长链非编码RNA H19表达与恶性肿瘤患者预后关系的Meta分析△
2021-04-25王会新冯旭侯晓雯
王会新，冯旭，侯晓雯
沈阳医学院公共卫生学院，沈阳 110034
长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一类转录本长度大于200 nt、位于细胞核或细胞质内、缺乏明显的开放阅读框、没有蛋白质编码能力的RNA分子。大量的基础实验和临床试验结果显示，lncRNA参与基因组印迹、组蛋白修饰、染色质重构等多个生物学过程。lncRNA的异常表达可能会影响机体的生长、发育、细胞凋亡、肿瘤细胞形成等多种生物过程，进而导致疾病的出现，尤其是肿瘤的发生。H19是最早发现的一种lncRNA，长度为2660 bp。有研究采用lncRNADisease2.0版数据库检索与H19相关的肿瘤，结果显示，H19与乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、肺癌、甲状腺癌、胃癌等多种肿瘤有关，表达失调的H19可作为肿瘤促进或抑制因子。目前，关于H19与恶性肿瘤预后的研究较少且结论尚不一致。本研究釆用Meta分析的方法对已发表的研究H19与恶性肿瘤患者预后关系的文献进行综合分析，旨在为探讨H19与恶性肿瘤患者预后的关系提供更客观的循证医学依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 检索策略
在PubMed、EMBASE、中国知网、万方数据库、维普数据库中进行检索，检索日期截至2020年8月31日。检索关于H19与恶性肿瘤预后关系的已发表文献，中文检索词为“H19”“癌”“恶性肿瘤”“生存”“预后”“复发”，英文检索词为“long noncoding RNA H19”“H19”“cancer”“carcinoma”“prognosis”“prognostic”“survival”“outcome”“recurrence”，根据不同数据库的特征分别进行主题词联合自由词、关键词综合检索。限制搜索的文献语言为英文和中文。
1.2 文献纳入与排除标准
文献纳入标准：①关于恶性肿瘤的研究，对H19的表达进行了检测，并提出H19定量检测方法；②明确提出了H19高表达与低表达的界定标准；③具有预后生存指标，如总生存期（overall survival，OS）、无 病 生 存 期（disease-free survival，DFS）、无复发生存期（relapse-free survival，RFS）、无进展生存期（progression-free survival，PFS）等；④能够获取风险比（hazard ratio，HR）及其95%置信区间（confidence interval，CI）；⑤能够获取研究人群、随访时间等研究信息；⑥同一研究者发表文章中的重复数据，选取样本量大或最新的文献。排除标准：①摘要、综述、病例报道、荟萃分析；②重复发表、重复收录的文献；③以细胞、动物等为研究对象的文献；④信息不完整的文献。
1.3 数据提取及文献质量评价
由两名研究者独立进行数据提取及文献质量评价，按照纳入和排除标准筛选文献并提取相关资料，若出现分歧，则由两名研究者共同讨论，必要时请第三位研究者参与讨论并得出统一结果。按照文献质量评价量表——Newcastle-Ottawa量表（Newcastle-Ottawa scale，NOS）对纳入的文献进行质量评价。评分≥6分认为纳入的文献质量较高。
1.4 统计学方法
采用Review Manager 5.3软件进行Meta分析。依据统计量I
的大小判断各研究间的异质性，I
＞50%时，表明各研究间存在异质性，采用随机效应模型；反之，采用固定效应模型。合并效应量选择HR及其95%CI，采用Z
检验分析HR值的统计学意义。以P
＜0.05为差异有统计学意义。采用敏感性分析评估Meta分析结果的稳定性，通过漏斗图检测是否存在发表偏倚。2 结果
2.1 文献筛检结果
按照检索策略共检索出文献1022篇，剔除重复发表、综述、摘要、病例报道、非预后相关和与恶性肿瘤无关等文献817篇，阅读全文，排除无生存结局相关指标的文献189篇，最终纳入16篇文献。
2.2 纳入文献的基本特征
共纳入16篇文献，样本量为1741例，发表时间为2013—2020年，包含9种肿瘤类型。16篇文献结局指标中均包括OS，2篇文献结局指标中包括DFS，2篇文献结局指标中包括RFS。本研究纳入的HR值及95%CI均为多因素分析的结果。NOS评分最低为6分，最高为8分。检测方法均为定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）。（表1）
