结石通片对小鼠的急性毒性试验及其对乙二酰胺致大鼠肾结石的作用研究

黎伟华，金学琴，吴 璟

（宁夏医科大学实验动物中心，宁夏 银川 750004）

肾结石（renal calculi）是由一些晶体物质（如钙、草酸、尿酸、胱氨酸等）和有机基质（如基质A、酸性黏多糖等）在肾脏异常聚积所致，是泌尿系统的常见病和多发病［1-2］。 近年来我国肾结石的发病率居高不下（南方24%左右，北方14%左右），且复发率极高［3］。 该病男性较女性易发，且易发生于青壮年［4］，主要表现为腰腹部绞痛、腹胀、恶心、呕吐、血尿等症状，目前临床多用手术和体外碎石的方法治疗，损伤较大，尤其对肾损伤严重，且有复发的可能，治疗效果不理想。中医认为，肾结石为肾虚气化失司，湿热煎熬成石，结石阻塞尿路，气机升降紊乱，气滞不通，水道不行，则肾盂积水，故腰腹部绞痛，甚至随冲气上逆犯胃而恶心呕吐［5-7］。

结石通片主要由广金钱草、石韦、鸡骨草等中药材组成， 为临床较常用的中成药， 具有清热利尿、通淋排石、镇痛止血之效［8-10］。 目前对结石通片急性毒性的评价及其对乙二酰胺致大鼠肾结石的调节作用鲜有报道。 该试验通过研究结石通片对小鼠的急性毒性作用、 大鼠利尿作用及其对乙二酰胺致大鼠肾结石的影响， 了解其对肾结石发挥的作用， 为临床进一步对结石通片利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 药品及试剂

结石通片 （广东恒诚制药有限公司， 批号：1503105；规格：0.264 g/片，2 g 原药材/片）；乙二酰胺 （广州市弘顺化工科技有限公司， 批号：HS001787）；生理盐水。

1.2 实验动物

SPF 级ICR 小鼠（18～22 g）40 只，SD 大鼠78只，雌、雄各半，由宁夏医科大学实验动物中心提供，质量合格证号［SCXK 2015-0001］。 实验动物均饲养于屏障环境内［SYXK（宁）2015-0001］，自由进食饮水。

1.3 方法

1.3.1 小鼠急性毒性试验［11-13］经预试验证明，结石通片几乎无毒，无法进行半数致死量（LD50）的测定试验， 故采用最大耐受量试验方法测定该样品的毒性。 取健康ICR 小鼠40 只，分为给药组和对照组（生理盐水组），每组20 只，雌、雄各半，体重为（20.3±1.41）g，禁食16 h，将结石通片配制成溶液，15 h 内连续灌胃给药5 次， 共计给予该药21.4 g/（kg·BW），对照组给予等量生理盐水，连续观察7 d，记录体重变化并观察动物有无死亡。 第8 天将动物解剖后肉眼观察动物脏器有无明显的病理改变。

1.3.2 对大鼠利尿作用的影响取SD 大鼠36只，雌、雄各半，体重为（247.7±17.4）g，随机分为3组，分别为对照组、低剂量和高剂量（给予5%和10%结石通片溶液）组，放入代谢笼2 d 后开始试验。试验前对大鼠以1.5 mL/（100 g·BW）生理盐水灌胃， 记录此后24 h 的排尿量； 给药组分别以5%、10%结石通片溶液给大鼠灌胃1.5 mL/（100 g·BW）， 对照组仍以生理盐水灌胃1.5 mL/（100 g·BW），记录给药后24 h 的排尿量。

1.3.3 对乙二酰胺致大鼠肾结石的影响取雄性SD 大鼠42 只，体重为（212.5±19.2）g，分为对照组、低剂量组和高剂量组，每组14 只。 3 组均饲喂掺入2%乙二酰胺的常规饲料，低、高剂量组分别将5%、10%结石通片溶液给大鼠灌胃1.5 mL/（100 g·BW·d），连续给药5 d，第6 天将大鼠称重后处死，取出肾脏称重后剖开，用解剖显微镜观察。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 急性毒性试验小鼠体重变化情况

给药后小鼠没有不适表现， 通过连续7 d 观察，给药组小鼠排泄、饮食、饮水均表现正常，没有异常情况出现，与对照组比较，体重无显著（P＞0.05）差异，结果见表1。

2.2 对大鼠利尿作用的影响

由表2 可见， 以5%、10%结石通片溶液给大鼠灌胃［1.5 mL/（100 g·BW）］后，低剂量组和高剂量组大鼠24 h 排尿量明显增加， 与给药前比较，差异极显著（P＜0.01）；并且24 h 排尿量随着给药剂量的加大而增加，低、高剂量组给药前后的尿量差值与对照组相比，差异极显著（P＜0.01）。 对照组24 h 排尿量无明显的变化（P＞0.05）。

