变经历了多基因、多阶段等复杂生物学过程，因此研究相关基因在乳腺癌组织中的表达情况并分析彼此间的相互作用对于揭示其发生、发展机制具有重要意义。乳腺癌的发生不仅与部分原癌基因过度活化或抑癌基因失活相关，也与细胞凋亡受抑相关，参与细胞凋亡的B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)基因与乳腺癌发生及乳腺癌细胞增殖密切相关[3]；Kim G等[4]研究报道，突变型p53是一种促癌基因，可有效促进肿瘤细胞增殖，导致肿瘤的发生；c-erbB-2是目前公认的与乳腺癌发生、发展密切相关的原癌基因[5]。本研究旨在探究乳腺癌组织中p53、bcl-2蛋白的表达情况，并分析两者与c-erbB-2蛋白表达的相关性，为乳腺癌的靶向治疗提供新思路，现将结果详细报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取2017年3月至2018年12月于本院住院治疗的50例乳腺癌患者为研究对象，搜集其临床资料并进行回顾性分析。所有患者均经病理学诊断确诊并行乳腺癌根治术治疗，临床资料完整，预计生存期1年以上，手术情况及随访记录清晰，术前未接受过任何抗肿瘤治疗。50例患者年龄35～65岁，平均(53.65±4.87)岁。采集所有患者乳腺癌病理组织标本及癌旁正常乳腺组织标本，并分别作为观察组及对照组，各50例。

1.2 主要试剂及仪器

鼠抗人p53、bcl-2、c-erbB-2多克隆抗体(英国Abcam公司)，SP法免疫组化试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)等；CUT4062型石蜡切片机(德国SLEE公司)，CKX41-A32RC型倒置显微镜(日本Olympus公司)等。

1.3 方法

常规制备石蜡组织切片，厚度约4 μm，经脱蜡，水化，常规进行免疫组化染色，一抗为鼠抗人p53、bcl-2、c-erbB-2多克隆抗体(浓度1∶100)，二抗为广谱通用型非生物素化IgG，DAB染色液，显微镜下控制显色反应时间；然后经苏木精复染2 min，梯度酒精脱水，中性树胶封片，于光学显微镜下观察各组织标本中p53、bcl-2、c-erbB-2蛋白表达情况。p53、bcl-2、c-erbB-2蛋白阳性着色均以细胞核或细胞质中出现棕黄色或棕褐色为准，以半定量积分法判定染色结果：随机选取5个视野，于高倍镜下对各个视野中的阳性细胞数进行评分，未见阳性细胞为阴性计0分；阳性细胞百分比<10%计1分；阳性细胞百分比≥10%～50%计2分；阳性细胞百分比>50%～75%计3分；阳性细胞百分比>75%计4分。另据染色强度进行评分：未见着色计0分；浅黄色计1分；棕黄色计2分；棕褐色计3分。染色总评分=阳性细胞数评分×阳性染色强度评分。若染色总评分为0～3分，则为阴性；若染色总评分≥4分，则为阳性[6]。

1.4 观察指标

①观察对照组及观察组组织标本中 p53、bcl-2蛋白表达情况，统计并比较2组p53、bcl-2蛋白阳性表达率；②比较不同乳腺癌组织病理分级患者组织标本中p53、bcl-2蛋白阳性表达率；③据据乳腺癌组织中c-erbB-2蛋白表达情况分为c-erbB-2阳性组及c-erbB-2阴性组，Person相关性分析评估p53、bcl-2蛋白与c-erbB-2蛋白表达的相关性。

1.5 统计学方法

使用SPSS 17.0统计软件进行分析，计数资料以百分比(%)表示，采用卡方检验进行比较，p53及bcl-2蛋白与c-erbB-2表达的相关性分析采用皮尔逊(Person)进行分析，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患者p53及bcl-2蛋白的表达情况

对照组及观察组中p53蛋白阳性表达率分别为0.00%(0/50)、62.00%(31/50)；bcl-2蛋白阳性表达率分别为88.00%(44/50)、64.00%(32/50)。观察组p53蛋白阳性表达率显著高于对照组(χ2=44.928，P<0.01)，而观察组bcl-2蛋白阳性表达率显著低于对照组(χ2=7.895，P=0.005)。

2.2 p53及bcl-2蛋白与乳腺癌组织病理分级的关系

p53蛋白阳性率随乳腺癌组织病理分级升高而逐渐升高，分别为Ⅰ级37.50%(6/16)、Ⅱ级68.97%(20/29)、Ⅲ级100.00%(5/5)，各级别间差异显著(χ2=7.738，P=0.021)；bcl-2蛋白阳性表达率随乳腺癌组织病理分级升高而逐渐降低，分别为Ⅰ级87.50%(14/16)、Ⅱ级58.62%(17/29)、Ⅲ级20.00%(1/5)，各级别间差异显著(χ2=8.401，P=0.015)。

