水产品中喹乙醇类药物残留检测前处理条件的优化
2021-03-31修磊杨翼羽杨扬李霞杨立军唐诗王义江
修磊 杨翼羽 杨扬 李霞 杨立军 唐诗 王义江
(1.吉林省长春市水产品质量安全检测中心，吉林 长春 130000；2.长春市水土保持工作站，吉林 长春 130000；3.长春市水务局，吉林 长春 130000)
喹乙醇又名喹酰胺醇,是一类具有促生长作用的饲料添加剂,可以提高饲料转化率和利用率,治疗和抑制鱼病的发生,对于鱼类的败血症等病症有着良好的防治作用。但是为了追求产量和成活率,大量的使用喹乙醇会引起中毒和导致畸形,因此检测该药的残留便被广泛关注,很多国家对于喹乙醇在养殖和治疗防治方面已经明令禁止。目前我国对于喹乙醇的检测主要依据液相色谱法进行检测,本文通过对喹乙醇前处理步骤的优化,使得所检测的试验结果灵敏度更高,结果更精确,以满足水产品检测以及相关研究的要求[12-28]。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器与设备
玻璃砂芯漏斗、高速均质机、旋蒸仪、离心机、漩涡混匀器、Agilent 1100 (配有紫外检测器) 高效液相色谱。
1.1.2 试剂与药品
色谱级别的乙腈、正己烷、甲醇、喹乙醇标准品、助滤剂。
1.1.3 样品及其制备
取出鱼、虾、蟹、鳖等水产品肌肉部分,除净脂肪和结締组织,样品经过简单处理后待用,测试前解冻,均制成肉糜状。
1.2 方法
1.2.1 标准溶液的配制
精确称取喹乙醇标准品用甲醇定容为10μg·mL-1,需置于棕色容量瓶内避光冷藏保存,保存期为1 个月。
1.2.2 工作曲线的制备
将标准品稀释成适当的浓度梯度,进行图像采集,工作曲线的纵坐标为峰面积,样品含量为横坐标,制作曲线图谱。样品的出峰时间约为4.0min。
1.2.3 色谱条件
色谱柱、流动相、色谱温度以及检测波长按照标准执行。
1.2.4 加标样品的制备
称取待测样品空白样适量,加入标准品溶液,各样品作2 个平行样,根据公式计算得到加标浓度为20μg·kg-1。
1.2.5 数据的统计分析
采用SPSS 17.0 统计软件进行多因素方差分析,并应用LSD 多重检验比较各水平的均值,差异显著性水平(P) 值设定在0.05。
2 前处理的单因素试验
2.1 样品加标及旋涡混悬提取
精确量取喹乙醇标准溶液置于待测鱼糜中充分混匀。精确称取待测加标样品置于50mL 离心管中,再经过助溶、乙腈提取、旋涡混悬混匀、离心重复操作合并上清液[2,5,8,11,12]。
2.2 乙腈提取物减压浓缩
将合并后上清液经正己烷净化后置于鸡心瓶中,减压浓缩后用流动相溶解残渣,经滤膜过滤后待用[2,5,8,11,12]。
表1 前处理单因素试验及水平
3 结果
3.1 喹乙醇标准曲线及标准液相色谱图
喹乙醇的标准曲线见图1,线性良好,喹乙醇的标准曲线数据见图2。
3.2 加标量对喹乙醇残留加标回收率的影响
不同加标量下待测样品液相色谱图分别见图3～5,回收率结果见表2。
表2 不同加标量下回收率结果
根据标准曲线,计算结果显示加标量为20μg·kg-1时回收率最高。
3.3 乙腈提取物减压浓缩时间对喹乙醇类药物残留加标回收率的影响
3 次不同减压浓缩时间下待测样品液相色图谱分别见图6 至图8,回收率结果见表3。
表3 不同减压浓缩时间下回收率结果
根据标准曲线,计算结果显示乙腈提取物减压浓缩时间为15min 回收率最高。
3.4 旋涡混悬时间对喹乙醇类残留加标回收率的影响
不同旋涡混悬时间下待测样品液相色图谱分别见图9 至图11,回收率结果见表4。
表4 不同旋涡混悬时间下回收率结果
根据标准曲线,计算结果显示旋涡混悬时间在7min 时回收率最高。
3.5 多因素方差设计及分析
在单因素试验的基础上进行3 因素3 水平的方差分析,所选的因素见表5,SPSS 多因素方差设计及分析[28-30]见表6～11,图12。
表5 选用因素水平
表6 多因素方差设计方案及结果
表7 多因素方差主体效应的检验
表8 估算边际均值加标量
表9 减压浓缩时间
表10 旋涡混悬时间
表11 LSD 多重检验
因素A 代表加标量；因素B 代表乙腈提取物减压浓缩时间；因素C 代表样品旋涡混悬时间；1、2、3分别代表3 个水平；P 代表差异显著性。结果分析表明,因素A 和C 的P 值分别为0.179 和0.117,均对回收率的作用不明显(P ＞0.05),因素B 的P 值为0.020,具有显著作用(P ＜0.05),因此最优组合优先选用因素B。通过对因素B 的多重比较,水平3 显著优于其它两组(P＜0.05)。由于因素A 和C 无显著影响(P＞0.05),故可选择边际均值最优进行组合为A2B3C2。
4 结论
SPSS 多因素方差优化得到的最佳前处理条件是加标量20μg·kg-1,乙腈提取物减压浓缩时间15min,旋涡混悬时间5min。
