宫颈癌患者HPV感染状况及外周血Th1/Th2细胞因子变化研究

姜爱华 孙俊红 张芳芳 李自平

宫颈癌(uterine cervical cancer)是妇科常见的恶性肿瘤之一，发病率位居女性恶性肿瘤第一位，而且发病率有逐年增高、有低龄化趋势。辅助性T细胞(T helper，Th)亚群在人体免疫功能中起到重要作用，主管细胞免疫，具有抗病毒和免疫调节功能，CD4是T细胞主要效应细胞成员之一，可分为Th1和Th2两类亚群，Th1主要介导细胞免疫，Th2主要介导体液免疫反应，在正常情况下Th1/Th2处于动态平衡状态，研究显示Th1/Th2的变化在恶性肿瘤免疫逃逸中起着十分重要的作用[1-2]，本研究对宫颈癌患者HPV感染状况及外周血Th1/Th2细胞因子变化进行了研究，分析其在宫颈癌发生及发展中所起的可能机制，为宫颈癌的临床防治提供参考，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取2016年1月2019年7月期间在医院诊治的80例宫颈癌患者为研究对象(宫颈癌组)，纳入标准：①均经过病理检查确诊为宫颈癌。②均为初诊。③纳入研究前未进行放化疗等治疗。排除标准：①不符合纳入标准。②妊娠期及哺乳期妇女。③合并其他恶性肿瘤。④合并有糖尿病、高血压、心血管类疾病者。⑤合并明确的急慢性感染性疾病。⑥长期服用免疫抑制剂或糖皮质激素者。选取同期门诊体检的健康女性80例为对照(对照组)，两组患者年龄分布构成比比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。本研究患者知情同意，经过伦理委员会审核通过。

表1 两组临床资料分布及构成比比较(例，%)

1.2 方法

1.2.1 HPV检测方法 被检查者取膀胱截石位，窥阴器下暴露宫颈口，将宫颈外口的分泌物用无菌棉球擦拭干净，然后将广东凯普生物科技有限公司生产的HPV取样器插入宫颈内口位置，以顺时针方向旋转3周，停留约10 s取出，将HPV取样器刷杆凹痕位置折断后分离顶端置入专用保存液中，在检测离心后取得沉淀细胞液，细胞液中加入细胞裂解液提取DNA，采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HPV-DNA，细胞裂解液及37种HPV分型检测试剂盒均购自广东凯普生物科技有限公司，在济南赛福生物科技有限公司生产的MB-530酶标仪进行显色，根据试剂盒说明书观察薄膜上显像为紫蓝色圆点为阳性，多个紫蓝色圆点诊断为多重感染，基因型分型则依据试剂盒条膜上的阳性点分布位点对照后进行确定。

1.2.2 外周血Th1/Th2细胞因子检测方法 抽取被检查者外周血5 ml，进行离心处理取得血清标本，应用酶联免疫吸附法检测Th1/Th2细胞因子水平，Th1细胞因子主要检测白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)，Th2细胞因子主要检测白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)，检测试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司，IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6抗体购自罗氏公司。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组HPV感染状况比较

宫颈癌组70例检出HPV，感染率为87.50%，对照组5例检出HPV，感染率为6.25%，比较差异有统计学意义(χ2=106.039，P=0.000)，宫颈癌组HPV分型60例高危型、10例低危型，分别占85.71%、14.29%，38例单一感染、32例多重感染，分别占54.29%、45.71%，对照组HPV分型0例高危型、5例低危型，分别占0.00%、100.00%，5例单一感染、0例多重感染，分别占100.00%、0.00%，两组HPV分型及感染类型比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组HPV感染分型及感染类型分布及构成比比较(例，%)

2.2 两组外周血Th1/Th2细胞因子水平比较

宫颈癌组两组外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 两组外周血Th1/Th2细胞因子水平比较

2.3 宫颈癌组HPV与无HPV感染患者外周血Th1/Th2细胞因子水平比较

HPV感染患者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明显高于无HPV感染患者，比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 宫颈癌组HPV与无HPV感染患者外周血Th1/Th2细胞因子水平比较

2.4 对照组HPV与无HPV感染者外周血Th1/Th2细胞因子水平比较

HPV感染者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明显高于无HPV感染者，比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表5。

