探讨循环肿瘤细胞(CTCs)在乳腺癌患者预后判断中的应用价值

吴慧

1.山东卫康医学检验有限公司，淄博市精准基因检测关键技术重点实验室，山东淄博 255000；2.山东省遗传性疾病基因检测技术应用示范中心，山东济南 250000

乳腺癌是女性常见并发症，我国每年约有超过200万新增乳腺癌患者。 目前该病的治疗方法包括手术、化疗、放疗、内分泌治疗以及分子靶向治疗等，早期乳腺癌患者可通过根治术治愈， 但是由于早期乳腺癌无特异性症状，因此很多患者在确诊时已经发展为中晚期，错过最佳手术时间，因此多采取以手术+化疗为主的治疗方案[1]。 但是患者在治疗中所表现出的疗效有个体差异，因此需要科学评估患者的化疗效果，从而为后续治疗方案确定提供有效依据。 循环肿瘤细胞常见于多种恶性肿瘤患者， 在健康人群和其他疾病患者中的水平较低。 有研究指出[2]，循环肿瘤细胞在乳腺癌临床诊断、治疗及预后评估中具有较好的应用价值。 因此，该文方便选取2017 年1 月—2019 年2 月374 例乳腺癌患者，针对循环肿瘤细胞在乳腺癌患者预后判断中的应用价值展开分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取374 例乳腺癌患者，年龄为28～72 岁，平均为（50.4±5.1）岁，所有患者经病理组织活检确诊为乳腺癌，TNM 分期为：Ⅱa 期 34 例、Ⅱb 期 152 例、Ⅲa 期132 例、Ⅲb 期 64 例。 纳入标准：无其他恶性肿瘤及转移灶、血尿常规检查正常、肝肾功能正常。 排除标准：合并凝血障碍、急慢性炎症、自体免疫性疾病。 该次研究经医院伦理委员会批准， 所有患者均对该次研究知情并签署同意书，并经伦理委员会批准。

1.2 方法

所有患者化疗方案选择FEC 方案，用药方法为：第1 天和第 8 天静脉滴注 5-Fu（国药准字 H33022622），计量为500 mg/m2；第1 天静脉滴注吡柔比星（国药准字H10930105），剂量为 50 mg/m2；第 1 天和第 8 天静脉滴注环磷酰胺（国药准字H20084627），计量为500 mg/m2。3 周为1 个疗程，连续治疗3 个疗程后进行疗效评价。

循环肿瘤细胞检测方法： 患者清晨空腹采取7.5 mL肘静脉血并放置于EDTA 试管备用。 使用PBS 缓冲液稀释后将静脉血装入聚蔗糖泛影葡胺细胞分层液试管，以3 500 r/min 离心处理25 min，吸附血沉层，然后加入5 mLPBS 缓冲液，然后以2 500 r/min 离心处理6 min，分离上清液， 再加入0.5 mLPBS 缓冲液和1 mL 固定液，标记后放入4℃冰箱冷藏30 min，以2 300 r/min 离心处理3 min，取上清液加入4 mL 重悬细胞PBS 液，然后以2 300 r/min 离心处理3 min。 血液样本加入70 μL血清PBS 液，然后加入10 μLFcR 封闭，之后加入CD45和CK18 抗体。 最后使用流式细胞仪检测。

1.3 观察指标

统计患者的临床疗效， 同时比较不同化疗效果患者化疗前后CTCs 计数的差异，并采用Spermans 相关分析法分析CTCs 与乳腺癌化疗效果的相关性。 该次研究临床疗效参照WHO 关于实体瘤判断标准，分为完全缓解：病灶完全消失；部分缓解：肿瘤直径缩小超过30%；疾病稳定：肿瘤直径缩小程度＜30%；疾病进展：肿瘤直径增大＞20%后出现新发病灶。

1.4 统计方法

采用SPSS 16.0 统计学软件予以数据处理，计量资料以（）表示，行t 检验；计数资料以频数和百分比(%)表示，行 χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌患者的临床疗效

该次研究中374 例患者中经规范治疗后， 完全缓解105 例，部分缓解141 例，病情稳定68 例，病情进展60 例，见表 1。

表1 374 例乳腺癌患者的化疗结局

2.2 不同结局乳腺癌患者化疗前后CTCs 计数变化

完全缓解与部分缓解患者化疗前后的CTCs 计数相比病情稳定和病情进展患者明显更低， 差异有统计学意义（P＜0.05），见表 2。

表2 不同结局乳腺癌患者化疗前后CTCs 计数变化[()，个]

表2 不同结局乳腺癌患者化疗前后CTCs 计数变化[()，个]

