南瓜子氨酸对昆明小鼠的急性毒性试验

郎平，赵爱云，罗慧丽，徐春艳，王甜

（塔里木大学动物科学学院/新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室 843300）

南瓜子是一种常见的中药，含多种氨基酸、维生素、矿物质、甾醇、脂肪酸及多糖等成份，具有抗氧化、抗菌作用和抗癌等作用，临床可用于治疗前列腺疾病、糖尿病和肠道寄生虫病等疾病[1,2]。 南瓜子作为驱虫药，历来受到人们青睐，其活性成份主要为南瓜子氨酸，可使宿主体内寄生虫虫体进入麻痹状态，能抑制血吸虫成虫生长发育，驱除畜禽肠道寄生蛔虫和绦虫等虫体，特别是南瓜子和槟榔联合用药可有效驱除人体肠道寄生的绦虫[3]。本试验以昆明小鼠为动物模型， 通过灌胃给药进行南瓜子氨酸的急性经口毒性评价， 以期为南瓜子氨酸在动物用药的临床应用方面提基础资料。

1 材料和方法

1.1 药品来源

南瓜子氨酸购于武汉东康源科技有限公司。

1.2 实验动物及饲养

SPF 级昆明小鼠购于新疆医科大学实验动物中心，6～8 周龄，体重20～25g。 动物饲养于塔里木大学实验动物中心，光线昼夜节律12h，室温18℃～25℃、湿度40%～70%，噪音小于60dB。

1.3 实验动物分组和给药方案

40 只雌性昆明小鼠根据体重随机分为4 组，每组10 只。空白对照组灌服相同体积的生理盐水，低剂量组（0.4g 南瓜子氨酸/mL）、中剂量组（0.8g 南瓜子氨酸/mL）和高剂量组（1.6g 南瓜子氨酸/mL），以0.2mL/10g 体积经口灌服南瓜子氨酸。

1.4 临床症状和病理变化观察

给药后2h、4h、8h、12h、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、14d， 观察并记录每只小鼠饮食、饮水和被毛等状况。 每天记录小鼠体重变化情况。 给药14d 观察期结束后，解剖所有小鼠，摘取心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏，肉眼观察脏器变化情况，分别记录脏器重量，计算平均脏器指数。

1.5 血常规指标测定

观察期结束后，摘除小鼠眼球，收集1mL 抗凝血，用全自动兽用血液分析仪（Exigo，瑞士）测定血液中：白细胞值（WBC）、单核细胞占比 （Mon%）、 红细胞分布宽度数 （RDWa）、 血小板值（PLT）、淋巴细胞数（Lym）、淋巴细胞占比（Lym%）、红细胞计数（RBC）、红细胞压积（HCT%）、平均红细胞体积（MCV）、平均细胞血红蛋白（MCH）、平均红细胞体积分布宽度（RDW%）、平均血小板体积（MPV）等指标。

1.6 统计学分析

所有计数资料均用均数±标准差（±SD）表示，采用SPSS 21.0软件方差分析（one-way ANOVA）中LSD 法检验进行数据分析，表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 南瓜子氨酸对昆明小鼠体重的影响

整个试验过程中，不同组别昆明小鼠均未出现死亡，各组昆明小鼠活动未见明显异常、饮食饮水正常、排便正常，皮肤和被毛无明显变化。 给药后第0d 到第14d 各组昆明小鼠体重均呈现递增趋势， 不同剂量南瓜子氨酸给药组与空白对照组昆明小鼠的体重之间，无统计学差异意义（P＜0.05），见图1。

图1 不同试验组昆明小鼠体重变化情况

2.2 南瓜子氨酸对小鼠血常规指标的影响

与空白对照组比较，南瓜子氨酸低、中、高剂量组昆明小鼠的血常规指标中Lym、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW、MPV 的值无统计学差异 （P＞0.05）；WBC、Lym 和Mon的值具有统计学差异 （P≤0.05）， 但各指标值均在正常范围值内。 在高剂量组，与空白对照组昆明小鼠RDWa、PLT 的值相比较，具有统计学差异（P≤0.05）。

随给药剂量增加，昆明小鼠WBC 呈减少趋势，高剂量组与对照组之间统计学差异显著（P＜0.05）；Mon%呈降低趋势，中剂量和高剂量组与空白对照组之间均统计学差异显著 （P＜0.05）；RDWa 呈增加趋势， 高剂组与空白对照组之间统计学差异显著（P＜0.05）；PLT 呈增加趋势，高剂量组与空白对照组之间统计学差异显著（P＜0.05）。

表1 不同试验组昆明小鼠血常规指标

2.3 南瓜子氨酸对昆明小鼠脏器的影响

给药14d 后解剖所有昆明小鼠，摘取脏器称重，与空白对照组相比较，南瓜子氨酸低、中、高剂量组昆明小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏的重量均无统计学差异（P＞0.05）；然而，随着用药剂量增大，肝脏重量呈逐渐下降趋势，见图2。

图2 不同试验组昆明小鼠的脏器重量

3 讨论

南瓜子广泛应用于中药治疗和食疗保健等， 具有较好的大众基础。 本研究显示， 经口灌服昆明小鼠不同剂量南瓜子氨酸后，均未出现中毒或死亡现象，其脏器未见明显异常。 血常规中的6 项指标（RBC、HCT、MCV、MCH、RDW 和RDWa）虽有波动变化， 但均在正常范围值之内；4 项指标 （WBC、Lym、Lym%、Mon%）随给药剂量增加呈现逐渐上升或下降趋势，但均在正常范围值之内。 淋巴细胞和单核细胞比值（LMR）可用来评估机体免疫功能系统[4]，本研究结果显示白细胞中淋巴细胞比例下调，单核细胞比例上调，提示LMR 的值可能会出现偏离，南瓜子氨酸可能会引起小鼠机体免疫功能异常； 血小板的两项指标中，MPV 无明显变化，但PLT 值随给药剂量的增加而增加，提示南瓜子氨酸可能引起骨髓活动增强，从而引起血小板数增加，有利于促进机体生理性止血和血管上皮细胞恢复。

前期研究发现，南瓜子与其他中药提取物联合应用，具有一定的抗弓形虫效果[5]。 李蕴玉等[6]研究发现，0.1g/mL 南瓜子水提液与柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）卵囊共培养4d，能显著抑制卵囊孢子化。 也有研究发现，每天早晨饲喂南瓜瓤给空腹的羊，连续2～3d，与南瓜子驱除羊体内绦虫具有同样功效，分析其有效成分均为南瓜子氨酸[7]。 以上研究均表明，南瓜子氨酸无明显毒性作用，食疗和药用均安全可靠，临床上可作为常规添加剂，用于动物的驱虫和保健。