表1 纳入文献的基本特征
2.3 Meta分析结果
2.3.1 H19表达水平与恶性肿瘤患者OS的关系在符合纳入标准的研究中，以OS为研究终点的样本量共1741例。结果表明，H19表达与恶性肿瘤患者的OS有关，H19高表达是恶性肿瘤患者预后的不利因素（HR=1.69，95%CI：1.46～1.95，P
＜0.05）。（图 1）
图1 H19与恶性肿瘤患者OS关系的Meta分析结果
2.3.2 H19表达水平与消化系统恶性肿瘤患者OS的关系 为了解不同类型恶性肿瘤中H19表达与患者预后的关系以及探索异质性的来源，本研究进一步将肿瘤类型分为消化系统恶性肿瘤与其他系统恶性肿瘤并进行亚组分析，结果显示，H19表达是消化系统恶性肿瘤患者预后的不利因素，H19低表达消化系统恶性肿瘤患者的OS长于H19高表达患者（HR=1.63，95%CI：1.32～2.02，P
＜0.05）。（图2）
图2 H19与消化系统和其他系统恶性肿瘤患者OS关系的Meta分析结果
纳入的文献中，4篇为结直肠癌研究，2篇为肝癌研究，2篇为胃癌研究，1篇为胆囊癌研究。进一步对这4种消化系统恶性肿瘤患者预后与H19表达的关系进行亚组分析，结果显示，H19低表达结直肠癌患者的OS长于H19高表达患者（HR=2.69，95%CI：1.12～6.45，P
＜0.05）；未发现H19表达与肝癌、胃癌和胆囊癌患者OS有关。（图 3）
图3 H19与结直肠癌、肝癌、胃癌、胆囊癌患者OS关系的Meta分析结果
2.4 H19表达与恶性肿瘤患者OS 关系的亚组分析结果
为进一步探索异质性的来源，本研究将所纳入文献按照不同的样本量、研究对象国籍及NOS评分进行亚组分析，结果显示，依据文献质量（即NOS评分）进行亚组分析的I
值均较小，提示文献质量可能是研究的异质性来源。（表2）
表2 H19表达与恶性肿瘤患者OS关系的亚组分析结果
2.5 敏感性分析
对于H19表达与恶性肿瘤患者OS关系的研究，逐一剔除各项研究后，并未发现HR有明显的改变，说明敏感性较低，结果较为稳定可信。（表3）
表3 H19表达与恶性肿瘤患者OS关系的敏感性分析结果
2.6 发表偏倚
本研究选择漏斗图进行发表偏倚检测，结果显示，漏斗图呈不对称分布。（图4）
图4 H19表达与恶性肿瘤患者OS 关系的漏斗图
3 讨论
恶性肿瘤严重威胁着人类的健康，已有研究证明H19在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用，但现有研究结果并不一致，本研究对H19与恶性肿瘤患者预后关系的文献进行了Meta分析。结果表明，H19表达与恶性肿瘤患者的OS有关，H19高表达恶性肿瘤患者的OS更短，按照肿瘤类型分亚组进行分析，结果显示，H19表达与结直肠癌患者的OS有关。依据样本量、研究对象国籍、文献质量进行亚组分析异质性来源，结果发现，依据文献质量进行亚组分析的I值均较小，提示文献质量可能是研究的异质性来源。在进行漏斗图分析时发现，漏斗图呈不对称性分布，可能与小样本试验有关。研究中结局指标为PFS和RFS的文献均仅有2篇，因此未对H19与恶性肿瘤患者DFS和RFS的关系进行Meta分析。
本研究结果提示H19表达可能与恶性肿瘤患者的预后有关，目前关于H19与恶性肿瘤关系的机制主要有以下几种学说：增强子竞争学说、差异性甲基化区域（differentially methylated region，DMR）作用、染色质模型、转录周期学说，H19还可以通过微小RNA（microRNA，miRNA）形成竞争内源性RNA调控网络，参与肿瘤的进展。有研究利用Starbase2.0软件预测了与H19相互作用的miRNA，其中包括 miRNA-675、miRNA-196、miRNA-148、miRNA-130、miRNA-18等，这些miRNA已被证实通过与下游靶基因的结合广泛参与恶性肿瘤的发生和发展。本研究再通过生物信息学在线软件Co-lncRNA进行KEGG pathway预测，结果显示，与H19相互作用的基因富集通路有N聚糖生物合成通路、ABC转运体信号转导通路、p53信号通路等。关于其作用机制需要进一步的研究证实。
本研究尚存在一些不足之处：首先，不同研究对H19高表达的界定标准不一致；其次，纳入文献的数量较少，仅有16篇，其中包含多种肿瘤类型，只有2篇文献纳入的人群为外国人群，使研究结果的适用人群受到一定程度的限制；最后，本研究只纳入了英文和中文文献。因此，期待更多的研究进一步探讨H19在不同类型恶性肿瘤中的预后价值。
综上所述，恶性肿瘤患者尤其是结直肠癌患者肿瘤组织中H19表达上调与不良预后有关。H19可能成为一种新的恶性肿瘤预测因子，对恶性肿瘤的预后判断和治疗具有一定的指导价值，但尚需进一步前瞻性研究证实。