化疗结局 化疗前 化疗后t 值 P 值完全缓解部分缓解病情稳定病情进展6.5±0.6 7.1±0.8 11.8±2.1 12.1±2.3 1.2±0.2 2.0±0.4 4.6±1.1 5.6±1.4 6.652 5.263 5.165 5.024 0.046 0.042 0.041 0.040

2.3 相关性分析

通过Spermans 相关分析法分析，CTCs 计数与乳腺癌患者化疗效果呈正相关性（r=0.426，P＜0.05）。

3 讨论

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤， 对女性患者的生活质量与生命安全造成了较大的威胁。 根据我国卫生部门统计报告指出， 乳腺癌是我国女性恶性肿瘤中发生率最高的癌症，尤其是上海北京等一线城市，呈持续增长的趋势。 乳腺癌是一种激素依赖性恶性肿瘤，与生物因素、遗传因素以及理化因素有密切的相关性，虽然目前仍未明确该病的发生机制，但是多数学者认为[3]多种癌症基因和细胞因子参与该病的发生和进展。 虽然该病的发生率不断升高，但是随着医学技术的进步，该病的病死率也不断下降，除了早期诊断和治疗外，外科手术联合放化疗的综合治疗方案提高了患者的临床疗效[4]。 早期乳腺癌患者可以实施根治术，但对于中晚期患者主要是采取化疗为主的治疗方案。 化疗主要是通过敏感化疗药物的使用，加速肿瘤细胞凋亡[5]。 在治疗过程中需要密切观察患者的病情变化， 对于化疗效果不佳的患者，需要转为使用其他治疗方案，避免疾病的进一步进展。 因此需要采用有效的观察指标来评价乳腺癌患者的化疗效果。

乳腺癌作为一种全身性疾病， 在肿瘤形成后就可能出现转移的风险，从而影响患者的预后情况。 雌激素受体、 孕激素受体以及人类表皮生长因子受体2 是目前乳腺癌常用的观察指标， 能够指导临床治疗和预后评估[6]。 但是这些指标不适合进行连续监测，因此在动态疗效评价方面的应用效果有限。 需要积极寻找新的观察指标[7]。 循环肿瘤细胞（CTCs）是指从肿瘤组织脱离或因为诊疗操作进入外周血液的肿瘤细胞， 这些细胞能够通过血液进入其他组织和器官， 并且通过间质上皮转化实现远处转移[8]。CTCs 检测与传统乳腺癌标志物检测相比具有稳定性高的优势， 且与其他检查方法相比，具有创伤小、可重复性好、不受疾病分期影响的优势。 有研究[9]指出，CTCs 在乳腺癌临床诊断中具有较好的应用效果，能够提高乳腺癌检出率，采用CTCs 检测的敏感性为87.6%， 特异性为93.2%， 阳性预测率为100.0%， 阴性预测率为86.2%与该次研究结果一致，该次研究中 CTCs 检测的敏感性为85.6%， 特异性为92.7%，阳性预测率为100.0%，阴性预测率为85.7%。该次研究中完全缓解与部分缓解患者化疗前后的CTCs计数相比病情稳定和病情进展患者明显更低（P＜0.05），通过Spermans 相关分析法分析，CTCs 计数与乳腺癌患者化疗效果呈正相关性（r=0.426，P＜0.05），这说明预后好的患者化疗前后的CTCs 计数相比于预后不好患者要更低，提示CTCs 计数高的患者往往预后较差，在临床治疗中需要加强此类患者的病情观察。

随着临床医学对乳腺癌研究深入， 远端转移是影响乳腺癌患者预后的主要原因。 远端转移的主要因素为肿瘤细胞从血液进入其他组织器官， 因此可以根据这一原因，利用外周血检测循环中肿瘤细胞的数量，评价患者的预后情况[10]。同时外周血作为一个采集方便的样本，采集难度小，可随时进行检查，若能够从外周血中发现肿瘤细胞，可以根据CTCs 计数指导患者的治疗[11]。肿瘤细胞从组织脱离进入血液之后在24 h 内会凋亡，仅有不到0.1%肿瘤细胞仍有活性， 虽然这些肿瘤细胞数量较少，且不一定会最终形成转移灶，但是只有肿瘤细胞进入血液之后才会完成肿瘤远端转移， 是影响乳腺癌患者预后的重要基础[12]。同时该方法与活检样本相比，外周血采集方便，患者对检查的耐受性高，采血途径多。因此，CTCs 能够作为评价乳腺癌患者疗效的重要指标，观察患者有无复发风险。

综上所述，化疗前CTCs 计数低的乳腺癌患者往往预后较好，且化疗后乳腺癌患者CTCs 明显下降，循环肿瘤细胞在乳腺癌患者预后判断中具有较好的应用价值，可在临床推广使用。