卵巢透明细胞癌中HNF-1β与OPN的相关性及临床意义

屈玉玲，王 晶，朱嘉晖，刘晓莉，翟学峰

卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma, OCCC)和卵巢子宫内膜样癌(ovarian endometrioid carcinoma, OEC)与子宫内膜异位囊肿密切相关，被称为子宫内膜异位症相关性卵巢癌(endometriosis-associated ovarian endometrioid carcinoma, EAOC)[1]。OCCC与常见的卵巢浆液性癌相比，其具有铂类化疗耐药机制，常导致患者治疗失败，5年生存率明显降低[2]。HNF-1β高表达于OCCC，且可能是联系分泌中晚期内膜、内膜异位症和OCCC的遗传学纽带[3-4]。同时，HNF-1β参与形成了OCCC的某些主要生物学特性，如癌细胞内部的糖原累积、低细胞增殖及产生较强的抗凋亡和对化疗药物的耐药性等[4]。骨桥蛋白(osteopontin, OPN)属于分泌型糖激化磷酸蛋白，其介导的信号通路参与多种肿瘤的发生、发展。OPN启动子区域具有HNF-1β功能性结合位点[5]，HNF-1β可能与OPN结合后参与内膜异位症癌变为透明细胞癌的过程，并维持肿瘤细胞的生物学行为及化疗耐药。本实验初步探讨HNF-1β与OPN在子宫内膜异位症及OCCC发生、发展中的作用及可能机制，为子宫内膜异位症的发生及癌变为OCCC寻找新的药物靶点提供必要的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料收集2011～2019年宁夏医科大学总医院病理科存档的24例OCCC，卵巢内膜异位症26例，增生期子宫内膜24例，OEC 16例，分泌期子宫内膜22例。112例患者均为女性，年龄19～72岁，平均49岁。患者均未行放、化疗，子宫内膜标本来源于子宫肌瘤切除术标本。

1.2 免疫组化标本均经10%中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，5 μm厚切片，HE染色，显微镜下观察。免疫组化染色采用EnVision两步法，一抗HNF-1β、OPN均购自上海圣克鲁斯公司。

1.3 判断标准HNF-1β阳性定位于细胞核，OPN阳性定位于细胞质，免疫组化染色以黄色或棕黄色颗粒为阳性，根据阳性染色细胞百分率和细胞着色强度进行判断[6-7]。根据细胞着色强度计分：无着色为0分；淡黄色为1分；浅褐色为2分；深褐色为3分。根据阳性细胞百分比计分：无阳性细胞为0分，1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。最后将两项评分结果相乘：0分为阴性(-)，1～5分为弱阳性(+)，6～9分为中等阳性()，10～12分为强阳性()。

1.4 统计学分析采用SPSS 21.0软件进行统计学分析，计数资料以例数表示；不符合正态分布计量资料用中位数(四分位数)描述，组间比较用非参数秩和检验和χ2检验分析。两个指标间的相关性用Spearman相关性分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HNF-1β在不同组织中的表达免疫组化结果显示HNF-1β在OCCC组中的表达及中～高阳性率高于卵巢内膜异位症组，差异有统计学意义(P<0.05)；HNF-1β在卵巢内膜异位症组中的表达及中～高阳性率高于增生期子宫内膜组(P<0.05)；其在OEC组中的表达低于OCCC组(P<0.05，表1，图1)。

2.2 OPN在不同组织中的表达OPN在OCCC组中的表达及中～高阳性率高于卵巢内膜异位症组(P<0.05)；OPN在卵巢内膜异位症组中的表达及中～高阳性率高于增生期子宫内膜组(P<0.05)；其在OEC与OCCC组中的表达差异无显著性(P>0.05，表1，图2)。

2.3 OPN与HNF-1β的相关性本组经Spearman相关性分析，在增生期子宫内膜、分泌期子宫内膜、卵巢内膜异位症及OCCC中OPN与HNF-1β表达呈正相关(P<0.05)；而在OEC中HNF-1β与OPN表达无显著相关性(P>0.05，表2)。

3 讨论

目前，HNF-1β已广泛用于OCCC的鉴别诊断，敏感性约85.2%，特异性约76.5%[8]；本实验结果显示，其在OCCC中阳性率约100%。在OCCC发生前，卵巢内膜异位症的上皮细胞就已发生HNF-1β异常表达。本实验中卵巢内膜异位症组的上皮细胞均有HNF-1β表达(排除个别无上皮细胞或上皮细胞过度萎缩的病例)，但大部分阳性染色定位于细胞质，40%～70%的上皮细胞出现细胞核染色。部分文献对不典型的卵巢内膜异位症单独进行分析，由于尚无明确的临床病理诊断标准，且不能排除内膜异位症中长期炎症及出血的刺激因素所致，本组并未区分此类型。另外，HNF-1β只有转运进入细胞核并与细胞核定位信号(nuclear localization signal)结合后才能发挥其功能[9]，这也是本组只计数HNF-1β细胞核染色为阳性的原因。Shen等[10]发现，卵巢内膜异位症上皮细胞过表达HNF-1β后，其形态增大、扁平并向OCCC的形态学方向发展。本组有部分病例的内膜异位症上皮细胞高表达HNF-1β，并出现OCCC肿瘤细胞的形态特点，本组认为维持HNF-1β高表达可能在内膜异位症癌变为OCCC的发生、发展中起重要作用。多项研究发现[11]，HNF-1β与糖酵解活性相关(又称为Warburg Effect),并参与化疗耐药机制中，下调OCCC中HNF-1β表达可显著增加顺铂和紫杉醇的细胞毒性，提示其作为OCCC分子靶向治疗的良好前景。

本实验结果显示，OPN在增生期子宫内膜内弱表达或不表达，而在内膜异位症中表达显著升高。卵巢内膜异位症的囊液因反复出血，高度富含铁离子，在低氧含量及高氧化压力的环境下，内膜异位症的上皮细胞通过高表达OPN激活细胞的自身保护系统[12-13]，从而能在这种恶劣的环境中存活下来，同时也为癌变的发生奠定基础。OCCC中OPN高表达与患者顺铂耐药的机制密切相关。Lu等[14]对肝癌顺铂耐药机制进行详细的研究发现，OPN通过控制有氧糖酵解，抑制凋亡、促进肿瘤转移以及增加对顺铂的耐药性。OPN的生物学功能提示其科学研究价值，以及其与HNF-1β联合参与OCCC耐药机制的可能性。

由于OPN启动子区域内含HNF-1β功能性结合位点，HNF-1β被认为是最有可能直接作用的靶基因[15]。本实验结果发现，HNF-1β与OPN在子宫内膜、卵巢内膜异位症及OCCC中呈高度正相关，两者可能协同参与OCCC的癌变过程及其化疗的耐药。另外，在OEC中HNF-1β表达与OPN并无相关性，提示虽同为卵巢异位症相关性卵巢癌，但两者的癌变机制并不相同，与Kato等[15]的报道一致。

综上所述，HNF-1β、OPN可能参与OCCC的发生、发展及其化疗耐药，且两者关系密切。阻断HNF-1β表达或与OPN的相互作用，可以为新型抗肿瘤药物的研发提供新思路，有望成为OCCC新的治疗靶点。