表1 结石通片给药前后小鼠体重变化情况分析（±S） 单位：g

表1 结石通片给药前后小鼠体重变化情况分析（±S） 单位：g

注：与对照组相比，无*标注表示差异不显著（P＞0.05）。

时间给药前第3 天第4 天第5 天第6 天第7 天对照组（n=20）给药组（n=20）雌雄雌雄19.44±0.62 21.54±0.65 22.95±0.58 23.82±0.53 24.64±0.52 25.43±0.51 20.65±1.13 22.39±1.12 23.60±1.04 24.45±1.04 25.21±1.03 26.04±1.03 19.62±0.54 21.61±0.50 22.99±0.50 23.74±0.47 24.31±0.47 24.94±0.50 20.43±0.80 22.67±0.88 23.69±0.75 24.39±0.69 24.99±0.70 25.63±0.71

表2 结石通片对大鼠利尿作用的影响（±S）

表2 结石通片对大鼠利尿作用的影响（±S）

注：与给药前排尿量相比，标注*表示差异极显著（P＜0.01），无*标注表示差异不显著（P＞0.05）；与对照组相比，标注**表示差异极显著（P＜0.01）。

组别低剂量组高剂量组对照组动物数/只12 12 12剂量/（mg/kg）75 150-24 h 排尿量/mL给药后10.30±0.73*14.90±0.91*8.17±0.61给药前7.67±0.54 8.23±0.67 7.95±0.58差值/mL 2.63±0.32**6.67±0.41**0.22±0.18

2.3 对乙二酰胺致大鼠肾结石的影响

试验的第6 天将大鼠称重后处死， 取出肾脏称重后剖开， 用解剖显微镜观察可见对照组的肾脏内有大量的泥沙样结晶，呈米黄色，主要分布在肾髓质，在肾盂、肾盏、肾乳头处可见大量游离的结石。 两个结石通片给药组的肾脏内有少量的米黄色结晶， 个别有少量的小结石， 随着剂量的增加，结晶和结石的数量明显减少。 经统计学处理，两个结石通片给药组的形成结石动物数量与对照组相比在P＜0.01 或P＜0.001 水平上有极显著差异（见表3）。

3 讨论

目前肾结石的发病率较高， 发病急， 疼痛剧烈，严重影响生活［14］。临床治疗的方法多采用体外冲击波碎石，该方法对小结石效果明显，而无法使过大结石或位置不理想的结石排出， 且治疗时间长，取净率低，复发率高［15-17］。结石通片为收录于卫计委药品标准的成方制剂，是由广金钱草、石韦、茯苓、车前草、海金沙等制成的一种中成药，可用于治疗泌尿系统感染、膀胱炎、肾炎水肿、尿路结石、血尿、淋漓混浊、尿道灼痛等症［18-20］。 近年来关于结石通片的研究主要集中在成方分析和质量控制等方面，对其急性毒性、利尿作用和肾结石的调节作用报道较少。 该研究通过结石通片急性毒性试验发现， 小鼠对结石通片的最大耐受量大于21.4 g/（kg·BW），根据急性毒性分级标准，结石通片实际无毒。 通过结石通片对大鼠利尿作用的研究发现， 与对照组比较， 随着结石通片给药剂量的增加，大鼠的排尿量显著增加。 同时，结石通片对乙二酰胺诱导的大鼠肾结石具有明显抑制作用，与对照组比较，大鼠结石形成率明显降低，肾重比明显降低，且随剂量的增加，效果更好。 该试验对结石通片急性毒性的研究结果， 为临床用药剂量的选择提供了参考。研究结果提示，结石通片对大鼠的利尿作用较佳，且对肾结石的抑制作用明显，为临床开发中药制剂治疗肾结石提供了依据。

表3 结石通片对大鼠乙二酰胺致肾结石的影响（±S）

表3 结石通片对大鼠乙二酰胺致肾结石的影响（±S）

注：与对照组相比，标注*表示在P＜0.01 水平差异极显著；标注**表示在P＜0.001 水平差异极显著。

组别低剂量组高剂量组对照组动物数/只14 14 14剂量/（mg/kg）75 150-体重/g 234.0±29.4*243.1±23.4*192.8±20.5肾重/g 1.49±0.25 1.19±0.19 1.58±0.25肾重比/（g/kg）6.32±0.52*4.93±0.58*8.18±1.14形成结石动物数/只6*3**13