表5 对照组HPV与无HPV感染者外周血Th1/Th2细胞因子水平比较

3 讨论

宫颈癌的发病机制目前仍然不是完全很清楚，与宫颈癌有关的病毒感染因素中，高危型的HPV持续感染已经被证实是宫颈癌的主要致病因素之一，HPV具有嗜鳞状上皮性和免疫逃逸性，临床研究显示[3-5]，高危型的HPV感染可引起宫颈上皮细胞发生内瘤变，进而发展为宫颈癌，宫颈癌患者高危型HPV感染率明显高于正常人群，本研究结果显示，宫颈癌患者HPV 感染率为87.50%，明显高于正常人群的6.25%感染率，宫颈癌组高危型HPV占85.71%，而且多重感染率高达45.71%，对照组未检出高危型，也无多重感染者，研究结果符合高危型HPV是引起宫颈癌的危险因素的研究结论，进一步证实了高危型HPV感染与宫颈癌之间关系密切。HPV在感染初期，可在基底上皮细胞内进行病毒蛋白的复制，不会引起全身炎症反应，但是感染持续存在，可进一步改变细胞因子及趋化因子的表达，逃避机体免疫功能对其攻击清除作用，病毒蛋白在基底细胞内持续的复制及释放病毒颗粒，逐步引起上皮细胞出现异常增殖及恶变，同时HPV还会改变部分抑癌基因功能，促进宫颈癌的发生。

肿瘤的发生发展与人体免疫功能密切相关，B淋巴细胞和T淋巴细胞均参与了免疫反应过程，其中T淋巴细胞起到主导作用，可对病毒及肿瘤细胞起到抑制和杀伤作用[6-7]。T淋巴细胞包括CD4和CD8两个亚群，CD4根据表面标记和功能又可分为若干亚群，共同起到免疫调节作用，在各亚群中CD4辅助性T细胞(Th)亚群最为重要，包括Th1和Th2、Th17等，其中Th1是参与肿瘤免疫的主要细胞之一，可通过其分泌淋巴细胞因子增强和扩大免疫应答过程，同时诱导其他免疫细胞因子共同参与到抗肿瘤的过程之中[8-10]，Th1可分泌IFN-γ，诱导NK细胞抗肿瘤活性增强，分泌IL-2可诱导单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等聚集及浸润，加重细胞损伤，导致正常细胞发生异常增殖及癌病；Th2主要功能是抑制NK细胞的活化及减少肿瘤细胞抗原的表达等，进而抑制免疫系统反应对肿瘤的抗肿瘤作用。大部分育龄期妇女一生之中都会感染过HPV，一般情况下通过自身免疫系统功能可清除病毒，只有少部分患者会出现持续的HPV感染，在清除HPV的过程中T淋巴细胞也是最重要的免疫细胞。临床研究显示[9]，宫颈癌患者临床分期与Th1和Th2异常表达直接关系密切，如分期越晚，则IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6表达越高，而且趋势越明显。在相关研究中显示[11-13]，Th1和Th2可反应出机体抗肿瘤的免疫动态变化，宫颈癌患者可出现CD4细胞核CD4/CD8比值的降低，CD8则随着分期可出现升高，提示宫颈癌患者细胞免疫功能低下，而且分期越晚免疫功能越低下。本研究结果显示，宫颈癌患者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平高于正常妇女，表明Th1/Th2平衡右移可引起T淋巴细胞免疫功能发生抑制，导致免疫监察功能下降，是宫颈癌细胞出现免疫逃逸的主要原因。分析HPV感染与无HPV感染的宫颈癌患者外周血IFN-γ、IL-4、IL-6水平变化，结果显示HPV感染患者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明显高于无HPV感染患者，而且非宫颈癌的正常对照组中HPV感染者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平也高于无HPV感染者，提示Th2/Th2的异常变化与HPV感染有关。考虑IFN-γ、IL-4、IL-6水平的异常表达，可引起宫颈正常的上皮细胞发生氧化应激损伤及自身免疫性损伤。

综上所述，宫颈癌患者存在HPV感染率增高及外周血Th1/Th2细胞因子紊乱，HPV感染可加重Th1/Th2细胞因子紊乱，HPV感染及外周血Th1/Th2细胞因子紊乱在宫颈癌的发生发展中可能起到了促进作用。