2.3 p53及bcl-2蛋白与c-erbB-2表达的相关性分析

50例乳腺癌患者中，37例c-erbB-2蛋白阳性，13例c-erbB-2蛋白阴性。c-erbB-2阳性组中p53蛋白阳性表达率显著高于c-erbB-2阴性组，且乳腺癌组织中p53蛋白阳性表达与c-erbB-2阳性表达显著正相关(γ=0.894，P<0.001)；c-erbB-2阳性组中bcl-2蛋白阳性表达率显著低于c-erbB-2阴性组，且乳腺癌组织中bcl-2蛋白阳性表达与c-erbB-2阳性表达显著负相关(γ=-0.803，P<0.001)。见表1。

表1 p53及bcl-2蛋白与c-erbB-2表达的相关性分析(例，%)

3 讨论

早期发现、诊断及治疗是降低乳腺癌患者病死率的关键，特异性肿瘤标志物的研究对于肿瘤患者预后及临床治疗具有重要的指导意义。p53及bcl-2蛋白在多种肿瘤的发生中均具有重要作用。杨一飞等[7]研究报道，突变型p53蛋白可有效促进细胞恶性转化，激活其他癌基因，促进肿瘤进展。研究[8-9]报道，p53蛋白表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达情况，淋巴结转移及肿瘤细胞增殖均具有显著相关性，其随着乳腺癌患者年龄低、临床分期晚、ER、PR蛋白低表达等而显著增强。丁明剑等[10]研究报道，突变型p53基因可促进血管增生内皮生长因子表达，是促进肿瘤血管生长的重要影响因素。黄燕等[11]报道称，p53蛋白阳性表达的肿瘤细胞更具有侵袭性，且其阳性表达与乳腺癌淋巴结转移呈显著正相关关系。本研究中乳腺癌组织中p53蛋白阳性表达率为62.00%，显著高于癌旁边正常乳腺组织，且其随着乳腺癌患者组织病理分级逐渐升高，即p53蛋白阳性表达可促进乳腺癌疾病进展，是诊断与治疗乳腺癌的重要分子指标。bcl-2基因是一种原癌基因，其蛋白产物并不影响细胞增殖，但会阻遏细胞凋亡过程，是一种凋亡抑制基因，亦参与肿瘤的发生、发展[12]。Raha P等[13]研究报道，bcl-2基因不仅会抑制细胞凋亡，还会延长细胞周期，继而延缓肿瘤细胞增殖，因此当bcl-2表达降低时可促进乳腺癌的发生、发展；研究[14-15]报道，bcl-2基因高表达时，肿瘤患者具有相对较好的病理生物学行为，可作为预测肿瘤患者是否发展淋巴结转移的分子生物学指标之一。本研究中乳腺癌组织bcl-2蛋白阳性表达率为64.00%，显著低于癌旁正常乳腺组织，且随着乳腺癌患者组织病理分级逐渐降低，提示bcl-2蛋白低表达可促进乳腺癌疾病进展，也是诊断与治疗乳腺癌的重要分子指标。

c-erbB-2属于表皮生长因子受体家族成员，是一种跨膜蛋白，作为一种原癌基因广泛表达于肝、肾、卵巢等肿瘤组织中，且其表达与疾病恶性程度正相关。于喜法等[16]研究报道，c-erbB-2作为细胞增殖及分化的调节剂，其阳性表达越多，则疾病进展越强，肿瘤细胞生长速度越快，且侵入淋巴系统发生转移的几率也随之越高。目前有关乳腺癌组织中c-erbB-2蛋白表达与p53、bcl-2蛋白表达的相关性尚未见报道，本研究中50例乳腺癌患者中37例c-erbB-2蛋白阳性，阳性表达率为74.00%，进一步相关性分析结果显示，c-erbB-2阳性组中p53蛋白阳性表达率显著高于c-erbB-2阴性组，bcl-2蛋白阳性表达率显著低于c-erbB-2阴性组，提示乳腺癌组织中p53蛋白与c-erbB-2蛋白表达显著正相关，而bcl-2蛋白与c-erbB-2蛋白表达显著负相关。

综上，乳腺癌组织中p53蛋白高表达，bcl-2蛋白低表达，且乳腺癌组织中p53蛋白与c-erbB-2蛋白表达显著正相关，而bcl-2蛋白与c-erbB-2蛋白表达显著负相关，但由于本研究样本量较少，且检测方法单一，因此仍需临床开展大样本量实验进一步研究确认。